国家自然科学基金(81170004)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：吴本权张天托杨洋朱家馨石云锋更多>>
- 相关机构：中山大学附属第三医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目吴阶平医学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MRSA对巨噬细胞系RAW264.7自噬的影响被引量：2
- 2016年
- 目的探讨耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)感染对于巨噬细胞自噬的影响。方法以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,以革兰阳性菌MRSA感染3 h组作为实验组,设立空白对照组(对照组),另设MRSA感染0、30、60、120、150、180 min组。以MRSA感染细胞后,荧光定量PCR检测自噬相关基因5(ATG5)、ATG7、ATG12的表达情况,蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白Beclin1及微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达情况。结果感染MRSA 3 h后,实验组RAW264.7细胞中ATG5、ATG7、ATG12的mRNA表达水平均高于对照组(P均<0.01),LC3蛋白相对表达量也比对照组增加(P<0.01),2组间Beclin1蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。ATG7、ATG12 mRNA和LC3及Beclin1蛋白相对表达量均在感染MRSA 180 min组最高,ATG5 mRNA在感染MRSA 150 min组最高。结论 MRSA可以诱导巨噬细胞发生自噬,自噬基因激活存在先后顺序,自噬可能为巨噬细胞吞噬胞外菌MRSA的另一种免疫灭活形式。
- 朱军吴本权杨洋朱家馨张天托
- 关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌巨噬细胞自噬
- MUC1 mRNA体外负载树突状细胞诱导细胞毒性T细胞对非小细胞肺癌的杀伤作用被引量：3
- 2014年
- 目的:将体外扩增的黏蛋白1(MUC1)mRNA转染入成熟的树突状细胞(DCs),观察其体外诱导的特异性抗肿瘤效应。方法:将分离提纯的单核细胞培养诱导为DC并用流式细胞术鉴定。构建pcDNA3.1(+)-MUC1质粒,体外转录为mRNA,电穿孔法转染DCs。定量PCR检测转染的DCs中MUC1的表达;MTT法检测T细胞增殖情况;流式细胞术检测CD8+在T细胞的表达;LDH释放法测定细胞毒性,ELISA检测IFN-γ分泌水平。结果:流式细胞术结果表明成熟DCs标志表型的表达明显高于对照组。定量PCR结果说明转染后的DCs MUC1 mRNA相对表达量增高。转染组DCs与T细胞按1∶10共培养时,刺激增殖能力明显高于未转染组,且CD8+T细胞表达率高于未转染组,诱导产生特异性的细胞毒性T细胞杀伤表达MUC1蛋白的靶细胞,而未转染组的杀伤作用较弱。转染组DCs与T细胞共培养的上清中IFN-γ的分泌水平高于未转染组。结论:电穿孔法可以将MUC1 mRNA成功转染至DCs,产生特异性杀伤效应,为以MUC1为靶点的非小细胞肺癌的免疫治疗提供实验和理论依据。
- 巴俊慧吴本权王艳红刘慧杨洋石云锋罗进梅张天托
- 关键词：树突状细胞黏蛋白1电转染抗肿瘤免疫
- 甲型流感病毒H1N1/FM1对小鼠巨噬细胞NLRP3炎症小体信号通路的影响被引量：5
- 2017年
- 目的探讨甲型流感病毒H1N1/FM1感染小鼠巨噬细胞不同时间点NOD样受体P3(NLRP3)炎症小体信号通路的变化。方法以小鼠单核巨噬细胞系RAW264.7为研究对象,甲型流感病毒H1N1/FM1感染1周作为实验组,感染6 h作为对照组,ELISA检测细胞培养上清中IL-1β的浓度,荧光定量PCR检测炎症小体信号通路中NLRP3、caspase-1、IL-1β的mRNA相对表达量,蛋白免疫印迹法检测NLRP3、caspase-1、cleaved-caspase-1的蛋白相对表达量,免疫荧光染色法定性检测NLRP3的蛋白表达。结果细胞培养上清液中IL-1β的浓度实验组高于对照组(P<0.01),其NLRP3 mRNA和蛋白的表达量低于对照组降低(P均<0.05),caspase-1、IL-βmRNA相对表达量以及caspase-1、cleaved-caspase-1蛋白相对表达量均高于对照组(P均<0.05)。免疫荧光染色中实验组NLRP3蛋白荧光强度弱于对照组。结论甲型流感病毒H1N1/FM1感染小鼠巨噬细胞可以激活NLRP3炎症小体信号通路,促进IL-1β的分泌,且在感染后期(约1周)有更强的激活效应。
- 师小函吴本权石云锋杨洋朱家馨张天托
- 关键词：白介素-1Β
- 莫西沙星对脂磷壁酸诱导的人肺泡巨噬细胞凋亡及炎症因子释放的影响
- 2012年
- 目的探讨脂磷壁酸（LTA）对人肺泡巨噬细胞（AM）凋亡及炎症因子释放的影响和莫西沙星（MXF）对其反应的抑制作用。方法收集、提纯及体外培养人AM，LTA刺激4h后，加或不加MXF与其共孵育，于各实验终点用MTr法计算细胞相对活力，光学显微镜观察细胞形态，流式细胞术检测细胞凋亡率，RT-PCR法检测TLR2、IL-1B、IL-8及TNF-α的mRNA水平，ELISA检测IL-8蛋白水平，验证RT-PCR。结果LTA对AM有细胞毒性，并呈浓度递增关系（P〈0．05），MXF对AM活力无影响（P〉0．05），且可抑制LTA的毒性作用（P〈0．05）。LTA促进AM凋亡（P〈0．05），此作用可被MXF抑制（P〈0．05）。TLA上调AM中TLR2、IL-1β、IL-8及TNF-α的mRNA表达（P〈0．05），各峰值时间及峰值分别为：12h（3．56±0．03）、6h（46．63±7．06）、12h（28．07±1．24）、3h（2．34±0．50），上调24h IL-8蛋白水平，上述效应可被MXF抑制。结论LTA对人AM有细胞毒性，促进AM凋亡，上调AM中TLR2及炎症因子IL-1β、IL-8及TNF-α的表达，MXF抑制LTA诱导的AM炎症及凋亡，可能在革兰氏阳性菌肺炎中发挥杀菌、抗炎、保护宿主AM免疫活性的作用。
- 罗进梅吴本权刘慧李洪涛黄静朱家馨张天托
- 关键词：莫西沙星脂磷壁酸炎症
