江苏省自然科学基金(BK20080778)
- 作品数：5 被引量：7H指数：1
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- 相关机构：南京医科大学第二附属医院南京医科大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体的构建及表达
- 2009年
- 【目的】构建LYRM1基因绿色荧光蛋白融合载体,进而观察LYRM1基因编码蛋白在细胞内的定位情况。【方法】运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-N2,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,激光共聚焦显微镜下观察融合蛋白的表达情况。【结果】PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确。激光共聚焦显微镜下观察到pEGFP-N2转染的细胞中绿色荧光均匀分布于整个细胞,而pEGFP-LYRM1转染的细胞中绿色荧光主要集中在细胞核区域。【结论】成功构建了LYRM1绿色荧光蛋白融合载体,LYRM1编码蛋白在细胞中定位于胞核中。
- 邱洁郭锡熔周晓玉程锐曹兴国王玢张敏
- 关键词：肥胖绿色荧光蛋白亚细胞定位
- 人类肥胖相关新基因LYRM1真核表达载体的构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立
- 2009年
- 目的:构建人LYRM1基因的真核表达载体,转染3T3-L1前体脂肪细胞,建立稳定过表达人LYRM1基因的3T3-L1前体脂肪细胞系。方法:运用RT-PCR技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,将其亚克隆到真核表达载体pcDNATM3.1/myc-His B,脂质体转染3T3-L1前体脂肪细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的3T3-L1前体脂肪细胞系,并利用Westernblot方法鉴定其表达。结果:PCR、酶切鉴定及测序结果表明重组质粒构建正确。建立了稳定转染LYRM1的3T3-L1前体脂肪细胞,成功地表达目的基因。结论:LYRM1真核表达载体的成功构建及稳定转染3T3-L1细胞系的建立为进一步研究其功能奠定了良好的实验基础。
- 邱洁张敏周晓玉程锐曹兴国王玢郭锡熔
- 关键词：逆转录聚合酶链反应转染
- 人类肥胖相关新基因LYRM1的克隆及其生物信息学分析被引量：5
- 2009年
- 目的克隆人类肥胖相关新基因LYRM1,并对其进行初步的生物信息学分析。方法以人网膜脂肪组织为模板,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术从人网膜脂肪组织中分离LYRM1基因的完整编码框,并将其克隆到TA克隆载体,RT-PCR法鉴定并测序。利用一系列生物信息学软件或数据库初步分析预测LYRM1基因及其编码蛋白的基因结构、染色体定位、蛋白质理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域、疏水性/亲水性、可溶性、结构域及亚细胞定位等。结果扩增出包含LYRM1基因开放阅读框的cDNA片段,采用RT-PCR及测序方法证实成功克隆出目的片段。生物信息学分析显示,LYRM1基因cDNA全长1589bp,开放阅读框长369bp,编码122个氨基酸,相对分子质量13270;定位于染色体16p11.2区域,含4个外显子和3个内含子。蛋白序列分析显示LYRM1基因编码蛋白无跨膜螺旋结构,为一非分泌蛋白。亚细胞定位分析提示其定位于胞核的可能性较大,蛋白结构域分析提示N端存在一LYR结构域,可能参与线粒体功能及能量代谢。蛋白序列比对提示LYRM1基因编码蛋白相对保守。结论LYRM1基因的成功克隆及生物信息学分析为进一步研究该基因奠定了基础。
- 邱洁郭锡熔周晓玉程锐张春梅季晨博高春林张敏
- 关键词：肥胖克隆生物信息学
- 人类肥胖相关新基因LYRM1多克隆抗体的制备及鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的:制备兔抗人LYRM1蛋白的多克隆抗体并对其进行初步鉴定。方法:预测LYRM1蛋白的抗原表位,设计并合成出一段由17个氨基酸组成的多肽,将合成肽与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为抗原,免疫新西兰大白兔,制备抗LYRM1蛋白的多克隆抗体,利用ELISA、Westernblot鉴定其效价及特异性,并将该抗体用于人脂肪组织LYRM1的表达检测。结果:制备了兔抗人LYRM1蛋白的多克隆抗体并证实此抗体效价较高、特异性较强。结论:采用人工合成多肽作为半抗原成功制备了人类肥胖相关新基因LYRM1的多克隆抗体。
- 邱洁张敏周晓玉程锐曹兴国王玢郭锡熔
- 关键词：肥胖合成肽多克隆抗体
- 人类肥胖相关新基因LYRM1在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化被引量：1
- 2009年
- 【目的】观察LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中表达水平的变化。【方法】体外培养人前体脂肪细胞,采用RT-PCR及Western-Blot技术检测LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化不同阶段(前体脂肪细胞;0、2、6、12 d)核酸及蛋白水平的表达变化。【结果】LYRM1基因在分化第2 d(Day2)时核酸及蛋白表达水平均明显上调,与各时段的表达水平差异有显著性(P<0.01),其余各组之间差异无显著性(P>0.05)。【结论】初步揭示了LYRM1基因在人前体脂肪细胞分化过程中的表达变化趋势。
- 邱洁郭锡熔周晓玉程锐曹兴国王玢张敏
- 关键词：肥胖细胞分化
