武汉市卫生局科研项目(WX10B13)
- 作品数：3 被引量：2H指数：1
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- 相关机构：武汉市医学科学研究所武汉大学更多>>
- 发文基金：武汉市卫生局科研项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 解整合素金属蛋白酶10基因慢病毒载体的构建及鉴定
- 2013年
- 目的:构建解整合素金属蛋白酶10(ADAM10)基因RNA干扰(RNAi)重组慢病毒载体,为进一步体内外实验研究提供基础。方法:筛选确定ADAM10基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与LentiLox3.7载体连接,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用重组慢病毒转导传代心肌细胞(H9C2),通过Western blotting检测心肌细胞ADAM10的蛋白表达。结果:获得的载体插入ADAM10的shRNA核苷酸链序列正确,包装的慢病毒颗粒转导心肌细胞,与对照组比较ADAM10 shRNA转染成功抑制ADAM10蛋白表达。结论:成功构建AD-AM10 shRNA慢病毒载体,为其在扩张型心肌病(DCM)中的生物学功能研究奠定基础。
- 李小鸥黄巍何兵周丽荣
- 关键词：RNA干扰慢病毒扩张型心脏病
- ADAM10真核表达载体的构建及其对MCF-7增殖迁移的影响被引量：1
- 2012年
- 目的构建ADAM10真核表达载体,观察稳定转染乳腺癌细胞MCF-7后对其增殖和迁移的影响。方法利用PCR技术扩增人ADAM10的基因片段,克隆入pcDNA3.1真核表达载体,阳性克隆通过PCR、酶切和测序鉴定。脂质体法将重组质粒转染MCF-7细胞,通过G418筛选出稳定转染ADAM10的细胞株,通过Western blot检测细胞ADAM10的表达,通过MTT法和Transwell法分别检测细胞的增殖和迁移变化。结果经PCR、酶切和测序鉴定证明ADAM10真核表达载体构建成功,Western blot结果显示稳定转染细胞的ADAM10蛋白高表达,MTT实验显示转染细胞增殖速度稍快于对照(P<0.05),Transwell结果显示转染细胞迁移能力比对照强(P<0.01)。结论成功构建ADAM10真核表达载体,稳定转染MCF-7细胞后可增强细胞的增殖和迁移,为进一步研究ADAM10生物学作用奠定基础。
- 黄巍李小鸥周丽荣黄晓刚刘桥
- 关键词：MCF-7细胞细胞迁移
- ADAM10基因RNA干扰重组慢病毒的转导对H9C2细胞N型钙粘蛋白的解整合素金属蛋白酶10加工途径的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建ADAM10基因RNA干扰重组慢病毒，观察其在N型钙粘蛋白底物加工过程中的重要性，为探求该加工途径在维持心肌组织结构形态和完整性中的作用打下基础。方法筛选确定ADAM10基因RNA干扰有效靶序列，合成靶序列的OligoDNA，与LentiLox3．7载体连接，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。用重组慢病毒转导心肌细胞（H9C2），通过Westernblotting检测心肌细胞N型钙粘蛋白及其C-端的CTFl片段的蛋白表达，流式细胞学实验检测N型钙粘蛋白在心肌细胞表面的表达，利用黏附实验检测转染前后心肌细胞黏附能力的变化。结果成功构建ADAM10shRNA慢病毒载体，包装慢病毒，转导心肌细胞。与阴性对照组相比，转染组心肌细胞N型钙粘蛋白表达提高，CTF1片段表达减少；细胞表面N型钙粘蛋白的表达增多；心肌细胞黏附能力提高。结论初步证明心肌细胞中ADAMIO在N型钙粘蛋白的加工水解过程中发挥重要作用，为进一步明确该水解途径在维持心肌细胞形态结构和完整性方面所起的作用打下了实验基础。
- 李小鸥黄巍周丽荣
- 关键词：RNA干扰ADAM10慢病毒
