内蒙古自治区自然科学基金(2013MS1163)
- 作品数：15 被引量：39H指数：4
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- 小鼠Cdc25B基因的真核表达载体构建及鉴定被引量：2
- 2019年
- 目的构建含有小鼠Cdc25B基因的真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B,并观察和验证其在真核细胞中的表达。方法目的基因Cdc25B经化学合成后,定向克隆至pcDNA3.1(+)真核表达载体中,经过限制性内切酶KpnⅠ和ApaⅠ进行双酶切和测序鉴定,构建真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B,应用脂质体法转染HEK293细胞,通过Western blot检测细胞内Cdc25B的表达。结果pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B真核表达载体构建成功,将其转染HEK293细胞48 h,提取细胞蛋白,利用Western blot检测到细胞内Cdc25B的表达,并且测序结果与预期结果一致。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-3xflag-Cdc25B。
- 周晓敏孟峻刘岚清
- 关键词：真核表达载体CDC25BHEK293细胞
- 胶体金免疫层析法检测乙型肝炎表面抗原应用评价被引量：2
- 2013年
- 目的对胶体金免疫层析法检测乙肝表面抗原(Hepatitis B surface antigens,HBsAg)的敏感性、特异性进行分析和初步评价。方法采用胶体金免疫层析(Gold Immunochromatography Assay,GICA)法,酶联免疫吸附(Enzyme-linked immunosorbent Assay,ELISA)法,对HBsAg定值血清和200份待测血清标本同时测定,对GICA法的测定结果进行分析评价。结果 GICA法的最小检出量≥1.0ng/ml,ELISA法的最小检出量≥0.5ng/ml,GICA法的敏感性低于ELISA法。与ELISA法相比,GICA法敏感度为91.1%,特异性为99.4%。结论 GICA法适用于HbsAg的急诊和初筛检查。
- 孟峻张保平王永祥董莉冯新平萨日那易青
- 关键词：乙肝表面抗原胶体金免疫层析法酶联免疫吸附实验
- 小鼠14-3-3ε蛋白基因的克隆及其真核表达载体的构建被引量：1
- 2015年
- 目的构建小鼠14-3-3ε真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,并观察其在真核细胞中的表达。方法通过反转录-聚合酶链反应从小鼠肝组织中获得编码14-3-3ε的cDNA,定向克隆至真核表达载体pcDNA3.1-ZEO(+)中,经酶切和测序鉴定正确后,应用脂质体转染HEK293细胞,并通过蛋白免疫印迹检测细胞内14-3-3ε的表达。结果构建了真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,将其转染HEK293细胞48h后,蛋白免疫印迹检测到细胞内14-3-3ε的表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε,为研究14-3-3ε在小鼠卵母细胞和小鼠-细胞受精卵G2/M转换中作用的研究奠定了基础。
- 孟峻侯艳军唐韬张永梅刘珊刘洋呼格吉乐
- 关键词：HEK293细胞真核表达载体
- 14-3-3蛋白功能的研究进展被引量：4
- 2015年
- 14-3-3蛋白家族是一组高度保守的可溶性酸性蛋白质,相对分子质量为（28~33）×103,广泛分布于各种真核细胞中。14-3-3蛋白有多个亚型,并且各亚型都有其特殊的功能,通常形成同二聚体或异二聚体而发挥作用,能够特异性地与磷酸化丝氨酸或苏氨酸肽段结合,参与多种信号转导途径。14-3-3蛋白参与细胞内众多的重要生命活动过程,功能涉及到细胞周期调控、信号转导、细胞凋亡、细胞生长、肿瘤生长、应激反应、
- 唐韬孟峻
- 关键词：细胞周期调控二聚体蛋白磷酸化信号转导
- 细胞分裂周期25磷酸化酶家族与肿瘤的研究进展被引量：2
- 2016年
- 近年来,恶性肿瘤的发病率呈现上升趋势,肿瘤问题是全世界范围的棘手问题,也是目前主要病死原因之一,已成为严重危害人类生命健康、制约社会经济发展的一大类疾病。因此对肿瘤的研究十分关注。细胞分裂周期25（CDC25）是调控细胞周期重要的调节子,CDC25家族中任何一个异构体异常都会导致细胞分裂异常,甚至造成细胞无限增殖.
- 侯艳军孟峻
- 关键词：细胞分裂肿瘤细胞
- 血清蛋白电泳、免疫固定电泳、κ/λ、血钙、β2微球蛋白在诊断多发性骨髓瘤中的诊断价值被引量：6
- 2018年
- 目的分析血清蛋白电泳、免疫固定电泳、κ/λ、血钙、β2微球蛋白在诊断多发性骨髓瘤(MM)中的诊断价值。方法对内蒙古医科大学附属医院35例MM患者的血清蛋白电泳、免疫固定电泳、κ/λ值、血钙、β2微球蛋白的检测结果进行回顾性分析。结果血清蛋白电泳显示,35例MM患者中有30例检出M带,M带大多在γ区。免疫固定电泳显示,35例MM患者结果全部为阳性,其中IgG型24例(68.6%),IgA型6例(17.1%),IgM型1例(2.9%),轻链型4例(11.4%);κ型25例(71.4%),λ型10例(28.6%)。κ/λ、血钙、β2微球蛋白检测结果显示,35例MM患者中有29例κ/λ比值异常,3例血钙增高,32例β2微球蛋白增高。结论血清蛋白电泳、免疫固定电泳、κ/λ值、β2微球蛋白对MM早期诊断、治疗有重要价值。
- 李瑞林孟峻
- 关键词：多发性骨髓瘤Β2微球蛋白
- 细胞分裂周期蛋白14B功能研究进展
- 2019年
- 细胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)是真核细胞中广泛表达的一类特殊的高度保守的丝/苏氨酸双特异性磷酸酶,是CDC14家族的一个亚型。从酵母到人类的各种研究表明,CDC14B的功能并不保守,其参与细胞内多种重要的生命活动,包括细胞的生理、病理进程,具体涉及有丝分裂、胞质分裂、减数分裂、DNA损伤修复、中心体复制、纤毛形成等。CDC14B的功能是目前研究的热点,基于此,本文就CDC14B的生物学作用进行综述。
- 刘岚清孟峻
- 关键词：细胞分裂DNA损伤修复肿瘤
- 14-3-3ε和Cdc25B在小鼠卵母细胞生发泡期阻滞中的作用被引量：4
- 2016年
- 目的:研究14-3-3ε和Cdc25B对小鼠卵母细胞生发泡(GV)期阻滞作用的影响,为阐明蛋白激酶A/Cdc25B/14-3-3ε通路在小鼠卵母细胞GV期阻滞中发育调控机制奠定基础。方法:在体外将表达载体pcDNA3.1-ZEO-HA14-3-3ε、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-WT、pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321A和pcDNA3.1-MYC-Cdc25B-S321D转录成mRNA。超排卵方法获得小鼠GV期卵母细胞,实验分为未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组,收集各组母卵细胞后采用Western blotting法检测外源性14-3-3ε和Cdc25B蛋白表达及Cdc2-Tyr15的磷酸化状态;相差显微镜观察卵母细胞的形态学变化并计数生发泡破裂(GVBD)率。结果:未注射组、TE缓冲液注射组、14-3-3εmRNA单独注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-WT(野生型)mRNA共注射组、14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321D(模拟磷酸化型)mRNA共注射组在显微注射后20h均未发生GVBD(P>0.05);14-3-3εmRNA+Cdc25B-S321A(突变型)mRNA共注射组在显微注射后1、2和3h卵母细胞的GVBD率分别为(5.00±0.68)%、(62.00±3.56)%和(100.00±0.00)%,显微注射后20h到达第2次减数分裂中期(MII)的比例为(79.00±2.80)%,与未注射组和TE缓冲液注射组比较,GVBD率和到达MII的比例均显著升高(P<0.01)。结论:14-3-3ε通过Cdc25B的321位丝氨酸磷酸化和脱磷酸化调控卵母细胞由GV期向GVBD的过渡。
- 孟峻侯艳军张永梅呼格吉乐韩艳秋
- 关键词：CDC25B卵母细胞显微注射
- 血清降钙素原、血小板、C反应蛋白、乳酸的检测对脓毒血症病人预后判断的价值被引量：11
- 2019年
- 目的:探讨脓毒血症病人血清降钙素原(PCT)、血小板(PLT)计数、C反应蛋白(CRP)、乳酸(LAC)的水平对判断病人病情严重程度及预后状况的应用价值。方法:选择2016-01~2018-06期间在我院诊治的90例脓毒血症病人(脓毒血症组),并选择同期在我院治疗的非脓毒血症病人90例(对照组),检测2组病人早期血清PCT、PLT计数、CRP及LAC的水平,并记录脓毒血症组病人30d内的预后情况。结果:脓毒血症病人的血清PCT、CRP、LAC水平均明显高于对照组(P<0.05);脓毒血症的血清PLT计数明显低于对照组(P<0.05);脓毒血症休克病人血清PCT、CRP、LAC水平均明显高于其他两组病人(P<0.05);血清PLT计数明显低于两组病人(P<0.05);脓毒血症病人入院后死亡28例,病死率31.11%,死亡组病人的血清PCT、CRP、LAC水平均明显高于存活组病人(P<0.05);死亡组病人的PLT计数明显低于存活组病人(P<0.05)。结论:联合检测血清PCT、PLT计数、CRP及LAC水平对判断脓毒血症病人病情严重程度及预后状况具有较高的临床价值。
- 许琳孟俊
- 关键词：降钙素原血小板计数C反应蛋白乳酸脓毒血症
- 免疫共沉淀法测定14-3-3ε蛋白与Cdc25B的相互作用被引量：1
- 2019年
- 目的研究14-3-3ε蛋白与Cdc25B的相互作用及其作用位点,为小鼠卵母细胞减数分裂G2期阻滞的机制研究提供实验依据。方法本实验依次构建pcDNA3.1-ZEO-HA-14-3-3ε、pEGFP-Cdc25B-WT、pEGFP-Cdc25B-Ser321A、pEGFP-Cdc25B-Ser321D表达载体,分别转染HEK293细胞,分为四组,分别为Cdc25B-vector+14-3-3ε组(空载体组),Cdc25B-WT+14-3-3ε组,Cdc25B-Ser321A+14-3-3ε组,Cdc25B-Ser321D+14-3-3ε组。通过免疫共沉淀法获得各组细胞裂解液及免疫沉淀物,用Western blotting检测Cdc25B-vector、Cdc25B-WT、Cdc25B-Ser321A、Cdc25B-Ser321D与14-3-3ε蛋白是否有共沉淀,如有共沉淀,说明两蛋白存在相互作用。结果本实验构建的4种表达载体经验证均构建成功。免疫共沉淀实验得出14-3-3ε能与野生型Cdc25B结合,当Cdc25B的S321突变成S321A时,这种结合不发生;而具有模拟磷酸化作用的Cdc25B-S321D也能与14-3-3ε结合。结论Cdc25B S321是14-3-3ε蛋白与Cdc25B相互作用的特异性结合位点,此结合位点可能成为14-3-3ε蛋白与Cdc25B共同调控小鼠卵母细胞减数分裂进程及G2期阻滞的重要靶点,为后期哺乳动物生殖细胞的相关研究奠定实验基础。
- 李瑞林孟峻刘儒
- 关键词：CDC25B作用位点免疫共沉淀
