浙江省自然科学基金(Y2080466)
- 作品数：15 被引量：65H指数：5
- 相关作者：戴元荣徐慧夏梦玲李凤琴曾潍贤更多>>
- 相关机构：温州医科大学温州医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：浙江省自然科学基金温州市科技局资助项目浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 罗红霉素对哮喘平滑肌细胞增殖以及微囊蛋白-1及PI3K/Akt的影响被引量：15
- 2015年
- 目的研究罗红霉素(RXM)能否通过上调微囊蛋白-1(caveolin-1)的表达来调控PI3K/Akt通路,从而抑制TGF-β1刺激引起的哮喘气道平滑肌细胞(ASMCs)增殖。方法 30只健康♂SD大鼠随机分为对照组和哮喘组,每组15只,以卵白蛋白(OVA)致敏和激发建立大鼠哮喘模型。将培养的ASMCs进行鉴定后,在哮喘组细胞中分别加入TGF-β1、PI3K/Akt通路抑制剂渥曼宁青霉素(wortmannin)、胆固醇剔除剂β-环糊精(β-CD)以及RXM进行干预,后三组在干预后再用TGF-β1刺激,故分6组:1TGF-β1组、2哮喘组、3正常组、4 wortmannin+TGF-β1组、5β-CD+TGF-β1组、6RXM+TGF-β1组,用CCK-8法检测哮喘大鼠ASMCs的增殖,Western blot检测ASMCs上caveolin-1、Akt、p-Akt的表达情况。结果 1TGF-β1组较正常组和哮喘组细胞增殖明显(P<0.01,P<0.05);RXM和wortmannin干预组较TGF-β1组细胞增殖减少(均P<0.01)。2与正常组比较,哮喘组、TGF-β1组、β-CD干预组气道平滑肌细胞caveolin-1的表达量明显减少(均P<0.05),TGF-β1组较哮喘组caveolin-1表达量明显减少(P<0.05);与此同时,哮喘组ASMCs较正常组p-Akt的表达量明显增加(P<0.05),TGF-β1组较哮喘组p-Akt表达量明显增加(P<0.05),wortmannin干预组较TGF-β1组p-Akt的表达量明显减少,β-CD干预组较TGF-β1组p-Akt表达量明显增加(P<0.05),RXM干预组较TGF-β1组p-Akt表达量明显减少(P<0.05)。结论罗红霉素可抑制TGF-β1刺激导致的哮喘大鼠ASMCs的增殖,并上调caveolin-1表达,抑制p-Akt活化。
- 徐慧戴元荣李凤琴付玉茹夏梦玲葛翔挺
- 关键词：罗红霉素微囊蛋白磷脂酰肌醇3激酶气道平滑肌细胞哮喘
- 罗红霉素对香烟烟雾暴露小鼠HDAC2的影响
- 2014年
- 目的观察罗红霉素对烟雾暴露哮喘小鼠组蛋白去乙酰化酶(HDAC2)表达的影响,探讨罗红霉素对烟雾暴露哮喘患者可能的治疗作用。方法 SPF级雌性BALB/c小鼠40只,按随机数字表法随机分为对照组(C)、哮喘组(A)、烟雾暴露组(S)、罗红霉素组(R)4组。用卵白蛋白(OVA)致敏和激发的方法制备哮喘和烟雾暴露模型,并用罗红霉素干预。观察各组小鼠肺组织病理超微结构变化,分析支气管肺泡灌洗液(BALF)中的细胞分类计数,并采用Western blot法测定各组小鼠肺组织中HDAC2表达情况。结果哮喘组和烟雾暴露组嗜酸粒细胞计数比例均显著高于对照组(均P<0.01),烟雾暴露组中性粒细胞计数比例显著高于哮喘组(P<0.01);罗红霉素组与烟雾暴露组相比,嗜酸性粒细胞,中性粒细胞比例明显下降(P<0.01)。哮喘组和烟雾暴露组肺组织HDAC2表达均低于对照组,烟雾暴露组低于哮喘组(均P<0.01),罗红霉素组肺组织HDAC2表达高于烟雾暴露组(均P<0.01)。结论罗红霉素可能通过上调HDAC2,改善烟雾暴露小鼠气道炎症。
- 徐慧戴元荣胡丹红夏梦玲
- 关键词：哮喘组蛋白脱乙酰基酶类罗红霉素
- 哮喘大鼠Caveolin-1通过PI3K/AKT途径对气道重塑的影响被引量：4
- 2015年
- 目的研究Caveolin-1通过PI3K/AKT途径对TGF-β1刺激引起的气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)增殖的影响。方法 30只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组和哮喘组,每组15只,以卵白蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型。ASMCs的培养和鉴定,并分为TGF-β1组、哮喘组、正常对照组、wortmannin+TGF-β1组、β-CD+TGF-β1组,用CCK-8法检测哮喘大鼠ASMCs的增殖,western blot法检测ASMCs上Caveolin-1、p-AKT的表达。结果 1TGF-β1组较正常对照组和哮喘组细胞增殖明显(P<0.01,P<0.05);wortmannin+TGF-β1组较TGF-β1组细胞增殖减少(P<0.01)。2ASMCs Caveolin-1的表达:哮喘组较正常对照组明显减少,TGF-β1组较哮喘组表达量减少(均P<0.01);3ASMCs p-AKT的表达:哮喘组p-AKT表达明显高于正常对照组,TGF-β1组则高于较哮喘组,wortmannin+TGF-β1组明显低于TGF-β1组,β-CD+TGF-β1组较TGF-β1组表达量增加(均P<0.01)。结论通过上调Caveolin-1表达、抑制PI3K活化可以抑制TGF-β1刺激导致的哮喘大鼠ASMCs的增殖。
- 徐慧戴元荣李凤琴夏梦玲
- 关键词：微囊蛋白磷脂酰肌醇3激酶气道平滑肌细胞
- 磷脂酰肌醇3激酶和细胞外调节蛋白激酶信号通路对支气管哮喘大鼠气管平滑肌细胞增殖的协同调控作用被引量：4
- 2015年
- 目的探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路对支气管哮喘（简称哮喘）大鼠气管平滑肌细胞（ASMC）增殖的协同调控作用。方法 6~8周龄SPF级雄性SD大鼠,复制大鼠慢性哮喘模型,离体培养大鼠气管ASMC,将细胞分为正常组、哮喘组、转化生长因子β1（TGF-β1）组、TGF-β1＋PD98059组、TGF-β1＋渥曼青霉素（wortmannin）组、TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况及Western blotting法检测磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）表达情况。结果 CCK-8法检测各组大鼠ASMC OD值,TGF-β1组高于正常组和哮喘组,TGF-β1＋PD98059组、TGF-β1＋wortmannin组和TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组低于TGF-β1组,TGF-β1＋PD98059＋wortmannin组低于TGF-β1＋PD98059组和TGF-β1＋wortmannin组（P〈0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-Akt的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1＋wortmannin组低于TGF-β1组（P〈0.01）。Western blotting法检测ASMC中p-ERK1/2的表达,哮喘组高于正常组,TGF-β1组高于哮喘组,TGF-β1＋PD98059组低于TGF-β1组（P〈0.01）。结论 PI3K和ERK信号通路协同调控了TGF-β1刺激哮喘大鼠ASMC增殖过程。
- 徐慧戴元荣付玉茹夏梦玲
- 关键词：哮喘细胞增殖细胞外调节蛋白激酶
- Th2和非Th2相关性支气管哮喘表型的研究进展被引量：4
- 2014年
- 近年来越来越多的研究结果表明，支气管哮喘（简称哮喘）是一种异质性疾病，其临床表型、发病机制以及病理生理改变均复杂多样。随着对哮喘异质性的认识不断加深，人们从哮喘的不同角度进行观察并归纳出多种临床和炎症表型。哮喘表型分类繁多，本文就Th2和非Th2相关性哮喘表型进行综述。
- 夏梦玲戴元荣徐慧
- 关键词：临床表型相关性哮喘TH2异质性疾病病理生理改变
- 罗红霉素对离体哮喘大鼠气道平滑肌细胞凋亡的影响及其机制被引量：1
- 2015年
- 目的:观察罗红霉素对离体气道平滑肌细胞(ASMCs)凋亡的影响以及线粒体凋亡途径在ASMCs凋亡中的作用。方法:体外培养哮喘大鼠ASMCs,用不同浓度(0、10、25、50、100μg/m L分别对应R0组、R10组、R25组、R50组、R100组)的罗红霉素干预48 h。Annexin V/PI双标记流式细胞术检测早期细胞凋亡;JC-1染色流式细胞术分析线粒体跨膜电位(ΔΨm)的变化;Western blot法分析线粒体内和胞浆内细胞色素C(Cyt-c)的含量。结果:各实验组(R10组、R25组、R50组、R100组)ASMCs的早期凋亡率分别为(4.6±1.9)%、(5.8±2.9)%、(12.0±5.6)%、(26.9±11.1)%,较R0组的(2.9±1.7)%高,其中R100组与R0组间差异有统计学意义(x2=13.30,P<0.01)。各实验组(R10组、R25组、R50组、R100组)低ΔΨm细胞所占比例分别为(27.88±13.10)%、(40.35±9.19)%、(48.40±14.15)%、(52.90±15.88)%,较R0组的(19.78±9.85)%高,其中R100组和R50组ΔΨm显著低于R0组和R10组(P<0.05或0.01),R25组与R0组比较,差异有统计学意义(P<0.05),R10组与R0组比较差异无统计学意义(P>0.05);各实验组(R10组、R25组、R50组、R100组)胞浆Cyt-c的含量分别为(0.87±0.19)、(0.97±0.17)、(1.01±0.12)、(1.14±0.07),较R0组的(0.67±0.12)高,R100组与R0组比较差异有统计学意义(x2=9.075,P<0.05)。结论:罗红霉素可以通过激活线粒体凋亡通路促进离体ASMCs的凋亡。
- 吴海亚戴元荣应斌宇
- 关键词：罗红霉素哮喘气道重塑平滑肌细胞
- 香烟烟雾对哮喘小鼠缺氧诱导因子-1α及组蛋白去乙酰化酶表达的影响被引量：3
- 2014年
- 目的 探讨香烟烟雾对哮喘小鼠缺氧诱导因子-1α（HIF-1 α）及组蛋白去乙酰化酶（HDAC2）表达的影响.方法 SPF级雌性BALB/c小鼠30只,按随机数字表法随机平均分为对照组、哮喘组、吸烟哮喘组3组.用卵白蛋白（OVA）致敏和激发的方法制备哮喘和吸烟哮喘模型,其中吸烟哮喘组在激发后置于自制熏箱内被动吸烟,对照组则用生理盐水代替OVA.观察各组小鼠肺组织病理学变化,分析支气管肺泡灌洗液（BALF）中的细胞分类计数,酶联免疫吸附（ELISA）法测定BALF中白细胞介素（IL）-8水平,并采用免疫组织化学法和Western印迹法测定各组小鼠肺组织中HIF-1α及HDAC2表达情况,并作相关性分析.结果 哮喘组和吸烟哮喘组嗜酸粒细胞计数比例均显著高于对照组[（8.90±1.60）％、（7.52±0.63）％比（0.60±0.10）％,均P＜0.01],吸烟哮喘组中性粒细胞计数比例显著高于哮喘组[（18.24±5.19）％比（8.46±1.58）％,P＜0.01];哮喘组和吸烟哮喘组肺组织HIF-1α表达均显著高于对照组（0.144±0.008、0.238±0.015比0.081±0.005）且吸烟哮喘组显著高于哮喘组（均P＜0.01）;哮喘组和吸烟哮喘组肺组织HDAC2表达均显著低于对照组（0.287±0.008、0.164 ±0.015比0.452 ±0.041）且吸烟哮喘组显著低于哮喘组（均P＜0.01）.吸烟哮喘组BALF中IL-8水平显著高于哮喘组、对照组[（42.07±4.54）比（21.66±2.78）、（14.33±3.73） pg/ml,均P＜0.01],吸烟哮喘组肺组织中HIF-1α与HDAC2的表达呈显著负相关（r=-0.950,P＜0.01）,吸烟哮喘组BALF中IL-8的表达与HDAC2的表达呈显著负相关（r=-0.855,P＜0.01）.结论 香烟烟雾可能通过激活HIF-1α而抑制HDAC2,加重气道炎症.
- 徐慧戴元荣夏梦玲陈敏
- 关键词：哮喘缺氧诱导因子1组蛋白脱乙酰基酶类小鼠
- 改良组织贴块法培养大鼠气道平滑肌细胞被引量：8
- 2010年
- 目的:改进大鼠气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCS)的培养方法,了解其生长特性,为研究气道疾病提供体外研究模型。方法:大鼠麻醉后迅速分离支气管树,去除内外膜并用0.2%I型胶原酶消化后,采用改良组织贴块法培养ASMCS,应用形态学和抗SMα-action免疫细胞化学法鉴定平滑肌细胞。结果:采用改良组织贴块法培养2～6 d,细胞开始从组织块周围长出,5～8 d在组织块附近出现"谷-峰"结构,9～12 d可融合。传代细胞经SMα-action免疫组化SP法染色阳性率达95%以上。结论:改良组织贴块法培养大鼠气道平滑肌细胞具有简便、易行、产量高、纯度高的优点,为研究气道疾病提供良好的体外研究模型。
- 吴海亚戴元荣尹娟
- 关键词：气道平滑肌细胞培养组织贴块法
- 微囊蛋白1对哮喘气道平滑肌细胞增殖的抑制机制及罗红霉素的调控作用被引量：6
- 2013年
- 目的探讨微囊蛋白1抑制气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖的可能机制以及罗红霉素的调控作用。方法复制哮喘大鼠模型，光镜观察肺组织病理学变化，透射电镜观察各组ASMCs上微囊的结构及变化，用组织贴壁法体外培养ASMCs，实验设对照组（A组：含2．5％胎牛血清的高糖培养液处理1h）、哮喘组（B组：处理同A组）、细胞外调节蛋白激酶（ERK1／2）信号通路阻断剂PD98059组（c组：10×10μmol／L的PD98059处理1h）、罗红霉素组（D组：100mg／L的罗红霉素处理1h）、β-甲基环糊精组（E组：5μmoL／L的B甲基环糊精处理1h）；用细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组细胞的增殖情况，Western印迹检测各组微囊蛋白1表达；逆转录（RT）-PCR和Western印迹分别检测ERK1／2mRNA、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）mRNA和磷酸化ERK1／2、MCP-1蛋白的表达。结果c、D组ASMCs增殖显著低于B组（0．68±0．15、0．63±0．13比0．96±0．14，均P〈0．05）；E组（1．26±0．11）ASMCs增殖强于B组（P〈0．05）。C、D组微囊蛋白1表达均显著高于B组（0．332±0．057、0．392±0．064比0．237±0．032，均P〈0．05）；C、D组ERKl／2蛋白表达均显著低于B组（0．241±0．017、0．268±0．007比0．346±0．009，均P〈0．01），E组（0．441±0．011）ERK1／2蛋白表达高于B组；C、D组ERKl／2mRNA表达均显著低于B组（0．277±0．043、0．338±0．026比0．591±0．022，均P〈0．01）。C、D组MCP-1蛋白表达均显著低于B组（0．198±0．015、0．286±0．019比0．482±0．026，均P〈0．01），E组（0．521±0．023）MCP-1蛋白表达较B有升高趋势；C、D组MCP-1mRNA表达均显著低于B组（0．212±0．042、0．249±0．032比0．676±0．053，均P〈0．01）。结论微囊蛋白1可能通过ERK信号通路抑制MCP-1表达，从而抑制哮喘ASMCs的增殖。罗红霉素可能上调微囊蛋白1的表达，抑制MCP-1mRNA表达和翻译，进而�
- 曾潍贤戴元荣
- 关键词：哮喘细胞质膜微囊蛋白肌细胞平滑肌细胞增殖罗红霉素
- 烟雾暴露通过PI3Kδ/Akt通路对支气管哮喘小鼠气道HDAC2的影响被引量：3
- 2015年
- 吸烟引起糖皮质激素抵抗的机制目前还不清楚,研究结果表明[1],糖皮质激素抑制炎症基因主要是通过招募组蛋白去乙酰化酶2（HDAC2）到达炎症基因起始位点,达到抑制炎症的作用,因此我们推测吸烟可能影响了HDAC2的表达,从而导致了糖皮质激素抵抗.P13K信号转导途径与HDAC2的表达密切相关[2].本研究拟复制烟雾暴露哮喘小鼠模型,观察烟草烟雾对HDAC2的作用,并通过研究P13K的重要下游信号分子丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（AKt）的活性变化,探讨PI3Kδ/Akt信号通路对其可能的作用机制.
- 夏梦玲徐慧葛翔挺戴元荣
- 关键词：哮喘小鼠PI3KAKT通路糖皮质激素抵抗支气管苏氨酸蛋白激酶
