国家自然科学基金(31170129)
- 作品数：8 被引量：49H指数：3
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- 肺炎克雷伯菌全基因组DNA芯片的研制和质量评价
- 2013年
- 目的研制肺炎克雷伯菌(KP)全基因组DNA芯片并对芯片质量进行评价。方法根据KP的NTUH-K2044全基因组序列,挑选出5075条基因,PCR扩增各基因并纯化产物,点样制备芯片。设计了3个质控杂交组合,采用双色荧光杂交策略,对芯片质量进行评价。结果与结论芯片杂交结果与理论预期结果一致。本研究成功研制了KP全基因组DNA芯片,并建立了基于全基因组DNA芯片的KP比较基因组学技术平台。
- 刘梦颖张义全王丽闫小娟杨世亚周冬生杨瑞馥邱景富
- 关键词：克雷伯菌肺炎DNA芯片比较基因组学
- 肺炎克雷伯菌突变株ΔrcsB的构建及其菌株超粘性与生物膜表型被引量：3
- 2016年
- 目的构建肺炎克雷伯菌rcs B基因缺失的无痕突变株和回补株,通过对突变株的超粘性和生物膜表型进行分析,探讨转录调控子Rcs B对细菌超粘性和生物膜形成能力的影响。方法首先构建突变株Δrcs B,PCR扩增rcs B基因上下游同源臂片段,克隆到质粒p KO3-Km上,将重组质粒导入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,经同源重组后筛选得到无痕突变株。然后构建回补株,扩增rcs B基因片段,克隆到质粒p BAD33上,将重组质粒导入突变株Δrcs B中,得到回补株。测定野生株、突变株、回补株的超粘性和生物膜形成能力。结果成功构建rcs B基因缺失的无痕突变株Δrcs B和回补株C-Δrcs B。与野生株相比,突变株超粘性和生物膜形成能力均减弱,回补株介于野生株和突变株之间。结论转录调控子Rcs B对肺炎克雷伯菌超粘性和生物膜形成具有正向调控作用。
- 周锡鹏薛健杨弦弦罗美徐萱卿颖李迎丽邱景富
- 关键词：肺炎克雷伯菌生物膜
- 中国综合性医院院内感染病原菌分布的Meta分析被引量：24
- 2013年
- 目的 系统评价中国综合性医院院内感染病原菌分布的变化趋势.方法 计算机检索中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、维普中文科技期刊全文数据库及万方数据知识服务平台,检索时间为建库至2013年3月,收集有关医院感染调查和研究的相关文献,由2名独立的研究者严格按照纳入和排除标准筛选文献、提取相关数据并采用Comprehensive Meta分析软件进行率的合并分析,将医院感染病原菌按照调查年份、医院等级、医院所在地区进行分层分析,根据异质性检验结果对医院院内感染不同病原菌分布率加权合并.结果 共纳入345篇文献.合并结果显示：（1）1987-2000年真菌检出率为18.6％（95％CI：13.7％ ～ 24.9％）、葡萄球菌属为18.1％（95％CI：15.4％ ～ 21.0％）、假单胞菌属为14.8％（95％CI：12.2％～ 17.9％）、克雷伯菌属为5.2％（95％CI：4.1％～6.6％）；2001-2012年真菌检出率为17.6％（95％CI：16.4％ ～ 18.8％）、葡萄球菌属为15.0％（95％CI：14.2％～15.8％）、假单胞菌属为13.9％（95％CI：13.1％～14.7％）、克雷伯菌属为10.4％ （95％CI：9.9％～ 11.0％）.（2）在二级及以下医院支原体检出率为3.2％（95％CI：0.3％～29.9％）、志贺菌属为4.7％（95％CI：3.4％ ～ 6.3％）、产碱杆菌属为7.2％ （95％CI：1.7％ ～ 26.1％）；三级医院支原体检出率为1.1％（95％CI：0.1％～15.4％）、志贺菌属为1.8％ （95％CI：0.6％ ～ 5.1％）、产碱杆菌属为4.3％（95％CI：2.3％～8.0％）.（3）支原体检出率在长江流域经济区为14.3％ （95％CI：2.0％ ～ 58.1％）、西南经济区为0.3％（95％CI：0.1％～1.1％）；棒状杆菌属检出率在长江流域经济区为0.4％ （95％CI：0.1％ ～ 1.4％）、东南经济区为9.5％（95％CI：2.4％ ～ 31.1％）；嗜血杆菌属检出率在北方经济区为0.5％（95％CI：0.2％ ～ 0.9％）、东南�
- 黄娅铃张帆谭斌张弦薛健周锡鹏李迎丽邱景富
- 关键词：医院感染病原菌META分析
- 血清瘦素水平与丙型病毒性肝炎相关性的Meta分析
- 2018年
- 目的系统评价血清瘦素水平与丙型病毒性肝炎（HCV）的相关性。方法计算机检索PubMed、EMbase、WebofScience、CNKI、CBM、VIP和WanFangData数据库，搜集有关血清瘦素水平与HCV相关的病例．对照研究，检索时间均为建库至2017年7月。由2名研究者独立进行文献筛选、资料提取并评价纳入研究的偏倚风险后，采用RevMan5．3软件进行Meta分析。结果最终纳入11个研究，包括1115例患者。Meta分析结果显示，HCV组的血清瘦素水平高于健康人群组[SMD=0．68，95％CI（0．44，0．91），P〈0．00001]。亚组分析结果显示：检测方法采用RIA、人群为欧洲人群的丙型病毒性肝炎患者的血清瘦素水平更高，且女性血清素水平高于男性（P〈0．00001）。结论血清瘦素水平与HCV相关，且女性血清瘦素水平高于男性。受纳入研究数量和质量的限制，上述结论仍需要开展更多高质量大样本研究来验证。
- 张琼元徐萱罗美左国伟薛建江邱景富
- 关键词：血清瘦素丙型病毒性肝炎META分析病例-对照研究
- 肺炎克雷伯菌RcsAB蛋白对荚膜多糖相关基因wcaJ、wcaG和magA的调控关系被引量：1
- 2021年
- 荚膜多糖(CPS)是肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)重要的毒力因子。Rcs系统是肠杆菌科(Enterobacteriacese)中重要的双组分信号转导系统,RcsAB是其中主要的转录调控蛋白。本研究选取了肺炎克雷伯菌NTUH-K2044 cps基因簇上的3个基因(wcaJ,wcaG和mag A),研究RcsAB对上述3个基因可能存在的调控关系。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术和LacZ报告基因融合试验来确认RcsAB是否能够调控上述3个基因的转录表达。进而用凝胶阻滞试验(EMSA)验证RcsAB能否直接结合在靶基因的启动子区,对靶基因进行直接调控。结果表明RcsAB能够正向调控上述3个基因的转录表达,EMSA的结果提示RcsAB对这3个基因可能是通过间接的方式进行调控。RcsAB蛋白可能通过间接调控荚膜多糖基因wcaJ、wcaG和mag A的转录,从而影响菌株的荚膜多糖表型。
- 张加雪彭丹袁灵月赵航宇杜玲张仲双何蔷李迎丽
- 关键词：荚膜多糖
- 肺炎克雷伯菌KP1_0324基因突变株构建及其对生物膜形成的影响
- 2020年
- 目的探究肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中KP1_0324基因对菌株生物膜形成的影响。方法构建肺炎克雷伯菌KP1_0324基因缺失的突变株。先分别扩增KP1_0324基因的上下游同源臂,通过融合PCR得到缺失此目的基因的融合片段,将该片段克隆到自杀质粒pKO3-Km上得到重组质粒,再将重组质粒转入肺炎克雷伯菌野生株中,利用同源重组的原理,筛选得到目的基因缺失的突变株Kp-Δ0324。构建回补株,利用PCR扩增得到KP1_0324基因片段,并克隆到表达载体pBAD33上,再将得到的重组质粒转入突变株Kp-Δ0324中,得到回补株Kpc-Δ0324。利用生物膜结晶紫染色实验和扫描电镜观察野生株、突变株和回补株的生物膜相对形成量及生物膜的表面结构。结果成功构建突变株Kp-Δ0324和回补株Kpc-Δ0324;与野生株相比,突变株Kp-Δ0324的生物膜形成量明显降低(P<0.01)。结论肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中KP1_0324基因与细菌生物膜的形成有关。
- 赵航宇何蔷刘品袁灵月邱景富李迎丽
- 关键词：肺炎克雷伯菌突变生物膜
- 肺炎克雷伯菌基因无痕敲除方法的建立被引量：8
- 2013年
- 目的建立可行的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)基因无痕敲除方法。方法 PCR扩增得到目的基因上下游同源臂融合片段,将其克隆到自杀载体pKO3-km,构建重组质粒。提取重组质粒,通过电转化转入肺炎克雷伯菌NTUH-K2044中,在43℃条件下培养筛选得到重组质粒整合到细菌基因组上的重组子,再利用质粒pKO3-km上的sacB基因在含蔗糖的平板上反向筛选得到突变株。结果与结论成功构建突变株,且突变株基因组上没有任何抗性筛选标记残留。该研究为肺炎克雷伯菌基因功能研究提供了基因敲除技术。
- 高钰双冯甜邱景富杨瑞馥周冬生李迎丽
- 关键词：基因敲除同源重组
