国家自然科学基金(30470679)
- 作品数：8 被引量：30H指数：4
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- CCK-8对TNF-α诱导大鼠RSC-364细胞MMPs/TIMP-1的影响被引量：8
- 2017年
- 目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对TNF-α诱导的大鼠RSC-364细胞MMPs/TIMP-1的影响。方法采用ELISA观察TNF-α作用下CCK-8对RSC-364细胞MMP-3、-9、-1及TIMP-1分泌的影响,比较MMP-3、-9、-1和TIMP-1比值变化,用RT-PCR观察CCK-8对TNF-α作用下RSC-364细胞MMP-3、-9 mRNA表达的影响。结果静息和CCK-8单独孵育细胞后未检测到MMP-3和MMP-9,产生少量MMP-1和TIMP-1,表达MMP-3和MMP-9 mRNA甚微,CCK-8有抑制TNF-α诱导细胞MMP-3、-9、-1分泌和MMP-3、-9 mRNA表达的作用,并且降低TNF-α所致的MMPs/TIMP-1比值的上升。结论 CCK-8下调MMPs基因表达,减少MMPs分泌,使MMPs与TIMP-1比值下降,从而降低MMPs活性,表明CCK-8能调节滑膜细胞分泌功能,提示CCK-8在类风湿关节炎发病过程中可能具有调控作用。
- 徐锦荣丛斌李淑瑾金玉怀赵占胜
- 关键词：八肽胆囊收缩素TNF-Α成纤维样滑膜细胞金属蛋白酶组织抑制剂
- 八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子-α诱导大鼠RSC-364细胞增殖及金属蛋白酶分泌的影响及作用机制
- 2017年
- 目的探讨八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导大鼠RSC-364细胞增殖及金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs)分泌的影响及作用机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测TNF-α诱导RSC-364细胞的增殖情况,ELISA法测定细胞中MMPs(MMP-1、MMP-3、MMP-9)的分泌水平、环腺苷酸(cyclic adenosine monophosphate,c AMP)含量和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)活性。结果 TNF-α可促进RSC-364细胞增殖及MMP-1、MMP-3、MMP-9的分泌,CCK-8可抑制TNF-α的上述作用,Forskolin(一种c AMP诱导剂)与CCK-8的上述作用类似,而H89(PKA特异性抑制剂)可部分逆转CCK-8的上述作用。TNF-α可提高细胞中c AMP含量和PKA活性,CCK-8(10^(-10)、10^(-8)、10^(-6) mol/L)可进一步促进TNF-α的上述作用,且呈剂量依赖性,CR1409(CCK-A受体结抗剂)和CR2945(CCK-B受体结抗剂)可部分逆转CCK-8的上述作用,以CR2945为著。结论 CCK-8可通过活化c AMP-PKA信号通路,进而抑制TNF-α促细胞增殖和MMP-1、MMP-3、MMP-9的分泌,该过程由CCK受体介导。
- 徐锦荣丛斌李淑瑾金玉怀赵占胜
- 关键词：八肽胆囊收缩素肿瘤坏死因子-Α金属蛋白酶环腺苷酸蛋白激酶A
- CCK-8降低TNF-α诱导的大鼠RSC-364细胞增殖及p38 MAPK活性被引量：8
- 2006年
- 目的 观察硫酸化八肽胆囊收缩素（CCK-8）对TNF-α诱导大鼠成纤维样滑膜细胞株RSC-364细胞增殖及丝裂原活化蛋白激酶p38（p38 MAPK）活性的影响.方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;Western blot技术检测p38 MAPK活性.结果TNF-α（50 μg/L）孵育5 min,p38 MAPK磷酸化水平升高,15 min达高峰,2 h恢复基础水平;孵育15 min时,p38 MAPK磷酸化程度随其剂量（10、25、50 μg/L）的增大而增加.CCK-8（10^-10～10^-6 mol/L）剂量依赖性降低TNF-α诱导的细胞增殖及磷酸化p38 MAPK的激活,此作用可被CR1409和CR2945拮抗.SB203580（10 μmol/L）可抑制TNF-α引起的细胞增殖.结论 CCK-8通过降低p38 MAPK磷酸化水平而抑制TNF-α激活的RSC-364细胞增殖,该作用可能由CCK-A和CCK-B受体共同介导.
- 徐锦荣丛斌李淑瑾姚玉霞韩冬艳王立轩高峰
- 关键词：胆囊收缩素滑膜细胞P38
- 八肽胆囊收缩素对TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364 IL-6的作用及其可能的分子机制(英文)被引量：8
- 2007年
- 目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(sCCK -8)对TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC -364 IL-6mRNA表达及核因子NF-κB的影响及其可能的受体机制。方法:大鼠滑膜细胞株RSC -364经TNF-α(10μg/L)、sCCK-8(10-8-10-6mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺(2 mg/L)及溶剂单独或联合孵育3 h,用RT-PCR检测细胞IL-6、CCK-AR及CCK-BR mRNA的表达,孵育1 h,用电泳迁移率检测NF-κB活性,孵育30min,用Western blot-ting检测胞浆IκB蛋白表达。结果:RSC -364细胞固有表达CCK-A/B受体,sCCK-8(10-8-10-6mol/L)使IL-6、CCK-AR和CCK-BR mRNA表达进一步增高,明显增加TNF-α诱导的NF-κB活性,降低胞浆中IκB蛋白水平,并可被丙谷胺所拮抗。结论:sCCK-8通过NF-κB途径上调TNF-α诱导的大鼠滑膜细胞IL-6 mRNA表达,此作用可能通过滑膜细胞上的CCK受体实现,提示CCK-8在类风湿性关节炎(RA)发病过程中可能具有调控作用。
- 赵占胜金玉怀丛斌李淑瑾徐锦荣姚玉霞凌亦凌
- 关键词：胆囊收缩素滑膜细胞
- CCK-8对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖的影响被引量：5
- 2006年
- 目的研究八肽胆囊收缩素(CCK-8)对IL-1β诱导大鼠滑膜细胞增殖的影响及相关机制。方法应用噻唑蓝(MTT)比色法检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞增殖的影响;应用Westernblot检测CCK-8对IL-1β诱导RSC-364细胞p38MAPK磷酸化的影响。结果CCK-8剂量依赖性(10-12、10-10、10-8、10-6mol.L-1)抑制IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖;CCK-8剂量依赖性(10-10、10-8、10-6mol.L-1)抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞p38MAPK的磷酸化;且CCK-8A、B受体拮抗剂CR1409或CR2945均减弱了CCK-8的抑制效应。结论CCK-8剂量依赖性抑制了IL-1β诱导的RSC-364细胞增殖,该作用由CCK-AR和CCK-BR介导,并可能通过抑制p38MAPK磷酸化而实现的。
- 韩冬艳丛斌徐锦荣李淑瑾马春玲倪志宇
- 关键词：类风湿性关节炎滑膜细胞白细胞介素-1ΒCCK-8
- 八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子-α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364活化蛋白-1活性和JunB表达的影响
- 2017年
- 目的研究八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364活化蛋白-1(activator protein-1,AP-1)活性和JunB表达的影响。方法分别采用凝胶迁移试验、Western blot法和RT-PCR法检测CCK-8对TNF-α诱导RSC-364细胞中AP-1活性、JunB蛋白表达和JunB基因mRNA水平的影响。结果 TNF-α可激活RSC-364细胞中AP-1,CCK-8对其具有抑制作用。静息的RSC-364细胞中JunB蛋白表达很少;经TNF-α处理2 h,JunB表达增加,而CCK-8对TNF-α的上述效应具有明显的促进作用;FsK(一种cAMP诱导剂)与CCK-8作用类似,对TNF-α的上述效应亦有促进作用;CR1409(CCK-A受体)、CR2945(CCK-B受体结抗剂)和H89(PKA特异性抑制剂)均可部分逆转CCK-8的上述作用。CCK-8可促进TNF-α引起JunB基因mRNA表达的增加。结论 CCK-8引起AP-1活性降低,促进TNF-α诱导JunB蛋白和基因表达增加,该作用是由CCK-A受体和CCK-B受体共同介导的,cAMP/PKA通路可能参与其信号转导途径。
- 徐锦荣丛斌李淑瑾金玉怀赵占胜
- 关键词：胆囊收缩素滑膜细胞活化蛋白-1JUNB
- 八肽胆囊收缩素对肿瘤坏死因子α诱导的大鼠滑膜细胞株RSC-364核因子κB活性变化的影响及其受体机制被引量：1
- 2007年
- 目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(cholecystokinin octapeptide,CCK-8)对肿瘤坏死因子α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364核因子κB的影响,以及CCK-A/B受体是否参与这一过程。方法:实验于2003-02/2004-02在河北医科大学法医学教研室分子生物学实验室完成。取大鼠滑膜细胞株RSC-364经肿瘤坏死因子α(10 μg/L)、sCCK-8(10-8,10-7,10-6 mol/L)、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育:①孵育3h,用反转录-聚合酶链反应技术检测细胞CCK-A受体及CCK-B受体mRNA的表达。②孵育1h,用电泳迁移率检测核因子κB相对活性。③孵育30 min,用Western blot检测胞浆IκB蛋白表达的相对水平。结果:①细胞CCK-A受体及CCK-B受体mRNA的表达:RSC-364细胞固有表达CCK-A/B受体,肿瘤坏死因子α(10 μg/L)可使CCK-A受体和CCK-B受体mRNA的表达分别上调148%和173%(P<0.01)。肿瘤坏死因子α和CCK-8(10-8～10-6 mol/L)联合孵育细胞,CCK-A受体和CCK-B受体mRNA表达与肿瘤坏死因子α组相比分别增高47%,56%,30%和57%,13%,24%(P<0.05,0.01)。②核因子κB相对活性:肿瘤坏死因子α组明显高于对照组(294.45±36.48,0,P<0.01);肿瘤坏死因子α+CCK-810-8,10-7,10-6 mol/L组高于肿瘤坏死因子α组(470.69±56.76,489.37±64.95,558.90±74.15,P<0.05,0.01);CCK-8的作用可被丙谷胺减弱(400.79±39.06)。③IκB蛋白表达的相对水平:肿瘤坏死因子α组明显低于对照组(139.43±30.76,220.79±34.58,P<0.01),肿瘤坏死因子α+CCK-810-8,10-7,10-6 mol/L组低于肿瘤坏死因子α组(95.26±8.54,84.15±8.77,63.28±16.13,P<0.05),并可被丙谷胺所抑制(137.22±20.33,P<0.01)。结论:CCK-8对肿瘤坏死因子α诱导的RSC-364核因子κB活性具有正向调节作用,并能降低IκBα蛋白水平,提示CCK-8在类风湿性关节炎发病过程中可能具有调控作用,此作用可能通过滑膜细胞上的CCK受体实现。
- 赵占胜金玉怀丛斌徐锦荣李淑瑾姚玉霞凌亦凌
- 关键词：滑膜NF-ΚΒ
- 蛋白质巯基亚硝基化对RSC-364细胞cAMP反应元件结合蛋白活性的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:观察RSC-364细胞外源性亚硝基化对cAMP反应元件结合蛋白(CREB)活性的影响。方法:提取RSC-364细胞总蛋白,与100μmol/L还原型谷胱甘肽(GSH)、100μmol/L NO供体亚硝基化谷胱甘肽(GSNO)、10mmol/L亚硝基化抑制剂二硫苏糖醇(DTT)及溶剂单独或联合应用孵育15min完成外源性亚硝基化,采用生物素转化法与Western blotting技术检测亚硝基化蛋白表达水平;分别用溶剂或重组大鼠白细胞介素-1β(rIL-1β)10μg/L孵育RSC-364细胞1h,提取细胞核蛋白,经外源性亚硝基化后用电泳迁移率改变分析(elec-trophoresis mobility shift assay,EMSA)观察亚硝基化作用对CREB活性的影响。结果:RSC-364细胞总蛋白经GS-NO孵育后亚硝基化蛋白表达水平明显增高,而应用DTT可抑制亚硝基化水平;GSNO与RSC-364细胞核蛋白孵育后,明显抑制了rIL-1β诱导的CREB活性(P<0.01),GSNO的作用可被DTT所逆转(P<0.01)。结论:NO可通过亚硝基化作用抑制RSC-364细胞CREB活性。
- 张晓静丛斌刘威李淑瑾马春玲倪志宇付丽红张国忠左敏
- 关键词：一氧化氮CAMP反应元件结合蛋白关节炎类风湿
