哈尔滨市科技创新人才研究专项资金(2006RFLXS028)
- 作品数：3 被引量：11H指数：3
- 相关作者：田霖丽刘鸣孙亚男郭彦玲焦慧更多>>
- 相关机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：中国博士后科学基金博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- MMP-9基因RNAi重组慢病毒的构建及其对喉癌细胞侵袭的抑制被引量：3
- 2008年
- 目的构建基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)重组慢病毒,观察其对喉癌细胞体外侵袭的抑制作用。方法筛选确定的MMP-9基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,与含H1启动子和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的pLVTHM载体连接产生LV2shMMP-9慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用重组慢病毒体外转导喉癌细胞,Southern印迹法检测喉癌细胞MMP-9蛋白表达。Boyden侵袭小室法实验观察转导后的喉癌细胞侵袭能力的变化。结果成功构建MMP-9 shRNA的慢病毒载体LV2shMMP-9,包装慢病毒,浓缩病毒悬液的滴度为8×10^(10)TU/L。转导MMP-9 siRNA的喉癌细胞MMP-9蛋白表达阴性。MMP-9 siRNA转导后喉癌细胞体外侵袭能力下降。结论成功构建人MMP-9基因RNAi慢病毒载体,MMP-9基因沉默对喉癌细胞体外侵袭有明显的抑制作用。
- 孙亚男刘鸣孙艳田霖丽焦慧
- 关键词：明胶酶B慢病毒属
- MMP-9小干扰RNA重组慢病毒抑制喉癌体内生长的实验研究被引量：5
- 2008年
- 目的:探讨重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶-9(MMP-9)基因沉默对喉鳞状细胞癌移植瘤生长的抑制作用。方法:构建喉癌移植瘤模型,采用RNA干扰技术,瘤内注射MMP-9-RNAi-Lentivirus重组慢病毒,以空病毒载体作为对照,观察抑瘤效果。运用Western-blot方法检测移植瘤中MMP-9蛋白表达。运用免疫组织化学方法检测移植瘤中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,评估其对细胞增殖的影响。结果:重组慢病毒MMP-9-RNAi-Lentivirus治疗后,治疗组裸鼠移植瘤平均重量为(1.484±0.391)g,明显小于对照组(2.618±0.465)g(P<0.05)。治疗组肿瘤平均体积为(1.177±0.270)cm3,明显小于对照组(2.034±0.366)cm3(P<0.05),抑瘤率为43.32%。Western-blot结果显示治疗组MMP-9蛋白表达阴性7例,弱阳性3例,对照组MMP-9蛋白表达均阳性。免疫组织化学显示治疗组PCNA指数为(55.41±8.77)%,显著低于对照组(77.04±6.91)%(P<0.05)。结论:MMP-9-RNAi-Lentivirus重组慢病毒能有效抑制喉癌移植瘤生长及增殖。
- 孙亚男刘鸣田霖丽郭彦玲金德均
- 关键词：慢病毒属喉肿瘤基质金属蛋白酶-9
- 慢病毒介导的基质金属蛋白酶2基因沉默抑制喉癌侵袭生长的实验研究被引量：3
- 2008年
- 目的探讨siRNA（小干扰RNA）重组慢病毒介导的基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase-2，MMP-2）基因沉默对喉鳞癌侵袭生长的抑制作用。方法采用RNA干扰技术，将MMP-2基因siRNA的重组慢病毒（MMP-2-RNAi—Lentivirus）转染喉鳞癌Hep-2细胞，并运用蛋白印记法检测Hep-2细胞MMP-2基因的蛋白表达；通过博伊登（Boyden）侵袭小室观察MMP-2-RNAi-Lentivirus转染后喉癌细胞侵袭能力的变化。构建喉癌移植瘤裸鼠模型，瘤内注射MMP-2-RNAi—Lentivirus，观察抑瘤效果；透射电镜观察肿瘤形态；运用免疫组化方法检测移植瘤中增殖细胞核抗原的表达，以评估细胞增殖的情况。结果MMP-2-RNAi—Lentivirus能高效地转染靶细胞，转染效率在90％以上。蛋白印迹法检测显示，转染后的Hep-2细胞中MMP-2蛋白表达阴性。侵袭实验显示，MMP-2-RNAi-Lentivirus转染后的实验组Hep-2细胞中穿过人工基底膜的平均细胞数（x^-±s，以下同）为（12±4）个，明显少于空载体对照组的（35±6）个（t=14．492，P〈0．01）。体内实验显示，MMP-2-RNAi—Lentivirus瘤内注射后，裸鼠移植瘤平均重量和平均体积均明显小于对照组，抑瘤率为44．2％。透射电镜观察到MMP-2-RNAi—Lentivirus治疗组肿瘤细胞侵袭表型降低，治疗组肿瘤增殖细胞核抗原指数（49．588±6．995）也明显小于对照组（71．434±7．043，t=9．573，P〈0．01）。结论siRNA重组慢病毒介导的MMP-2基因沉默能有效地抑制喉癌的侵袭、生长及增殖，为喉癌的基因治疗提供一定的实验依据。
- 刘鸣孙亚男焦慧田霖丽郭彦玲
- 关键词：慢病毒属喉肿瘤基因沉默基质金属蛋白酶
