江苏省自然科学基金(BK2007072)
- 作品数：11 被引量：37H指数：3
- 相关作者：韩崇旭孙艳许文荣张锡然周丽娟更多>>
- 相关机构：江苏省苏北人民医院江苏大学扬州大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 骨髓间质细胞致瘤过程中特征基因筛查及其生物学意义的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:研究骨髓间质细胞(MSCs)诱导致瘤的发生机制。方法:采用荧光差异显示(FDD)技术寻找MSCs诱导致瘤(F6)的关键基因。将回收的差异关键基因片段,进行PCR再扩增,TA克隆cDNA片段,测序后经BLAST软件检索以进行同源性分析。结果:FDD成功分离了MSCs和F6肿瘤细胞之间的不同基因片段,TA克隆得到15个EST片段,GenBank序列比对分析表明,这些片断均与相关基因片断同源,其中C356、G392和G383分别与nu-cleostemin,CyclinⅠ和Siva基因同源,同源百分比分别为95%、97%和100%。结论:F6肿瘤细胞的发生机制是一个涉及到众多基因参与的复杂过程,nucleostemin、CyclinⅠ和Siva等基因在人类骨髓间质干细胞诱导突变转化为F6细胞的过程中起着重要作用。
- 韩崇旭许文荣王文兵孙艳乌慧玲
- 关键词：间质干细胞MRNA差异显示技术
- CdTe量子点荧光探针在生物分析中的应用
- 2012年
- 目的探讨巯基丙酸包被的CdTe量子点在生物分析中应用价值。方法水相中合成CdTe量子点并进行巯基丙酸包被，并对其进行了荧光发射光谱及透射电子显微镜成像表征；将量子点与亲和素连接、制备成量子点荧光探针；应用激光扫描共聚焦显微术观察量子点荧光探针标记小鼠腹腔巨噬细胞（peritoneal macrophage，PMΦ）MHCⅡ抗原的表达；以H22肝癌细胞为靶细胞，MTT法观察量子点的生物相容性。结果CdTe量子点粒径均匀，具备良好的光学性能；量子点荧光探针标记细胞具有较强的荧光表达；量子点在一定浓度范围内对细胞的毒性小。结论量子点荧光探针能对固定的组织细胞进行标记，同时具有较好的生物相容性，可对活细胞进行直接或动态标记。
- 胡兵韩崇旭
- 关键词：量子点荧光探针生物分析H22肝癌细胞
- Nucleostemin基因荧光真核表达载体构建及表达特性被引量：3
- 2009年
- 目的:构建Nucleostemin(NS)基因真核表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法:设计引物在肺癌细胞株(LTEP-a-2)中扩增NS全长cDNA片段,插入pMD-18T质粒中得pMD-18T-NS载体,并测序;再将pMD-18T-NS质粒经酶切后导入真核表达载体pcDNA3.1(+)-GFP质粒中,构建pcDNA3.1(+)-GFP-NS载体,并检测其真核表达情况。结果:经RT-PCR扩增得到1650bp的全长NScDNA片段,酶切及测序后鉴定证明pMD-18T-NS构建成功。pcDNA3.1(+)-G-FP-NS载体转染COS-7细胞经蛋白印迹及激光共聚焦显微镜检测显示,该GFP-N-S融合基因在COS-7细胞中获得较好表达。转染后见该基因定位于核仁,细胞逐渐失去黏附贴壁的特性,细胞的增殖受阻;稳定表达(4～20周)后,细胞形态发生改变,体积增大,核增多,细胞成瘤细胞样改变。结论:成功构建pcDNA3.1(+)-GF-P-NS真核表达载体,并在COS-7细胞中有效表达;NS基因在COS-7发生瘤样改变过程中发挥着重要作用,可能与肿瘤发生密切相关。
- 韩崇旭许文荣孙艳张锡然
- 关键词：NUCLEOSTEMIN肿瘤真核表达
- 复方玄驹胶囊对弱精子症患者精子质量指标的观察被引量：10
- 2013年
- 目的观察复方玄驹胶囊对弱精子症患者精子质量指标的变化。方法 2010年1月—2012年1月在江苏省苏北人民医院门诊就诊的男性不育症患者中,将弱精子症患者62例随机分为两组:治疗组口服复方玄驹胶囊,对照组口服五子衍宗丸,在服药前及服药后3个月,测定精子密度和活力指标,观察精子形态。结果治疗组与治疗前相比,精子密度、活力两指标均较明显提高(P<0.01),且精子畸形率明显降低(P<0.01);治疗后,治疗组与对照组相比,精子密度、活力及形态有显著改善(P<0.01)。结论复方玄驹胶囊可改善弱精子症患者精子活力、浓度及精子畸形率精子质量指标,指标改善水平优于复方五子衍宗丸。
- 孙艳刘凯峰
- 关键词：弱精子症中医药疗法
- 小而密低密度脂蛋白与冠心病关系的研究被引量：13
- 2014年
- 目的观察冠心病（CHD）患者血清小而密低密度脂蛋白（sdLDL）的水平，探讨sdLDL与CHD的关系。方法采用2％。16％的非查性梯度胶电泳检测经冠脉造影证实的50例CHD患者sdLDL水平，用30例冠脉造影阴性者和30例健康人作为对照，观察各组间的变化，采用多元逐步回归统计分析，以了解CHD危险因素对sdLDL的影响。结果冠脉造影阳性组的血清sdLDL（56．2＋11．3）％明显高于对冠照阴性（41．5±10．0）％（P〈0．01）与健康对照组（40．3±918）％（P〈0．01）；sdLDL异常组血清TG水平增高，HDL—C水平降低，均与正常组存在显著差异（P〈0．01）。结论血清sdLDL测定可作为预测CHD危险性的指标。
- 周丽娟韩崇旭
- 关键词：小而密低密度脂蛋白冠心病动脉硬化
- 细胞周期蛋白Ⅰ基因在骨髓间质干细胞诱导致瘤过程中的表达被引量：1
- 2009年
- 目的研究人骨髓间质干细胞（MSCs）诱导肿瘤的机制。方法取18只SCID裸鼠随机分为对照组和实验组，对照组注射MSCs，实验组注射F6细胞，于第4（176-4）、6（F6-6）、7（F6-7）周取肿瘤组织（每组3只）。4例肺癌患者的肺癌标本（LC）和癌旁标本为分别取自不同部位的手术病理标本。并用荧光差异显示技术（FDD）寻找差异基因；用PCR扩增、蛋白质印迹（WB）加以验证；实时荧光定量逆转录（FQ—RT）-PCR技术检测诱导致瘤细胞在裸鼠体内致瘤后致瘤组织基因表达水平。用粒-巨噬细胞集落刺激因子（GM—CSF）和白细胞介素4（IL-4）诱导MSCs致肿瘤细胞（F6细胞）。结果FDD结果显示，细胞周期蛋白（cyclin）Ⅰ基因高表达，与PCR、WB结果一致。FQ-RT—PCR表明，cyclinⅠ基因在MSCs、F6及3组F6致瘤组织细胞之间的表达水平差异有统计学意义（F=12．29，P〈0．01），F6组cyclinⅠ基因表达水平为4．49±0．40，MSCs基因表达水平为0．04±0．02，增高112倍（P〈0．01）。裸鼠皮下注射致瘤细胞后，第4，6，7周分离肿瘤组织内cyclinⅠ基因表达分别为1．82±0．80、3．30±0．43和3．68±1．67，且呈上升趋势（与MSCs对比，P分别为〈0．05或〈0．01）。4例肺癌患者肺癌组织基因表达分别为0．15±O．02、0．58±0．23、4．82±1．12、1．21±0．60，癌旁组织基因表达分别为0．04±0．02、0．09±0．04、0．94±0．74、0．15±0．08，肺癌组织内cyclinⅠ基因表达明显高于癌旁组织（F=12．39，P〈0．01）。WB证明F6细胞cyclinⅠ蛋白表达为0．32±0．08，MSCs蛋白表达为0．09±0．06，增高3．6倍（t=3．86，P〈0．05）。结论cyclinⅠ基因在MSCs诱导突变到肿瘤细胞形成过程中高表达，且在MSCs诱导肿瘤发生过程中可能发挥重要作用。
- 韩崇旭许文荣
- 关键词：肿瘤间质干细胞细胞周期蛋白类
- 基因芯片法检测21例耳聋患者基因突变的研究被引量：3
- 2012年
- 目的探讨基因芯片在耳聋基因筛查中的应用价值。方法对扬州市聋哑学校21例8～18岁的耳聋患者中4个耳聋相关基因上的9个热点突变进行检测,包括GJB2(35 delG、176 del16、235 delC及299 delAT)、GJB3(C538 T)、SLC26 A4(IVS7-2 A>G、A2168 G)以及线粒体12 S rRNA(A1555G、C1494T)。结果 SLC26A4突变阳性率为38%(8/21),其中IVS7-2A>G杂合突变7例,IVS 7-2 A>G与A 2 1 6 8 G杂合突变1例;GJB 2突变阳性率为1 9%(4/2 1),其中1 7 6 del 1 6杂合突变1例,299 delAT杂合突变1例,176 del 16与235 del C杂合突变1例,235 del C纯合突变1例。结论基因芯片是一种筛查耳聋基因的高效、经济、简便、灵敏及特异性方法。
- 韩崇旭任传利李贵玲汪骅张素华孙艳关兵
- 关键词：耳聋基因芯片基因突变
- 针对核干细胞因子腺病毒干扰载体构建与干扰作用观察
- 2015年
- 目的构建针对核干细胞因子(Nucleostemin)基因寂寞的RNA干扰腺病毒载体,观察其干扰作用。方法根据克隆的全长Nucleostemin基因(1 650bp,GenBank接受序号:AY825265)设计RNA干扰反向重复序列,采用分子生物学组装腺病毒载体,制备高效价RNAi重组腺病毒。实验分为Backbone-P1P2重组腺病毒感染组(P1P2干扰组)、Backbone-P3P4重组腺病毒感染组(P3P4干扰组)、Backbone空质粒病毒感染对照组(B组)和无病毒感染对照组。不同剂量腺病毒液RNAi(分别为60、30、15和7.5μL)转染F6细胞及U937细胞,采用蛋白质印迹法检测F6细胞及U937细胞中核干细胞因子的蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测U937细胞中核干细胞因子的mRNA表达水平。计数法绘制细胞生长曲线,判定细胞活力;流式细胞术检测细胞周期变化。结果靶向核干细胞因子基因的腺病毒RNA干扰载体(Backbone-P1P2,Backbone-P3P4)被成功构建。蛋白质印迹法检测结果显示,F6细胞内不同梯度浓度腺病毒RNA干扰后,核干细胞因子表达量分别为1.23、4.48、5.03和5.75,随P3P4片段RNA干扰浓度梯度下降而核干细胞因子表达量呈上升趋势。P1P2干扰组蛋白水平为0.219±0.051,与空质粒转染对照组的2.174±0.196比较明显降低,F=279.4,P<0.001;P3P4干扰组蛋白水平为0.0164±0.003,与空质粒转染对照组比较明显降低,F=363.4,P<0.001。P1P2干扰组基因表达水平为1.585±0.20,与空质粒转染对照组的3.932±0.271比较明显降低,F=145.9,P<0.001;P3P4干扰组基因表达水平为1.328±0.251,与空质粒转染对照组比较明显降低,F=149.9,P<0.001。细胞周期实验发现,核干细胞因子干扰后,P1P2腺病毒RNA干扰组为44.89±4.04,与空质粒转染对照组的54.74±3.28对比减低,F=10.75,P=0.031;P3P4干扰组为45.00±3.82,与空质粒转染对照组对比减低,F=11.23,P=0.029;S期+G2M期细胞P1P2干扰组为55.11±2.81,与空质粒转染对照组的45.26±1.72对比升高,F=26.82,P=0.007;P3P4
- 韩崇旭孙艳许文荣张锡然
- 关键词：核干细胞因子RNA干扰腺病毒基因表达细胞周期细胞增殖
- 血清CA19-9、CEA、CA125和CA50在胰腺癌诊断中的应用被引量：5
- 2009年
- 任传利邓小虎王大新韩崇旭胡兵周林
- 关键词：血清CA19-9CA125CA50胰腺良性肿瘤
- 干细胞及肿瘤细胞中nucleostemin基因的研究进展被引量：2
- 2013年
- Nucleostemin(NS)基因在干细胞中高表达,在干细胞分化时迅速减少,参与干细胞和肿瘤细胞的增殖调控,维持干细胞扩增并抑制其向成熟细胞分化,从而阻止细胞凋亡。NS基因在肿瘤细胞干细胞特性维持中也起重要作用。NS蛋白以依赖于GTP的形式穿梭于核仁和核质之间,参与核糖体特别是前核糖体rRNA的装配过程。NS基因与肿瘤发生关系密切,或可作为靶向治疗的候选基因。
- 韩崇旭许文荣孙艳
- 关键词：NUCLEOSTEMIN基因干细胞肿瘤
