国家自然科学基金(31211120168)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：周向东尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫李琪杨红菊更多>>
- 相关机构：俄罗斯医学科学院重庆医科大学附属第二医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- OGR1籍ERK信号通路参与酸性微环境致气道上皮细胞黏蛋白5AC表达被引量：1
- 2014年
- 目的探讨气道酸性微环境诱导气道上皮细胞黏蛋白5AC表达的上游信号通路调节机制。方法体外培养人气道上皮细胞(16HBE),以氯化氢创造细胞酸性环境(pH 6.4),以细胞外信号调节激酶(ERK)特异性抑制剂PD88059及卵巢癌G蛋白耦联受体1(OGR1)siRNA进行干预,将细胞随机分为8组:对照组、酸刺激组、酸刺激+转染OGR1 siRNA组、pH 7.4+OGR1siRNA组、酸刺激+阴性siRNA组、pH 7.4+阴性siRNA组、酸刺激+PD98059组、pH 7.4+PD98059组。采用RT-PCR、ELISA法分别观察细胞黏蛋白(MUC)5AC转录水平及培养上清液中MUC5AC蛋白水平的改变;Western blot法检测OGR1蛋白及p-ERK蛋白的相对含量。结果酸刺激组内细胞MUC5AC转录及蛋白水平显著高于对照组(P值均<0.05),其OGR1及p-ERK蛋白含量较对照组亦明显增加,酸刺激+转染OGR1 siRNA组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组(P值均<0.05),其p-ERK含量亦明显降低。而pH 7.4+OGR1 siRNA组MUC5AC蛋白含量及mRNA水平较pH7.4对照组无明显差别,其p-ERK含量也变化不大。酸刺激+PD98059组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平显著低于酸刺激组(P值均<0.05),而pH 7.4+PD98059组较对照组MUC5AC mRNA转录及蛋白水平无明显差异。结论 OGR1可能通过激活ERK信号通路参与气道酸性微环境所致的人气道黏膜上皮细胞MUC5AC表达。
- 周万周向东尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫
- 关键词：黏蛋白细胞外信号调节激酶
- 钙敏感受体通过ERK信号通路参与低氧诱导的人气道上皮细胞黏液高分泌被引量：3
- 2014年
- 目的探究钙敏感受体(Ca SR)在低氧诱导的气道黏液高分泌中的信号通路。方法低氧培养箱(37℃,94%N2-1%O2-5%CO2)培养人气道上皮细胞16HBE复制细胞低氧模型。分为对照组、低氧组、Ca SR特异性激动剂Ca Cl2+低氧组、对照siRNA+低氧组、Ca SR-siRNA+低氧组、细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路特异性抑制剂U0126+低氧组。RT-PCR检测黏蛋白(MUC)5AC的转录水平,Western blot检测Ca SR、ERK1/2及磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)的蛋白相对含量,ELISA检测MUC5AC的分泌水平,四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定细胞的活性。结果Ca SR表达于人气道上皮细胞,转染特异性的Ca SR-siRNA明显抑制Ca SR的表达。低氧组p-ERK1/2、MUC5AC mRNA和MUC5AC蛋白的相对含量分别为(0.63±0.11、0.51±0.03、0.56±0.07)较对照组(0.27±0.04、0.18±0.04、0.25±0.06)显著增加(P<0.05)。Ca SR的激动剂Ca Cl2可进一步增强低氧引起的上述作用(P<0.05),而转染Ca SR-siRNA及给予ERK信号通路特异性抑制剂U0126可抑制低氧引起的上述效应(P<0.05)。结论 Ca SR可通过MEK/ERK1/2信号通路参与低氧诱导的气道黏液高分泌。
- 杨红菊尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫周向东
- 关键词：钙敏感受体黏蛋白
- 钙敏感受体在缺氧诱导气道黏液高分泌中的作用被引量：1
- 2014年
- 目的 探讨钙敏感受体（CaSR）在缺氧诱导的气道黏液高分泌中的作用.方法 通过缺氧培养箱（94％ N2、1％ O2、5％ CO2、37℃）培养人气道上皮细胞HBE16的方法复制细胞缺氧模型.转染CaSR的小干扰RNA （siRNA）及预先给予CaSR特异性激动剂CaCl2、磷脂酶C信号通路不同的抑制剂：Gαq/11蛋白特异性抑制剂（YM-254890）,磷脂酶C特异性抑制剂（U73122）,三磷酸肌醇受体（IP3R）特异性抑制剂（2-APB）及细胞内Ca2＋螯合剂（BAPTA-AM）后,各组细胞再施以缺氧处理.采用反转录-PCR检测黏蛋白（MUC）5AC mRNA的转录水平,Western印迹法检测CaSR蛋白的表达水平,酶联免疫吸附（ELISA）法检测MUC5AC蛋白的相对含量,共聚焦显微镜观察细胞内Ca2＋浓度的变化.结果 缺氧组CaSR蛋白相对表达水平（0.423 ±0.028）显著高于对照组（0.185 ±0.036）（t=12.75,P＜0.001）;细胞内Ca2＋浓度、MUC5AC蛋白相对含量及MUC5AC mRNA相对表达水平[（154.2±11.4） nmol/L、（0.624±0.063） μg/L、0.736±0.045]也显著高于对照组[（67.5±2.8）nmol/L、（0.257 ±0.051）tμg/L、0.321±0.034]（t=18.04、11.06、18.05,均JP＜0.001）.CaCl2能上调缺氧引起的上述作用,转染CaSR siRNA能够下调缺氧引起的上述效应（均P＜0.001）.预先给予YM-254890、U73122、2-APB、BAPTA-AM处理细胞,细胞内Ca2＋浓度、MUC5AC蛋白相对含量及MUC5AC mRNA相对表达水平均显著低于单纯缺氧组（均P＜0.05）.结论 CaSR可通过Gαq/11/磷脂酶C/三磷酸肌醇/细胞内Ca2＋信号通路参与缺氧诱导的气道黏液高分泌.
- 杨红菊尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫周向东
- 关键词：黏蛋白类缺氧
- 黏着斑激酶在机械压力诱导的人气道上皮细胞黏液分泌中的作用
- 2014年
- 目的探讨黏着斑激酶(FAK)在机械压力诱导的人气道黏蛋白(MUC)5AC分泌中的作用。方法气液相界面培养人支气管上皮NHBE细胞,用Transwell压力实验装置间断性施压于NHBE细胞,黏着斑激酶(FAK)siRNA转染NHBE细胞,Western blot法检测FAK和p-ERK1/2蛋白含量,实时荧光定量PCR检测MUC5AC mRNA表达,ELISA法检测MUC5AC蛋白相对含量。结果与空白对照组相比,机械压力能显著升高MUC5AC mRNA及蛋白含量及p-ERK1/2蛋白相对表达水平(均P<0.01)。FAK siRNA可显著降低机械压力所诱导的MUC5AC mRNA及蛋白含量的升高及p-ERK1/2蛋白表达(P<0.01),但与转染FAK siRNA对照组相比,机械压力+转染FAK siRNA组细胞表达MUC5AC mRNA及蛋白水平和p-ERK1/2蛋白相对水平仍然是增加的(P<0.05),PD98059能显著抑制机械压力所诱导的MUC5AC mRNA及蛋白表达水平的升高(P<0.01)。FAK siRNA联合AG1478作用于NHBE细胞则可显著抑制机械压力诱导的MUC5AC mRNA和蛋白表达(P<0.01)。AG1478单独作用能有效降低由机械压力所诱导的上述指标的升高(P<0.05),但与AG1478对照组相比差异仍具有显著性。结论机械压力诱导的MUC5AC高表达的信号传导通路为ERK依赖的,FAK为ERK的上游信号分子。
- 李娜李琪尤列.皮尔曼维克多.科罗索夫周向东
- 关键词：黏着斑激酶黏蛋白类细胞外信号调节激酶
- 丙烯醛调控糖皮质激素受体类小泛素化水平对气道黏液高分泌的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨丙烯醛调控的糖皮质激素受体（GRs）类小泛素（SUMO）化水平对气道黏液高分泌的影响。方法构建重组真核表达载体质粒pcDNA3．1．EGFP．flag．SUM01，酶切电泳鉴定。常规培养16HBE细胞，随机分为9组：A：空白对照组；B：丙烯醛刺激组；C：地塞米松组；D：丙烯醛刺激＋地塞米松组；E：SUMO相关修饰物1（SUM01）转染组；F：空质粒转染组；G：SUM01转染＋丙烯醛刺激组；H：SUM01转染＋丙烯醛刺激＋地塞米松组；I：空质粒转染＋丙烯醛刺激＋地塞米松组。每个实验组设5复孔，重复4次实验用于统计学分析。荧光显微镜下观察转染成功率，通过免疫共沉淀以及Western印迹法分析各实验组GRsSUMO化水平的变化，反转录-PCR法比较各实验组中黏蛋白（MUC）5AC转录水平的差异。用酶联免疫吸附法测定细胞培养上清液中MUC5AC的分泌量。结果B组GRsSUMO化水平（0．079±0．023）低于A组（0．446±0．068）（t=-23．13，P=0．000）；D组GRsSUMO化水平（0．574±0．018）低于c组（0．843±0．028）（t=-36．34，P=0．000）。H组的MUC5ACmRNA转录水平（0．330±0．063）低于D组（0．617±0．190）（q=-7．80，P=0．000）。细胞培养上清液中MUC5AC分泌水平显示，G组与B组差异无统计学意义，而H组[（0．416±0．092）μg／L）]显著低于D组[（0．663±0．104）μg／L]和G组[（0．740±0．343）μg／L]（q=-7．31，-9．59；P=0．001，0．000）。结论丙烯醛可下调GRsSUMO化水平，并降低地塞米松对MUC5AC转录的抑制作用。
- 许瑞李琪周向东尤列·皮尔曼维克多·科罗索夫
- 关键词：丙烯醛黏蛋白类
