江苏省自然科学基金(BK2007067)
- 作品数：3 被引量：18H指数：3
- 相关作者：李相前杨海玉胡瑜刘亮伟吴华伟更多>>
- 相关机构：淮阴工学院河南农业大学长江大学更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金河南省科技攻关计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程更多>>
- 加入自我延伸过程的融合PCR程序被引量：6
- 2009年
- 比较了加入自我延伸过程的融合PCR程序与传统PCR在扩增融合基因的扩增效果,自我延伸程序(94℃×1min,52℃×1min,72℃×1min)扩增2次,分别用不同的延伸时间:1min、2min、3min、5min,发现用2min、3min、5min延伸时间扩增出的融合基因条带比传统PCR显著亮一些,而用延伸时间为1min时,两种程序扩增出融合基因条带的亮度相近,说明自我延伸程序中的延伸时间是影响融合基因扩增量的关键因素。加入自我延伸过程的融合PCR扩增程序为:94℃×5min,(94℃×1min,52℃×1min,72℃×5min)×2次循环,(94℃×1min,52℃×1min,72℃×1min)×30次,4℃store。
- 刘亮伟杨海玉胡瑜李相前
- 关键词：融合PCR融合基因
- 一种快速筛选重组耐高温β-葡聚糖酶大肠杆菌的方法被引量：3
- 2009年
- 目的:建立一种快速筛选重组耐高温葡聚糖酶大肠杆菌(Escherichia coli)菌株的方法,期望以此为高通量筛选模型,通过体外定向进化后得到在不改变耐高温性能的同时提高其纤维素酶解活性的突变体。方法:以刚果红染色法为基础,带有耐高温葡聚糖酶基因cel12B重组质粒的E.coli菌株依次经过通过菌落的原位尼龙膜转印、裂解、底物和酶的高温反应、显色、脱色一系列步骤,建立了完整的筛选流程,并考察了诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)用量和加入方式、转印前重组菌的培养时间、平板上的菌落密度、筛选平板中琼脂的用量、筛选平板的孵育温度与时间对筛选效果的影响。结果:当在诱导平板上预先涂上4μL5mg/mL诱导剂IPTG,于37℃放置2-3h后,再将适当菌液涂在平板上于同样温度诱导15h并控制每个平板上的菌落密度为50个/板,筛选平板中琼脂浓度为20g/L,筛选平板的孵育温度为70℃、时间为3h时产生的透明圈形状规则、大小合适、分布均匀,筛选效果最好。
- 吴华伟夏帆李相前
- 关键词：耐高温葡聚糖酶
- F/10木聚糖酶研究进展被引量：9
- 2009年
- 木聚糖酶广泛应用在食品加工、纸浆漂白、饲料添加剂、工业乙醇的生产,生物转化等领域。相对于G/11木聚糖酶,F/10家族在稳定性、耐酸性和耐碱性方面更有优越性,本文综述了该家族木聚糖酶的相关基因,酶分子空间结构及催化机理等基本特性,特别对热稳定性属性及基因工程改造其稳定方面进行了详细说明,为进一步进行酶分子改造和应用提供借鉴。
- 刘亮伟杨海玉胡瑜李相前
- 关键词：木聚糖酶热稳定性空间结构基因工程
