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江苏省自然科学基金(BK2007057): 作品数：13 被引量：33H指数：3; 相关作者：钱海鑫周晓俊秦磊侍阳胡明政更多>>; 相关机构：苏州大学江苏省人民医院徐州医学院附属医院更多>>; 发文基金：江苏省自然科学基金江苏省临床免疫学重点实验室基金徐州市科技计划项目更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

大鼠原位肝移植模型手术并发症的分析被引量：2: 2008年; 目的分析大鼠原位肝移植模型建立中手术并发症的发生原因,以制订防治措施,提高移植成功率。方法用SD大鼠作为供、受鼠,在Kamada等的袖套法大鼠肝移植模型的基础上改进,施行原位肝移植70例,对预实验中并发症的发生情况进行统计,统计在实验中的并发症发生率,并进行对比分析。结果预实验30只大鼠并发症发生率为70%,显著高于正式实验(12.5%)(P<0.05)。结论实验中发现并及时总结并发症的发生情况,通过改进手术方法和技巧,可显著提高正式实验的手术成功率及大鼠存活率。; 汪泳宇汝胜周晓俊钱海鑫; 关键词：原位肝移植

血红素氧合酶-1基因在大鼠供肝缺血再灌注损伤中的抗炎作用被引量：3: 2010年; 目的探讨血红素氧合酶-1（HO-1）基因在大鼠供肝缺血再灌损伤中的抗炎作用.方法将32只雄性SD大鼠分为实验组（16只）和对照组（16只）.将已转染HO-1基因的腺病毒载体和空载体分别注入实验组和对照组供体大鼠腹腔（各8只）.36 h后取供肝,冷保存4 h后行大鼠原位肝移植.缺血再灌注6 h后检测血清ALT、AST、TNF-α、肝组织HO-1蛋白的表达以及阳性巨噬细胞计数.采用t检验和秩和检验行统计学分析.结果（1）实验组血清ALT和AST分别为（439±81）U/L和（1110±73）U/L,对照组分别为（1005±120）U/L和（1583±175）U/L,两组比较,差异有统计学意义（t=11.090,7.050,P〈0.05）.（2）实验组和对照组血清TNF-α分别为（15±13）μg/L和（52±11）μg/L,两组比较,差异有统计学意义（t=0.009,P〈0.05）.（3）实验组和对照组肝组织HO-1蛋白的表达分别为0.28±0.07和0.04±0.03,两组比较,差异有统计学意义（T=42.5,P〈0.05）.（4）实验组中HO-1阳性细胞大量表达于血管区,其阳性巨噬细胞的计数为2±1,显著少于对照组的8±2（t=0.007,P〈0.05）.结论 HO-1在大鼠供肝缺血再灌注损伤中可能通过抑制肝巨噬细胞的激活,降低TNF-α的释放而发挥抗炎作用.; 胡明政张伯杨小华秦磊钱海鑫王学浩; 关键词：血红素氧合酶-1 肝移植缺血再灌注损伤

应用传统器械行单切口腹腔镜胆囊切除术: 2011年; 目的探讨应用传统腹腔镜器械行单切口腹腔镜胆囊切除术(SILC)的可行性和安全性。方法回顾性分析48例SILC(SILC组)和常规三孔法传统腹腔镜胆囊切除术(LC组)50例的临床资料,比较手术效果和术后并发症。结果两组病例无中转开腹、无胆道损伤。SILC组48例顺利完成手术,其中46例(95.8%)术中辅以右侧肋缘下经皮穿刺缝合胆囊底浆膜层悬吊,用于牵引和暴露。SILC组的手术时间明显长于LC组(45 min vs.30 min)(P<0.05),术后疼痛评分略高于LC组,其他各项指标的差异均无统计学意义。结论应用传统腹腔镜器械开展SILC安全可行。; 毛忠琦周晓俊殷骏徐露朱政陈昕钱海鑫; 关键词：腹腔镜胆囊切除术

Rel-A siRNA对大鼠树突状细胞的影响: 2009年; 目的探讨siRNA沉默Rel-A基因表达对大鼠树突状细胞(DC)生物学效应的影响。方法采用细胞因子诱导培养法体外扩增大鼠骨髓DC,经免疫磁珠纯化获得高纯度DC后,针对Rel-A基因,采用半定量RT-PCR及Western blot分别从mRNA和蛋白质水平检测Rel-A的表达情况,筛选一对高效RNA干扰(RNAi)行慢病毒载体包装并转染DC(RNA干扰组),以未转染RNAi的DC作为对照组。分别给予1mg/L的脂多糖(LPS)刺激,透射电镜观察RNAi对LPS促DC成熟的影响,并利用流式细胞术(FCM)检测DC表面CD80,CD86及MHCⅡ分子的变化;混合淋巴细胞反应(MLR)法检测T细胞增殖能力;ELISA法检测DC分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)和白介素12(IL-12)的浓度。结果与空白对照组相比,序列2组降低最明显,抑制率达90%,差异有统计学意义;透射电镜下可见RNAi Rel-A DC内多吞噬泡样结构;RNA干扰组CD80,CD86,MHCⅡ分子的表达、T细胞增殖能力及TNF-α,IFN-γ,IL-12的浓度与对照组相比均显著下降。结论RNA干扰技术能显著下调大鼠Rel-A基因的表达,Rel-A基因沉默DC的生物学效应表现为未成熟DC的特点。这种RNAi Rel-A DC可望作为一种新型的致耐受DC,而应用于免疫耐受的诱导研究。; 汪泳宇汝胜周晓俊秦磊钱海鑫; 关键词：RNA干扰树突状细胞基因表达

二袖套法大鼠原位肝移植50例被引量：2: 2007年; 目的建立稳定的大鼠肝移植动物模型。方法参考Kamada二套袖法并稍作改进,预实验后,双人行大鼠原位肝移植50例。结果手术成功率(存活24 h以上)90%,2周存活率78%。结论熟练的外科技术、默契配合、标准化的手术操作以及手术细节的完善程度是模型成功与否的关键。; 侍阳周晓俊殷骏秦磊牛坚钱海鑫; 关键词：肝移植

大鼠原位肝移植模型的手术操作技巧探讨被引量：3: 2008年; 目的建立一个稳定的大鼠原位肝移植模型,探讨其手术技巧。方法在Kamada"二袖套法"的基础上进行改良。供体改经腹主动脉进行肝脏冷灌注;肝上下腔静脉用连续缝合法吻合,门静脉和肝下下腔静脉用袖套法吻合,胆总管采用单管内支架胆管端端吻合法。结果共施行大鼠原位肝移植140例,无肝期平均11min,手术成功率为97%,大鼠1周存活率为95%。结论改良的两袖套法具有操作简便、无肝期短、手术成功率高、大鼠术后存活时间长的优点,是大鼠原位肝移植的理想术式。娴熟细致的外科操作、受体无肝期的长短是决定动物存活的关键。; 宇汝胜汪泳钱海鑫; 关键词：肝移植动物模型

大鼠肝缺血/再灌注后肝组织一氧化氮和不同亚型一氧化氮合酶的变化被引量：9: 2008年; 目的探讨一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶(NOS)在肝缺血/再灌注(I/R)过程中的变化和作用。方法健康雄性SD大鼠24只,随机分为3组(每组8只):①正常对照组,术中只分离肝周围韧带,不做肝门阻断及再灌注。②I/R组,进行45 min的部分肝门阻断及60 min的再灌注。③L-精氨酸(L-Arg)组,缺血前20 min经阴茎背静脉注射L-Arg(300 mg/kg),余同②组。实验结束后,取下腔静脉血2 ml,并迅速切取缺血肝组织。检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH);测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合成酶(NOS)等指标;观察光镜和电镜下肝组织学变化。结果与正常对照组相比,I/R组iNOS升高,NO降低;L-Arg组NOe、NOS均高于I/R组。2、3组比1组大鼠的肝组织病理损害重、肝功能差,L-Arg组病理损害较I/R组明显减轻、肝功能改善。结论NO对大鼠肝I/R损伤具有保护作用,不同亚型NOS的变化参与其中。; 侍阳钱海鑫秦磊周晓俊; 关键词：一氧化氯一氧化氮合酶缺血预处理

转染血红素氧合酶-1基因减轻人肝细胞体外缺氧-复氧损伤被引量：3: 2009年; 目的探讨血红素氧合酶1重组腺病毒载体（Ad-HO-1）体外转染人肝细胞的转染效果及其对肝细胞缺氧-复氧损伤的影响。方法取人肝细胞系L-02细胞，滴加低温保存的Ad-HO-1，分别培养24h、48h和72h（24h组、48h组和72h组），并以加入空载体腺病毒共培养的L-02细胞为空白对照。采用逆转录聚合酶链反应法检测各组肝细胞HO-1 mRNA的表达水平；以间接免疫荧光标记法检测各组肝细胞的HO-1表达率；在倒置荧光显微镜下观察转染24h和72h的肝细胞中绿色荧光蛋白（EGFP）的表达。取空白对照组肝细胞（培养48h）和48h组肝细胞，缺氧培养4h后再有氧培养8h，采用四甲基偶氮唑盐法测定两组肝细胞存活率。结果24h组、48h组和72h组HO-1 mRNA表达水平明显高于空白对照组，且随着转染时间的延长，HO-1 mRNA的表达水平逐渐升高。空白对照组HO-1的表达率为2．0％，24h组为29％，48h组为85．6％，72h组为84．6％。基因转染后24h和72h，可以观察到L-02细胞中EGFP的表达。经历缺氧-复氧实验后，空白对照组肝细胞的存活率为（37．7±3．5）％，48h组肝细胞的存活率为（89．4±5．2）％，二者相比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Ad-HO-1在体外能有效的转染人肝细胞；与未转染者相比，转染肝细胞的缺氧-复氧损伤程度较轻。; 汪慧访秦磊胡明政钱海鑫; 关键词：腺病毒科细胞低氧

大鼠肝缺血再灌注后肝细胞内糖原含量及细胞膜ATP酶活力的变化被引量：3: 2011年; 目的探讨肝细胞内糖原含量及细胞膜ATP酶活力与肝缺血再灌注(I/R)损伤的关系及相关机制。方法健康雄性SD大鼠16只,随机分为2组(每组8只),①对照组:术中只分离肝周围韧带,不作肝门阻断及再灌注;②I/R组:进行45 min的部分肝门阻断及60 min的再灌注。取下腔静脉血2 mL,并迅速切取缺血肝组织。检测血清丙氨酸转氨酶(ALT)、门冬氨酸转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH);测定肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、黄嘌呤氧化酶(XOD)、肝糖原、Na+K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶、Mg2+-ATP酶等指标。结果 I/R组MDA、XOD较对照组升高;SOD、肝糖原、Na+K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶下降(P<0.05)。结论肝I/R损伤与肝细胞生物能量缺乏、细胞膜离子泵功能障碍有关。; 侍阳宋庆伟李向农周晓俊钱海鑫; 关键词：肝糖原 ATP酶

大鼠4-1BB基因shRNA表达质粒的构建、鉴定和筛选: 2013年; 目的为研究小干扰RNA（siRNA）在移植免疫、肿瘤防治等方面的应用，构建针对大鼠T细胞4-1BB基因编码区的短发夹RNA（shRNA）表达质粒。方法根据RNA干扰（RNAi）作用原理，设计、合成4条T细胞4-1BB基因的shRNA（shRNA441、shRNA540、shRNA621、shRNA758）DNA片段，插入质粒pGPU6，构建4个编码目的shRNA的表达质粒（p441、p540、p621、p758），酶切及测序鉴定。设对照组，利用电穿孔法在体外将目的基因片段导入BN大鼠T细胞，48h后，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和流式细胞术（FCM）检测其对T细胞4-1BB基因表达的抑制作用，并筛选、确定最佳效果的干扰质粒。结果酶切及测序证实成功构建重组干扰质粒v441、p540、p621和p758，转染T细胞后，4-1BB相对表达量分别为（33．4±2．3）％、（53．0±2．3）％、（62．1±3．1）％、（40．9±1．5）％，对照组4-1BB相对表达量为（67．2±1．5）％。其中p441沉默效果最佳（P〈0．01）。结论siRNA具有抑制活化T细胞4-1BB基因表达的作用，干涉靶点具有选择性。; 侍阳宋庆伟于生才周晓俊殷骏钱海鑫; 关键词：小干扰RNA 基因沉默

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