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江苏省自然科学基金(BK2007032)
作品数:
5
被引量:6
H指数:2
相关作者:
郑骏年
李望
温儒民
刘俊杰
薛松
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相关机构:
徐州医学院附属医院
徐州医学院
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5篇
医药卫生
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肾癌
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作者
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郑骏年
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李望
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刘俊杰
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温儒民
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孔德领
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2009
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表达端粒酶逆转录酶siRNA的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用
被引量:3
2009年
目的观察表达针对端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的小干扰RNA(hTERTsiRNA)的溶瘤腺病毒(ZD55-hTERT)抑制肾癌移植瘤生长作用。方法荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只。瘤体内分别注射ZD55-hTERT、增殖缺陷型腺病毒(Ad—hTERT)、溶瘤腺病毒ZD55.EGFP及磷酸盐缓冲液(PBS),每次注射病毒7×10^8pfu/只,连续注射3d。注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤hTERT、E1A表达及凋亡。第50天时处死动物测量肿瘤体积。结果ZD55-hTERT、Ad—hTERT、ZD55-EGFP及PBS处理组肿瘤体积(mm^3)分别为:124.1±27.5、609.0±102.5、499.8±77.1、1552.1±206.4,ZD55-hTERT处理组与各组之间差异有统计学意义(P〈0.01)。Ad—hTERT处理组肿瘤无EIA表达,ZD55-hTERT处理组E1A大量表达,表明病毒复制。ZD55-hTERT处理组肿瘤hTERT表达显著低于Ad—hTERT处理组,凋亡细胞阳性率均显著高于Ad—hTERT处理组。结论表达hTERTsiRNA的溶瘤腺病毒ZD55-hTERT具有更强的抑制肾癌生长作用。
薛松
郑骏年
李望
李海龙
朱海涛
辛勇
刘俊杰
徐为
宋文哲
刘斌
高超
顾玉明
关键词:
肾癌
溶瘤腺病毒
HTERT基因
表达白细胞介素-18的结肠癌瘤苗抗肿瘤作用及其机制
2008年
目的观察表达人白细胞介素(hIL)-18的结肠癌移植瘤新生血管生成及肿瘤生长。方法0.1ml单克隆化的人结肠癌sw480细胞、携有绿色荧光蛋白表达质粒的pEGFP—sw480细胞、携有hIL-18基因表达质粒的hIL-18-pEGFP-sw480细胞(1×10^8个/ml)分别注射裸鼠,每组5只。ELASA法检测裸鼠血清IL-18含量;记录成瘤时间及瘤体大小;免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF、MMP-9及微血管密度(CD34表达);TUNEL法检测移植瘤组织凋亡。结果hIL-18-pEGFP—sw480组成瘤时间为(26.2±1.8)d,而pEGFP—sw480、sw480组分别为(14.8±2.8)d和(14.6±1.9)d。注射42d后,hIL-18-pEGFP—sw48组裸鼠血中IL-18含量为(63.58±13.75)ng/L。hIL-18-pEGFP—sw480、pEGFP—sw480、sw480组肿瘤平均体积(mm^3)分别为:336.39±28.50、1029.08±114.84、957.96±91.55。hIL-18-pEGFP-sw480组肿瘤明显小于sw480组和pEGFP-sw480组(P〈0.01)。微血管密度(CD34)分别为(9.08±4.01)、(32.48±8.84)、(33.32±3.39),MMP-9灰度值分别为143.2±6.8、114.6±5.4、110.2±5.9;VEGF灰度值分别为140.8±9.2、108.5±8.7、107.3±4.9,hIL-18-pEGFP-sw480组血管生成及促血管生成因子表达明显减少;hIL-18-pEGFP—sw480组凋亡细胞阳性率(30.32±7.23)%明显高于pEGFP—sw480组(6.32±1.18)%和sw480组(5.80±2.28)%(P〈0.01)。结论IL-18可明显减少裸鼠结肠癌sw480细胞移植瘤的血管生成,促进肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长。
徐为
符炜
薛亮
裴锐锋
郭贞
吾木扎克
刘俊杰
韩东
裴冬生
郑骏年
关键词:
结肠癌
白细胞介素18
基因治疗
G250启动子的克隆及其在人肾癌细胞中的特异生物活性
被引量:2
2008年
目的克隆G250启动子并插入pGL3-Basic真核表达载体,探讨G250启动子在肾癌细胞中的特异生物活性。方法提取宫颈癌Hela细胞总DNA作为模板,设计两对引物进行PCR,获取两段不同长度的G250启动子片段。测序后分别将获取的551bp和218bp启动子片段克隆到pGL3-Basic载体中,构建双荧光素酶检测质粒pGLB-G551和pGLB-G218。将pGL3-Basic、pGLB-G551、pGLB-G218各μg转染G250阳性宫颈癌Hela细胞、肾癌Ketr-3细胞。运用双荧光素酶检测技术,确定G250启动子的转录活性。结果电泳与测序结果显示,两段G250启动子片段与报道序列一致。酶切与测序结果显示,质粒pGLB-G551、pGLB-G218构建成功。转染pGLB-G551、pGLB-G218的Hela细胞相对荧光素酶活性分别为pGL3-Basic的11.07倍、10.36倍。Ketr-3细胞分别为pGL3-Basic的5.17倍、4.13倍。与空载体pGL3.Basic比较,pGLB-G551和pGLB-G218的相对荧光素酶活性均明显增强(P〈0.05)。pGLB-G551和pGLB-G218比较,相对荧光素酶活性差异无统计学意义(P〉0.05)。结论成功克隆出肾癌特异性G250启动子,并证明具有良好转录活性,218bp的启动子片段已具有G250启动子的所有启动效果。
薛松
郑骏年
温儒民
郝林
毛立军
孔德领
关键词:
启动子
克隆
肾细胞癌
表达白细胞介素-18的溶瘤腺病毒对裸鼠肾癌移植瘤的治疗作用
被引量:1
2008年
目的观察表达IL-18的溶瘤腺病毒(ZD55-IL18)对裸鼠肾癌移植瘤生长及血管形成的抑制作用。方法荷肾癌裸鼠随机分4组,每组8只。瘤体内注射ZD55-IL18、溶瘤腺病毒ZD55-EGFP、表达IL-18的增殖缺陷腺病毒Ad-IL18及PBS,每次注射病毒7×10^8PFU/只,连续注射3d。注射后第7天,每组处死3只取肿瘤组织,免疫组织化学检测肿瘤E1A、IL-18、CD34、VEGF表达及凋亡。第50天时处死动物测量肿瘤体积。结果ZD55-IL18、zD55.EGFP、Ad.IL18及生理盐水处理组肿瘤体积(mm^3)分别为:299.7±52.9、536.8±90.3、570.3-4-99.0、766.1±145.8,ZD55-IL18与各组之间差异有统计学意义(P〈0.01)。Ad-IL18处理组肿瘤无E1A蛋白表达,ZD55-IL18处理组有大量E1A蛋白表达,表明病毒复制。ZD55-IL18处理组肿瘤IL-18表达及凋亡细胞阳性率均显著高于Ad-IL18处理组。ZD55-IL18处理组肿瘤CD34、VEGF表达均显著低于Ad-IL18处理组。结论表达IL-18的溶瘤腺病毒ZD55-IL18比增殖缺陷腺病毒Ad-IL18具有更强的抑制肾癌生长及血管形成作用。
陈仁富
郑骏年
史震
李望
孙方浩
温儒民
关键词:
溶瘤腺病毒
白细胞介素18
肾癌
肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆、表达及鉴定
2008年
目的探讨肾癌肿瘤相关抗原G250及G250蛋白多糖(PG)区基因的克隆,蛋白表达及鉴定。方法从肾癌细胞786-0中提取mRNA,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增出G250及G250PG区cDNA。将获得的cDNA片段插入pET28a(+)表达载体,构建重组质粒pET-28a(+)-G250/pET-28a(+)-G250PG,转化DH5α大肠杆菌。通过PCR鉴定筛选出正确的重组子,并用其转化BL21 Codon Plus菌。采用IPTG诱导工程菌进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果克隆的基因经测序证实,G250/G250 PG区序列正确。构建重组质粒pET-28a(+)-G250/pET-28a(+)-G250 PG,并在原核系统中表达G250/G250 PG重组蛋白,目的蛋白均具有较好的抗原性和特异性。结论成功完成G250/G250 PG区基因克隆及表达,为在G250/G250 PG蛋白纯化基础上进行抗体制备和G250功能研究提供了实验依据。
刘俊杰
郑骏年
吴洋
李望
郑宏祥
温儒民
刘晓筠
毛立军
裴冬生
孔德领
关键词:
肾细胞癌
抗原
蛋白多糖
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