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基因1b型不同准种株HCV核心蛋白原核表达质粒pTrc-CKS构建及诱导表达: 2009年; 目的为研究与不同准种HCV核心蛋白(Core)相互作用的细胞蛋白质组,构建并表达基因1b型的不同准种Core的原核表达质粒pTrc-CKS。方法用聚合酶链反应(PCR)扩增并获得等长度片段的基因1b型的不同准种株丙型肝炎病毒(HCV)Core基因,氨基酸(aa)长度分别为癌中心株(T):1～172 aa、癌旁株(NT):1～172 aa及C191(HCV-J6):1～172 aa。扩增产物用BamHⅠ及EcoRⅠ双酶切后插入到原核表达质粒pTrc-CKS中。阳性克隆转化到大肠埃希菌Top 10F’中,异丙基-β-D-S-代半乳糖苷(IPTG)诱导表达获得融合蛋白CKS-Core-His,经Ni2+10F’柱纯化并经Westernblot验证。结果PCR及双酶切验证表明3个基因为1b型的不同准种Core基因成功构建到原核质粒pTrc-CKS中,体外诱导并获得了相应的融合蛋白。结论构建不同准种Core基因的原核表达质粒获得成功,体外诱导表达并纯化获得了CKS-Core-His融合蛋白,为后续研究与Core相互作用的细胞蛋白质组奠定了基础。; 汪明珊颜学兵周林福侯晓丽李杨霞温晓芳姜云水陈智; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白质粒构建

基因1b型HCV核心蛋白不同功能区域对HepG2细胞生长的影响被引量：2: 2008年; 目的研究基因1b型丙型肝炎病毒（HCV）不同病毒株编码的核心蛋白（CORE）：癌中心株（T）、癌旁株（NT）、C191（HCV—J6）及同一病毒株（T）编码的不同功能区域（1～172、1～126、1～58、59～126、127—172AA）在HCV致病机制中的作用，为治疗HCV感染提供靶位。方法将含有3个不同病毒株（T、NT及C191）及T不同功能区域的CORE真核表达质粒，转染到HepG2细胞，用流式细胞仪检测Annexin V／PI，并用细胞生长实时观察仪观察细胞生长曲线。结果基因1b型T、NT、C191和T不同功能区域的CORE均能诱导HepG2细胞凋亡和坏死且抑制了细胞的生长，其中，T诱导细胞凋亡和坏死及抑制细胞生长强于NT和C191，T的CORE的N端1～58AA诱导细胞凋亡和坏死及抑制细胞生长均高于其他功能区域。结论HCV基因1b型不同病毒株及同一病毒株编码的CORE不同功能区域的分子致病机制存在一定的差异，N端的1～58AA在CORE的致病机制中起重要作用，可能是基因治疗的重要靶位之一。; 颜学兵梅蕾陈智郑敏周林福许小燕吴炜; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白细胞生长曲线

金属硫蛋白研究进展被引量：4: 2010年; 金属硫蛋白(metallothionein,MT)是近来发现的人类肿瘤细胞表面表达的一个生物学标记。本文就MT与肿瘤的关系等方面的研究进行了综述,并对MT研究中存在的问题进行探讨及展望。; 赵晓迎韩方正; 关键词：金属硫蛋白肿瘤

7株不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白的差异研究: 2012年; 目的通过比较不同原核质粒表达丙型肝炎核心蛋白(CORE)的差异,筛选出能高效表达CORE的原核质粒。方法用PCR扩增并获得CORE基因,扩增产物分别构建到7种不同原核表达质粒中,重组质粒用IPTG诱导表达,聚丙烯凝胶电泳(SDS-PAGE)初步鉴定表达产物,并经Western blot验证。结果 PCR及双酶切验证表明CORE基因成功构建到7种原核质粒中,SDS-PAGE验证各融合质粒表达目的蛋白存在差异,其中pTrc-CKS-CORE及Pmbp-C-CORE可见相应的融合蛋白表达,以pTrc-CKS-CORE表达量高,表达产物经Western blot验证表达成功。结论成功构建7株不同CORE原核表达质粒,各融合质粒表达CORE存在较大差异,筛选出高表达CORE质粒,为下一步研究奠定基础。; 汪明珊颜学兵周林福李杨霞; 关键词：丙型质粒构建

蛋白激酶R与丙型肝炎病毒核心蛋白相互作用区域定位: 2007年; 目的:观察丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白(CP)对蛋白激酶R(PKR)表达的影响;定位PKR与CP直接结合的区域。方法:对Huh-7、转染表达CP的Huh-7及含有全长HCV复制子(replicon)Huh-7细胞株的PKR表达水平及干扰素(IFN)诱导前后replicon Huh-7细胞中HCV结构蛋白和非结构蛋白表达水平作比较;对CP与PKR进行免疫共沉淀试验、谷胱苷肽S转移酶(GST)结合试验。结果:Replicon Huh-7中PKR表达水平高于Huh-7及转染表达CP的Huh-7;IFN诱导后PKR表达增加,且明显抑制HCV结构和非结构蛋白的表达;PKR能与CP直接结合,依赖于PKR的N端1-180氨基酸(aa)。结论:CP能直接作用于PKRN端1-180aa,导致PKR组成性激活,从而干扰PKR介导的相关信号转导通路。CP与PKR的相互作用是HCV病毒蛋白与细胞蛋白相互作用又一新的模式,在HCV持续感染及肝癌2者发病机制方面可能起重要作用。; 颜学兵季芳傅涓涓汪莉萍梅蕾潘修成韩方正张言超; 关键词：病毒核心蛋白质类

基因1b型HCV不同截短片段核心蛋白在HepG2亚细胞器中的定位表达被引量：1: 2008年; 目的为进一步探讨HCV核心蛋白（CORE）在HCV致病机制中的作用，观察基因1b型不同截短片段CORE在瞬时转染HepG2细胞中亚细胞器的分布状况。方法将含有增强型绿荧光蛋白（EGFP）的3个基因1b型不同准种HCV和同一准种5个不同截短片段的CORE融合蛋白真核表达质粒pEGFF-CORE，瞬时转染HepG2细胞，用荧光显微镜及激光共聚焦观察它们在亚细胞的分布状况。结果基因1b型不同准种CORE的N端1-172氨基酸（aa）主要表达于胞质，含有N端越长表达于胞质内越多，而N端1-58aa主要表达于核内，而59-126aa及127-172aa胞质和核内均有表达。结论不同区段CORE在细胞内亚细胞器的表达部位不同，与其在致病机制中功能的发挥可能存在一定的关系。; 颜学兵梅蕾汪明珊; 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白亚细胞器

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江苏省自然科学基金(BK2007031)