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国家自然科学基金(30400265)

作品数:6 被引量:50H指数:5
相关作者:杨慧龄徐阳炎涂剑廖端芳何淑雅更多>>
相关机构:南华大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金湖南省自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生生物学更多>>

文献类型

  • 4篇中文期刊文章

领域

  • 3篇医药卫生
  • 1篇生物学

主题

  • 2篇小凹
  • 2篇小凹蛋白
  • 2篇小凹蛋白1
  • 2篇酶链反应
  • 2篇聚合酶
  • 2篇聚合酶链反应
  • 2篇合酶
  • 1篇蛋白
  • 1篇信号
  • 1篇信号传导
  • 1篇血管
  • 1篇血管紧张
  • 1篇血管紧张素
  • 1篇血管紧张素转...
  • 1篇血管紧张素转...
  • 1篇生理学
  • 1篇特异
  • 1篇特异性
  • 1篇窖蛋白
  • 1篇紧张素

机构

  • 3篇南华大学

作者

  • 3篇徐阳炎
  • 3篇杨慧龄
  • 2篇涂剑
  • 2篇廖端芳
  • 1篇覃丽
  • 1篇何淑雅
  • 1篇游咏
  • 1篇罗迪贤

传媒

  • 2篇中国动脉硬化...
  • 1篇中华医学遗传...
  • 1篇Chines...

年份

  • 1篇2008
  • 2篇2006
  • 1篇2005
6 条 记 录,以下是 1-4
排序方式:
提高窖蛋白基因扩增特异性的逆转录聚合酶链方法被引量:6
2006年
目的建立一种可消除逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase-polymerase chain reaction,RT-PCR)中非特异条带生成,提高逆转录聚合酶链反应精确度的PCR体系。方法最近作者报道了硫化修饰的引物结合具有校正活性聚合酶可提高PCR反应特异性,但其抑制非特异性扩增的效率有待进一步验证和精确测定。用小鼠窖蛋白1(caveolin-1,Cav1)中1对引物,ECV304细胞、HepG2细胞、小鼠肝、主动脉血管组织逆转录cDNA以及含人窖蛋白基因的倍比稀释质粒为模板,比较普通RT-PCR反应与硫化修饰引物结合不同校正活性聚合酶对非特异性扩增的抑制效率。结果引物3′末端硫化修饰结合具有校正活性的聚合酶可特异性关闭PCR反应中引物3′末端与模板非特异结合而引起的非特异性扩增,只允许引物3′末端与模板完全匹配的延伸反应得以进行。与普通PCR反应相比,能有效抑制50μL体系中,50ng约含2×104不匹配模板拷贝数的非特异扩增。结论引物3′端引入抗酶切的硫化修饰后,引物与模板非特异结合将由于校正活性聚合酶长期停留在试图纠正引物与模板不一致状态而得不到有效延伸,提高了PCR反应的特异性。
徐阳炎杨慧龄游咏覃丽涂剑
关键词:聚合酶链反应
pcDNA3.1/NT-GFP小凹蛋白1及突变体表达载体的构建及功能分析被引量:7
2005年
目的构建pcDNA3.1/NTGFP小凹蛋白1及对突变体表达载体及表达蛋白生物活性进行分析。方法采用硫化修饰引物与Pfu酶结合的高度保真性聚合酶链反应体系,自行设计多对引物,分别扩增带His标签的小凹蛋白1全长目的片段、小凹蛋白1(缺失81~101位氨基酸)突变体1片段及小凹蛋白1(缺失143~156位氨基酸)突变体2片段;分别亚克隆入pcDNA3.1/NTGFPTOPO真核表达载体,转化TOP10E.coli大肠杆菌,在含氨苄的固体LB培养基上随机挑取6个克隆,分别提取质粒后,用PCR法筛选含正确插入阅读框的阳性克隆子并测序鉴定。用脂质体介导法瞬时转染入HepG2细胞,用MTT法、Westernblot法初步鉴定GFPHis小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白的生物学活性。结果筛选得到正确pcDNA3.1/NTGFPHis小凹蛋白1及突变体表达载体,测序结果无碱基突变及阅读框移码,GFPHis小凹蛋白1及突变体重组融合蛋白具有天然表达蛋白相似的生物学活性。结论成功构建具有生物学活性的pcDNA3.1/NTGFP小凹蛋白1及突变体表达载体,为小凹蛋白1的功能研究奠定基础。
徐阳炎杨慧龄涂剑何淑雅廖端芳
关键词:小凹蛋白1聚合酶链反应
Chemokine SR-PSOX/CXCL16 expression in peripheral blood of patients with acute coronary syndrome被引量:17
2008年
Background Scavenger receptor that binds phosphatidylserine and oxidized lipoprotein/CXC chemokine ligand 16 (SR-PSOX/CXCL16) promotes foam cell formation through the tumor necrosis factor (TNF)-α mediated mechanism. Because chemokine CXCL16 could be expressed in atherosclerotic lesions and induce smooth muscle cell (SMC) proliferation, we'presume that the monocyte SR-PSOX/CXCL16 detection in the patients' peripheral blood will be important for early diagnosis and prognosis of atherosclerosis (AS). Methods Enrolled in this study were 40 patients with acute coronary syndrome (ACS), including 20 patients with acute myocardial infarction (AMI) and 20 patients with unstable angina pectoris (UAP), and 20 normal controls. Monocytes in the peripheral blood were isolated, and the changes of expression of CXCL16/SR-PSOX mRNA were compared using reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), with β-actin as internal control. We compared the expression of CXCL16/SR-PSOX in the ACS subgroups, using Western-blot to analyze protein expression levels. Tissue sections were made from biopsy specimens taken from patients with infective endocarditis, liver cirrhosis, and lung cancer as well as normal controls. And the expression of CXCL16/SR- PSOX was analyzed with a confocal microscope. Results The expression of CXCL16/SR-PSOX mRNA and protein in the monocytes of peripheral blood was significantly higher in ACS patients than in normal controls (P〈0.05); however, there was no significant difference in CXCL16/SR-PSOX expression between UAP group and AMI group (P〉0.05). Immunofluorescence showed that there were low expression of SR-PSOX in normal vascular endothelial cells and enhanced expression in every layer of the infected vessels, while spreading from endothelial cells to surrounding tissues as infection worsens. Confocal microscopy showed that the expression of SR-PSOX was enhanced in the infiltrated lymphocytes in liver cirrhosis, and that the expression level was pr
YANG Hui-lingXU Yang-yanDU Li-fenLIU Chang-huiZHAO QiangWEI Wu-jieYOU YongQUAN Zhi-hua
关键词:PHOSPHATIDYLSERINEMONOCYTES
小凹蛋白1可能参与血管紧张素转化酶2介导的病毒感染被引量:2
2006年
小凹是细胞信号在细胞膜区域的枢纽结构,为细胞内外信号转导发生、募集、串联、级联、交汇(cross-talk)的集散单元。其表面标志蛋白是小凹蛋白。小凹蛋白基因家族的结构与功能在进化中从蠕虫到人都是非常相似与保守的,其生物学功能研究是近年的热点研究领域之一。本文就小凹/小凹蛋白在介导血管紧张素转化酶2介导的病毒感染作用提出一些新思路。
杨慧龄徐阳炎罗迪贤廖端芳
关键词:病理学与病理生理学小凹病毒感染信号传导血管紧张素转化酶2
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