武汉市青年科技晨光计划(20025001038)
- 作品数：5 被引量：25H指数：4
- 相关作者：马立新张桂敏刘振张晚鸣李春华更多>>
- 相关机构：湖北大学更多>>
- 发文基金：武汉市青年科技晨光计划湖北省自然科学基金湖北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 硅胶破碎法抽提真菌染色体DNA被引量：4
- 2006年
- 在进行基因组步行PCR克隆真菌木聚糖酶基因的研究中,探索并建立了一套可在普通分子生物学实验室采用的高得率、高质量真菌染色体DNA的抽提方法.采用液氮研磨和硅胶破碎相结合提高染色体DNA得率,采用亚精胺法纯化提高DNA的纯度.抽提的染色体DNA用琼脂糖凝胶电泳、限制酶切、PCR反应及紫外吸收光谱等方法进行了鉴定,结果显示此方法可以获得分子量大、样品纯的染色体DNA,可有效地用于PCR扩增,并能被限制酶有效地消化.
- 张桂敏唐文杰班静马立新
- 关键词：真菌染色体DNA
- 植酸酶和甘露聚糖酶双功能毕赤酵母工程菌的构建和产酶分析被引量：4
- 2007年
- 根据已发表的植酸酶基因和甘露聚糖酶基因序列设计并合成引物,应用PCR技术,分别以土曲霉总DNA和质粒pHBM1201为模板,扩增出均不含假定信号肽序列的植酸酶基因phyA和甘露聚糖酶基因man,将它们各自克隆到毕赤酵母表达载体pHBM907C上,分别得到重组质粒pHBM907C-phyA和pHBM907C-man。将质粒pHBM907C-phyA上由乙醇氧化酶(AOX1)启动子和终止子引导表达、酿酒酵母α信号肽序列引导分泌的phyA表达盒式结构插入到质粒pHBM907C-man中,构成双基因表达分泌质粒pHBM907C-phyA-man。pHBM907C-phyA-man经SalⅠ酶切线性后转化毕赤酵母(Pichiapastoris)GS115,获得了同时分泌表达植酸酶和甘露聚糖酶的双功能酵母工程菌。研究了该酵母工程菌所分泌表达的重组植酸酶和甘露聚糖酶的相关酶学性质,并进行了双功能酵母工程菌的稳定性测试。
- 黄生平汪昌丽张桂敏马立新
- 关键词：植酸酶甘露聚糖酶毕赤酵母共表达
- 一种简便快速筛选重组子的方法被引量：7
- 2005年
- 将转化后的单菌落置于快检缓冲液中,振荡后,直接通过琼脂糖凝胶电泳比较质粒大小,2 h内可筛选出重组子.详细介绍了快检缓冲液配方、快检效果、注意事项以及与其它方法的优势比较.
- 张桂敏刘振李春华马立新
- 关键词：重组子
- 毕赤酵母GS115/phyA产植酸酶诱导条件研究被引量：4
- 2005年
- 康立新马立新张桂敏
- 关键词：植酸酶毕赤酵母发酵条件
- 烟曲霉植酸酶基因的克隆及在毕赤酵母的高效表达被引量：7
- 2003年
- 根据文献报道的烟曲霉植酸酶序列,设计引物以烟曲霉CCTCCAF93044的总DNA为模板进行梯度PCR,扩增出了1条约1.4 kb的带,将该片段进行DNA序列测定,其序列与已报道的烟曲霉植酸酶序列完全一致,但只编码完整的成熟植酸酶序列。将该片段克隆到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K上,获得表达质粒pHBM108。该质粒转化毕赤酵母KM71所得重组子经PCR验证后进行诱导表达,其中一重组子经144 h诱导,植酸酶表达量至少为1.25 mg/ml,比同类报道的表达量高出60％以上,以植酸钠为底物测得酶活为11.17U/ml。
- 张桂敏张晚鸣何国帮马立新
- 关键词：基因克隆毕赤酵母菌种质粒PCR扩增饲料添加剂
