上海市科学技术委员会资助项目(004319208)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：陆慧琦叶伟民韩焕兴罗荣城郑大勇更多>>
- 相关机构：第二军医大学南方医科大学南方医院更多>>
- 发文基金：上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人源抗-HBs Fab表达系统的转换与效果被引量：1
- 2004年
- 目的:重新克隆抗-HBs Fab基因于pBAD载体,改变诱导方式与表达条件,提升原核表达人源抗体片段的经济性与实用性。方法:经3次基因扩增,分步克隆,将Fd、Lc与pBAD／Lc基因先后插入到pBAD载体中,形成单载体双启动、定向表达形式。筛选双重插入菌落,阿拉伯糖诱导表达,PAGE和Western印迹鉴定抗一HBs Fab的表达效果。结果:酶切克隆载体,琼脂糖电泳证实Fd和pBAD／Lc基因的正确插入;PAGE可见明显的相对分子质量近50 000的蛋白区带,Western印迹显示该区带确为Fab;HBsAg特异印迹表明表达产物具有抗原结合活性。结论:比较原pComb3表达系统,改变后的pBAD表达系统明显提高了抗-HBs Fab的表达量(可达70 mg／L)并保持了抗体活性,为该抗体的批量制备与临床应用提供了条件。
- 韩焕兴陆慧琦郑大勇叶伟民朱烨罗荣城
- 关键词：抗-HBSFAB基因表达
- 人源抗-HBs Fab与IFN-α融合蛋白的克隆与原核表达
- 2004年
- 目的:构建人源单克隆抗-HBs Fab-IFN-α表达载体,探讨该融合蛋白原核表达的可行性及其生物学活性。方法:用PCR体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBs Fab基因的载体,插入点位于轻链基因3′未端。利用酶切、PCR鉴定筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠杆菌,挑选单克隆表达、纯化目的蛋自,用ELISA 方法检测融合蛋白IFN-α的抗原性及其抗体亲和性,用WISH细胞检测IFN-α生物学活性。结果:利用插入了人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD／gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的λ轻链与IFN-α的融合蛋白,其既具有与抗-HBs Fab相近的HBsAg的亲和力,又具有干扰素的活性。结论:λ轻链与IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达某些特异抗体和其介导的部分生物活性因子,是一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了线索。
- 陆慧琦韩焕兴安峰叶伟民曾万杰薛菖
- 关键词：干扰素Α融合蛋白
