国家自然科学基金(3087309730973559)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- FANCF-shRNA表达质粒的构建及MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立
- 2011年
- 目的构建针对人FANCF基因的shRNA表达质粒(FANCF-shRNA),转染FANCF-shRNA使人乳腺癌MCF-7细胞FANCF基因沉默,从而建立MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型。方法实验分两部分:FANCF-shRNA表达质粒的构建:根据相关文献报道,使用Ambion公司的在线设计软件,设计并合成能够编码针对FANCF基因的小发夹RNA(FANCF-shRNA)的DNA模板,将其插入到p SliencerTM 4.1-CMV neo表达质粒中,形成pSliencerTM 4.1-CMV-FANCF-shRNA重组质粒;将该重组质粒转化到E coli感受态细胞JM109中,通过氨苄青霉素抗药性筛选出成功转化的阳性克隆,并进行扩增;通过PCR及基因测序方法筛选出插入正确的FANCF-shRNA表达质粒;MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染细胞模型的建立:碱裂解法提取FANCF-shRNA表达质粒,通过脂质体介导将该质粒转染入人乳腺癌MCF-7细胞中,RT-PCR法检测FANCF基因mRNA表达水平,确认FANCF基因沉默。结果含有重组质粒的阳性克隆菌液PCR扩增片段约为250 bp,并且其基因测序结果显示插入片段碱基排列顺序正确,没有突变,说明FANCF-shRNA表达质粒构建成功;与阴性对照组相比,转染FANCF-shRNA质粒后第2天、第3天、第5天和第7天,FANCF基因mRNA表达水平均明显减低,表达抑制率分别为(36.51±6.84)%、(37.03±6.61)%、(53.03±9.33)%和(39.51±10.13)%(P<0.05),说明FANCF基因沉默,MCF-7-FANCF-RNAi瞬时转染成功建立。结论成功构建了FANCF-shRNA表达质粒并建立MCF-7-FANCF-RNAi细胞模型,为研究FANCF基因在乳腺癌发生发展及耐药产生与调控中的作用奠定实验基础。
- 唐宏涛何苗李娜孙海刚余涧坤郝俊莹魏敏杰
- 关键词：人乳腺癌MCF-7细胞RNAI
- 散发性乳腺癌HDAC1和HDAC2蛋白表达与临床病理参数相关性研究被引量：3
- 2011年
- 目的:探求HDAC1、HDAC2蛋白表达与乳腺癌临床、病理参数的相关性及其临床意义。方法:收集散发性乳腺癌标本119例,乳腺纤维腺瘤组织18例,应用SP免疫组化法检测HDAC1、HDAC2蛋白的表达情况,并与乳腺癌临床病理特点之间的关系进行分析。结果:HDAC1、HDAC2在乳腺癌和纤维腺瘤组织中表达均无显著差异。在ERβ表达阳性的组织中,HDAC1表达显著增高;HDAC2与HER2的表达呈显著的正相关性;HDAC1和HDAC2在c-Myc阳性表达的组织中阳性率显著增高;MRP阳性表达的组织中,HDAC1表达显著增高,BCRP阳性表达的组织中,HDAC2表达显著增高。结论:HDAC1、HDAC2高表达与女性散发性乳腺癌的发生发展以及产生耐药之间有一定的联系。
- 于兆进赵琳任婕白雪峰魏敏杰
- 关键词：散发性乳腺癌HDAC1
