江苏省自然科学基金(BK2007013)
- 作品数：12 被引量：45H指数：5
- 相关作者：唐家琪潘秀珍王长军葛俊超郑峰更多>>
- 相关机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所南京师范大学南京医科大学更多>>
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- 2型猪链球菌ZnuA蛋白免疫保护作用的研究
- 目的分析猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)ZnuA基因在不同血清型S.suis菌株中的分布情况,并研究ZnuA蛋白的保护作用,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过PCR扩增,检...
- 李先富潘秀珍韩明月王长军唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌免疫保护作用
- 文献传递
- 猪链球菌2型唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株的构建及其生物学特性被引量：8
- 2009年
- 利用同源重组基因敲除方法构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33唾液酸合成酶neuB基因敲除突变株。PCR和Southern杂交结果均显示neuB基因在1株转化重组体中完全被壮观霉素抗性基因替代,表明neuB基因敲除突变体构建成功。生物学特性鉴定显示,突变体与强毒株在菌落形态、溶血活性以及染色特性方面均无明显差异;电镜检查发现突变体表面结构组分与强毒株有显著差异,荚膜明显变薄,质地更加紧密;小鼠致病性试验结果显示,突变体毒力显著减弱。研究结果提示菌体荚膜中的唾液酸对于猪链球菌2型侵袭和致病具有重要作用。
- 董瑞萍王长军程功李明王晶潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型基因敲除生物学特性
- 链球菌超抗原生物学特性研究进展被引量：5
- 2009年
- 链球菌超抗原在多种链球菌感染导致的疾病中发挥着重要作用。随着研究的深入,对链球菌的认识也取得了新的突破。文中对当前研究证实的链球菌超抗原成员及其结构特征、致病机制、表达调控进行了综述,并展望其在肿瘤治疗中的意义。
- 邵珠卿潘秀珍唐家琪
- 关键词：链球菌超抗原肿瘤治疗
- 猪链球菌2型二元信号转导系统ciaR基因敲除突变株的构建及生物学功能研究被引量：4
- 2009年
- 目的构建猪链球菌2型强毒株05ZYH33二元信号转导系统1094HK/1095RR的反应调节因子ciaR基因敲除突变株(ΔciaR),并研究ΔciaR的生物学功能。方法和结果基于同源重组原理筛选ciaR基因缺失株,PCR分析及Southern杂交结果均显示突变株构建成功。通过检测OD600值绘制生长曲线,发现突变株在37℃和40℃其OD600值均明显低于野生株;与40mmol/L过氧化氢共作用15min后涂板计数,突变株存活率明显低于野生株;不同pH值的培养基中培养,发现在pH5.0的酸性环境中突变株OD600值明显低于野生株;野生株与突变株对BALB/c小鼠攻毒(约1×109CFU/只),各10只,两组16h后均死亡9只。结论成功获得05ZYH33ciaR基因敲除突变株;发现删除ciaR基因会导致细菌的生长繁殖能力减弱,抗氧化应激能力下降,在酸性环境生长存活能力下降;但对小鼠毒力无差别。
- 冯晓丹程功王晶王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：信号转导系统猪链球菌2型基因敲除突变株分离菌株鼠源性
- 2型猪链球菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体的制备与鉴定被引量：1
- 2010年
- 目的制备抗猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogen-ase,GDH)的单克隆抗体。方法分别以2型S.suis全菌细胞和重组GDH蛋白为免疫原免疫BALB/c小鼠;采用淋巴细胞杂交瘤技术将免疫后的小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合;酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株并克隆化;免疫印迹(Western blot)鉴定GDH单克隆抗体的特异性;制备小鼠腹水并进行抗体效价测定。结果细胞融合后经ELISA筛选获得分泌的阳性细胞株,经过有限稀释克隆化筛选,获得4株能稳定分泌抗GDH单克隆抗体的杂交瘤细胞株。单抗腹水的抗体效价均在1∶102400以上。结论本研究获得了4株能稳定分泌抗体且其分泌的抗体能够与GDH蛋白进行特异性反应的单克隆抗体细胞株,所获得特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究,也能够进一步用于猪链球菌感染血清学诊断方法研究。
- 李先富潘秀珍赵华梅王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌谷氨酸脱氢酶单克隆抗体
- 2型猪链球菌人源致病株07NJH06的分离和病原生物学鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的系统分析鉴定南京地区脑膜炎型猪链球菌感染病人脑脊液分离株07NJH06病原生物学特性。方法采集患者脑脊液,进行细菌分离和培养,观察菌体显微形态,通过免疫凝集试验和PCR方法对分离物进行种属鉴定及毒力因子基因携带情况分析,纸片法测定菌株药物敏感性,采用小白鼠和仔猪模型评估分离菌株的致病特性。结果从病人脑脊液分离到1株革兰阳性链球菌,经免疫学、生物化学及分子生物学方法系统鉴定为2型猪链球菌(命名为07NJH06),毒力基因型为cps2J+mrp+epf+sly+gdh+fbp+srtA+,未获得含有完整毒力岛PAI89k的证据,该岛两侧边缘反向重复区靶基因以及岛内二元调控系统SalK/SalR均未检出,但针对岛内3个独立的镶嵌结构区代表基因进行扩增,其中2个结构区代表基因(05SSU0942和05SSU0965)得到特异性扩增;药敏试验显示,07NJH06株对青霉素、万古霉素等抗生素敏感,对四环素、头孢噻肟钠等抗生素耐药;动物感染试验显示,07NJH06株对小鼠和猪仔有致病性,毒力较国内暴发流行强致病株05ZYH33弱,与国际参考株毒力相当。结论07NJH06株为致病性2型猪链球菌,基本生物学特性、主要毒力基因型与既往国内暴发现场分离株相似,但不含有完整的毒力岛PAI89k基因结构,系统掌握该菌遗传信息对于阐明国内强毒株遗传进化规律有重要价值。
- 王长军郑峰潘秀珍董瑞平胡丹秦跃红唐家琪
- 关键词：2型猪链球菌毒力因子病原生物学
- 猪链球菌2型烯醇化酶的分子克隆与免疫学特性被引量：5
- 2008年
- 对新近测定的猪链球菌2型(S.Suis 2)05ZYH33全基因序列进行生物信息学分析,并与相关家族蛋白进行同源性比较,设计合成引物,PCR法扩增出约1.3 kb的烯醇化酶编码基因(enolase, eno),将其克隆入pMD-18T载体中,进一步亚克隆入表达载体pET32a。将重组表达质粒pET32a::eno转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE初步检测到分子量约为75kD的蛋白带。通过His-Tag亲和层析纯化,获得融合蛋白His-ENO。Western-blot表明该表达产物具有免疫原性。基于ELISA进行的细胞定位实验证实了Enolase可以部分存在S.suis 2 05ZYH33细菌的表面。这提示了Enolase作为一种新发现的抗原对于引发猪链球菌相关疾病可能发挥着重要的作用。
- 孙雯潘秀珍王长军郑峰唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型烯醇化酶ELISA
- 江苏省中部地区猪链球菌主要致病血清型分子流行病学调查被引量：6
- 2008年
- 目的了解江苏省中部地区正常猪群猪链球菌及主要致病血清型分布。方法采集江苏省中部地区正常屠宰猪样本303份，用聚合酶链反应（PCR）法进行猪链球菌及主要致病血清型的检测，并对3株分离的猪链球菌菌株进行系统的生物学和分子遗传学鉴定。结果303份猪标本中，2005年正常猪群中猪链球菌的携带率达88．0％，其中1（或14）型、2（或1／2）型、7型和9型携带率分别为9．6％、8．5％、11．3％、29．5％；2006年正常猪群中猪链球菌的携带率为82．5％，1（或14）型、2（或1／2）型、7型和9型携带率分别为17．6％、2．4％、25．8％、20．0％；3株分离菌株均为2型，2a毒力因子表现型为cps2^＋／gdh^＋／mrp^-／epf^-／sly^-／fops^＋／orf2^＋／89k^-，2f、14e毒力因子表现型均为cps2^＋／gdh^＋／mrp^-／epf／sly^-／fbps^-／orf2^-／89k；3株分离菌株对阿莫西林、氨苄西林、青霉素等高度敏感，但对阿米卡星和四环素有显著的耐药性；对BALB／c小鼠和家兔无明显致病性。结论江苏省中部地区正常猪群中猪链球菌携带率处于较高水平，多种血清型同时存在，毒力因子表型与流行毒力株有显著差异。
- 鞠爱萍王长军郑峰潘秀珍董亚青葛俊超陆承平唐家琪
- 关键词：猪链球菌聚合酶链反应流行病学分子
- 猪链球菌2型组氨酸三聚体蛋白原核表达被引量：4
- 2009年
- 目的鉴定猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype2,S.suis2)组氨酸三聚体蛋白(Histidine Triad Pro-tein,HTP),并研究该蛋白的免疫原性,为研究S.suis2保护性疫苗奠定实验基础。方法通过与相关家族蛋白进行同源性比较,在猪链球菌Z型05ZYH33全基因组序列中发现了编码HTP的基因。设计合成引物,进行PCR扩增,并将目的片段克隆到表达载体pET28a,表达并纯化出目的蛋白,通过蛋白印迹(Western blot)检测其免疫原性。结果PCR扩增出约2.7kb的片段,并成功表达分子量在110KD左右的目的蛋白。通过His-Tag亲和层析,获得纯度较高的融合蛋白。Western blot检测结果表明,该表达产物具有免疫原性。结论S.suis2中国强毒株中存在HTP,并具有良好免疫原性,可作为S.suis2免疫保护性疫苗候选分子。
- 邵珠卿韩明月葛俊超王长军潘秀珍唐家琪
- 关键词：猪链球菌2型克隆
- 2型猪链球菌中国强毒株溶血素样蛋白基因的原核表达及其抗血清制备被引量：2
- 2009年
- 目的克隆2型猪链球菌溶血素样蛋白(Hemolysin-like protein,HLP)编码基因并进行原核表达,纯化重组蛋白并制备相应的多克隆抗体。方法采用PCR法,从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组扩增基因hlp,构建重组表达质粒pET32a::hlp,转化E.coliBL21(DE3),筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物;His亲和层析柱纯化重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,间接ELISA和Western blot检测多抗血清。结果构建的重组质粒在宿主菌中可高效表达,His亲和层析柱纯化获得较高纯度的重组蛋白;重组蛋白免疫新西兰兔后获得高效价的抗血清。结论在原核系统中成功地表达了hlp基因编码的蛋白,并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究hlp基因的功能奠定了基础。
- 韩明月潘秀珍邵珠卿葛俊超王长军唐家琪
- 关键词：猪链球菌克隆
