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国家自然科学基金(30570843): 作品数：12 被引量：37H指数：5; 相关作者：黄小兵梁平李靖郑璐刘世呈更多>>; 相关机构：第三军医大学新桥医院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

肝细胞移植的研究进展被引量：4: 2008年; 目的研究肝细胞移植的临床应用及其最新研究进展。方法对有关肝细胞移植的文献进行综述分析。结果肝细胞移植经过几十年的发展与临床运用,出现了以基因修饰细胞作为种子细胞,结合高分子材料的皮下移植、包囊化预处理等新技术与新进展。结论随着肝细胞移植研究的深入以及基因技术和高分子材料的运用,肝细胞移植作为一种治疗急、慢性肝病的方法有着广泛的临床应用前景。; 刘世呈李靖; 关键词：肝细胞

BC047440基因RNA干扰抑制肝癌HepG2细胞增殖被引量：5: 2008年; 目的构建shRNA并干扰肝癌HepG2细胞中BC047440基因，观察其对肝癌HepG2细胞增殖的影响。方法根据BC047440基因序列，设计和合成两条特异表达该基因shRNA序列并克隆载体pGenesil-1，转染肝癌HepG2细胞并用定量PCR观察抑制BC047440基因表达的效果，并通过MTr法和流式细胞仪检测细胞增殖及细胞周期的变化。结果酶切和序列测定提示成功构建了特异表达BC047440基因的shRNA1和shRNA2两个质粒。shRNA1和shRNA2对BC047440mRNA的抑制率分别为80．22％和58．63％。干扰BC047440基因后，肝癌HepG2细胞增殖受到明显抑制，主要停滞在s期。结论构建的shRNA能有效干扰肝癌HepG2细胞BC047440基因的表达，并抑制肝癌HepG2细胞的增殖，提示BC047440基因和肝癌HepG2细胞增殖有关。; 黄小兵李靖梁平郑璐刘世呈韩克强; 关键词：RNA干扰肝肿瘤

沉默BC047440基因对HepG2细胞侵袭能力的影响被引量：1: 2009年; 目的观察沉默BC047440基因后对HepG2细胞侵袭能力的影响。方法实验分为3组,即HepG2细胞转染siRNA的沉默组,HepG2细胞转染无关质粒组及未转染的HepG2细胞组。利用前期构建的BC047440基因的小干扰RNA(siRNA)沉默BC047440基因,然后用MTT法检测细胞黏附率,细胞划痕法检测细胞迁移能力,Boyden小室法检测细胞侵袭性。结果沉默组的细胞黏附率在20 min和40 min时与HepG2细胞组和无关质粒组比较,差异无统计学意义(P>0.05),但在60 min时沉默组显著低于后2组(P<0.05);划痕实验显示划痕48h后,无关质粒组和HepG2细胞组划痕区已基本长满,而沉默组划痕依然明显;接种16 h后无关质粒组和HepG2细胞组侵袭到Boyden小室下室面的细胞数明显多于沉默(P<0.05)。而无关质粒组与HepG2细胞组间差异均无显著性(P>0.05)。结论沉默BC047440基因后可明显抑制HepG2细胞其在细胞外基质上的黏附能力、运动能力和体外侵袭能力,提示BC047440基因可增加肝癌的转移侵袭性。; 黄小兵李靖梁平郑璐韩克强刘世呈赵弘智; 关键词：人肝癌细胞肿瘤侵润 SIRNA

重组BC047440蛋白的表达及其对人肝癌细胞系HepG2增殖的影响被引量：1: 2010年; 目的构建原核表达载体,制备重组BC047440蛋白并观察不同浓度的重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响。方法提取肝癌组织总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增BC047440cDNA,克隆入质粒pMD19-T,转化E.coliDH5α,酶切目的基因片段,插入质粒pET-28a(+),转化E.coliBL21,IPTG诱导蛋白表达,SDS-PAGE电泳鉴定表达产物,提取重组BC047440蛋白,MTT法和流式细胞术检测不同浓度重组蛋白对HepG2细胞增殖的影响,Westernblot检测重组蛋白作用后HepG2细胞表达Ki67蛋白的变化。结果克隆、鉴定BC047440基因,构建其原核表达载体,成功制备并纯化BC047440重组蛋白。1.0、10.0、20.0μg/ml浓度重组BC047440蛋白分别作用HepG2细胞48h后,细胞增殖率分别为124.0%、136.1%、126.6%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞术结果提示,对照组的细胞增殖常数(PI)为26.1,重组蛋白处理组PI为48.6,二者差异具有统计学意义(P<0.05)。重组BC047440蛋白作用HepG2细胞后,Ki67蛋白的相对表达量为(0.317±0.062),对照组的相对表达量为(0.177±0.037),二者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论制备的重组BC047440蛋白具有直接促进HepG2细胞增殖和促进其表达Ki67蛋白的作用,可能是一种新的促进肝癌增殖蛋白。; 郑璐梁平李靖黄小兵杨彤翰左国华王梁; 关键词：BC047440 肝癌增殖 KI67

BC047440基因调控HepG2的NF-kB活性机制的实验研究被引量：3: 2010年; 目的应用基因芯片进行高通量分析沉默基因BC047440后相关基因表达谱的变化，以了解BC047440通过NF_KB信号途径上游的何种分子调控NF-KB活性。方法应用博奥公司提供的人全基因组基因芯片检测沉默BC047440基因后相关基因表达谱的改变，利用其数据库和MAs分析系统进行分析筛选，寻找NF-kB发生表达改变的上游分子并进行RT—PCR验证。结果沉默BC047440基因后有189个基因表达改变，其中130个基因上调表达2倍以上，59个基因下调表达超过50％，其中NF—kB信号途径上游分子中仅TRAF6下降为对照组的23．06％。RT—PCR验证TRAF6的mRNA的表达下降为对照组的29．5％，与基因芯片结果类似。结论应用基因芯片可以高通量高效率地分析沉默BC047440基因后的基因表达谱，BC047440基因可通过调控上游分子TRAF6作用于NF-KB信号途径来调控肝癌增殖。; 黄小兵梁平李靖郑璐刘世呈韩克强赵弘智迟彦邦; 关键词：基因表达调节 DNA微阵列

Expression of BC047440 protein in hepatocellular carcinoma and its relationship to prognosis被引量：4: 2010年; Background and Objective: BC047440 is a new gene related to cancer growth and proliferation. Due to the lack of specific antibodies, how BC047440 protein influences the liver cancer growth is unclear. This study aimed to determine the relationship between BC047440 protein expression and clinicopathologic parameters of hepatocellular carcinoma (HCC), and to evaluate the prognostic value of BC047440 for HCC patients. Methods: We prepared the polyclonal antibodies of BC047440, and used Western blot and immunohistochemical staining to detect BC047440 expression in 68 specimens of HCC. The correlations of BC047440 expression to clinicopathologic features and prognosis of HCC patients were analyzed. Results: The polyclonal antibodies could effectively recognize endogenous BC047440 in HCC tissues. The positive rate of BC047440 protein was significantly higher in HCCs than in adjacent tissues (44.1% vs. 23.5%, P < 0.05); the rate was significantly higher in patients with larger tumor (P < 0.05) and portal vein invasion (P <0.01). The HCC patients with high BC047440 expression showed a significantly poorer prognosis than those with low BC047440 expression (P < 0.05). Conclusion: BC047440 can promote the growth and invasion of HCC.; Lu Zheng Ping Liang Jing Li Xiao-Bing Huang Wei-Wei Wang Liang Wang Huan Feng; 关键词：免疫组织化学染色

BC047440基因通过NF-κB调节HepG2细胞增殖的初步研究被引量：5: 2008年; 目的观察BC047440基因能否通过增强NF-κB的活化而促进HepG2细胞的增殖。方法设计针对BC047440基因的小干扰RNA(siRNA),构建pGenesil-1-BC047440-siRNA真核表达载体,用脂质体法将介导siRNA的真核绿色荧光表达载体pGenesil-1-BC047440-siRNA、pGenesil-1-HK-siRNA转染人肝癌HepG2细胞建立稳定细胞株;实验分为3组:转染siRNA表达载体组、无关质粒组和未处理的亲本HepG2细胞组。采用平板克隆形成实验分析细胞的增殖活性,通过Western blot检测细胞质p50含量,EMSA检测NF-κB的核转位,荧光素酶试验检测各组细胞的NF-κB活化情况。结果细胞增殖实验显示转染siRNA组细胞增殖能力明显降低,BC047440基因沉默后的HepG2的细胞质p50含量低于野生株HepG2,NF-κB核转位低于野生株HepG2,其荧光素酶和海肾荧光素酶活性比值只有野生株的1/4。结论BC047440基因能促进肝癌细胞的增殖,其调节机制可通过NF-κB信号途径实现,提示BC047440基因可能成为抑制人肝癌细胞生长的有效靶点。; 黄小兵梁平李靖郑璐刘世呈韩克强赵弘智; 关键词：BC047440 HEPG2 人肝癌细胞 SIRNA

NF-κB在感染和炎症促进肿瘤发生及发展中的作用被引量：6: 2008年; 黄小兵梁平; 关键词：肿瘤 NF-ΚB 炎症

慢病毒载体介导的人肝癌HepG2细胞BC047440基因沉默被引量：6: 2010年; 目的构建BC047440基因RNAi慢病毒干扰载体,并检测其对人肝癌细胞系HepG2细胞中BC047440基因的沉默效果。方法针对已经筛选确定的BC047440基因RNAi有效靶序列,合成BC047440基因特异性shRNA序列,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切后的pFU-GW-iRNA载体连接产生pFU-GW-shBC047440慢病毒载体,PCR、DNA测序鉴定阳性克隆。用脂质体转染法将pFU-GW-shBC047440、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染293T细胞,产生具备感染能力的慢病毒。以293T细胞中绿色荧光蛋白的表达水平测定病毒滴度,并测定其对人肝癌细胞株HepG2细胞最适感染复数(MOI)。以最适MOI感染HepG2细胞,分BC047440-shRNA组、control-shRNA组和HepG2组;RT-PCR和Western blot检测各组细胞BC047440 mRNA及蛋白的表达差异。结果经PCR鉴定,成功构建BC047440基因RNAi慢病毒载体。测定慢病毒滴度为5×108TU/ml,其在HepG2细胞中最适MOI为20;RT-PCR和Western blot检测结果分别显示BC047440-shRNA组中BC047440 mRNA及BC047440蛋白表达较control-shRNA组和HepG2组明显降低,control-shRNA组与HepG2组间无明显差异。结论成功构建BC047440特异性RNAi慢病毒载体,感染人肝癌细胞系HepG2细胞后,实现了对HepG2细胞中BC047440基因的有效沉默。; 钟扬李靖黄小兵郑璐杨彤翰赵弘智梁平; 关键词：BC047440 慢病毒载体人肝癌细胞系HEPG2

新基因BC047440原核表达载体构建及其重组蛋白的表达纯化: 2009年; 目的构建肝癌相关新基因BC047440原核表达载体，表达并纯化出其重组蛋白。方法从HepG2细胞中提取总RNA，经逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）扩增BC047440cDNA，克隆进质粒pMD19-T，转化E．coliDH5a，测序正确后，酶切目的基因片段，插入质粒pET-28a（＋），转化E．coliBL21，IPTG诱导蛋白表达，Ni—NTA柱亲和层析纯化重组蛋白。结果电泳证实RT-PCR扩增产物与预期目的基因BC047440长度一致。RT-PCR纯化产物与载体pMD19-T连接后，经蓝白斑筛选，挑出5个白色菌落做酶切鉴定，其中2个菌落被证实为阳性克隆。测定其基因序列，结果显示与Genbank公布的BC047440基因序列完全一致。将BC047440cDNA插入质粒pET一28a（＋），转化E．coliBL21，培养过夜后，挑选7个白色菌落做酶切鉴定，证实均为阳性克隆。IPTG诱导其中一个克隆表达蛋白，SDS-PAGE电泳分析表明，在相对分子质量23000左右出现新的蛋白表达条带，诱导4h后表达蛋白量最多，占菌体总蛋白的22．3％。将诱导3h的菌体超声破碎后，Ni柱亲和层析，50和125mmol／L咪唑洗脱液SDS-PAGE电泳显示出清晰的单一条带。结论成功构建BC047440基因原核表达载体，表达并纯化出重组蛋白，为深入研究其临床应用打下基础。; 郑璐李靖梁平黄小兵刘世呈左国华; 关键词：BC047440 基因克隆

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