国家科技重大专项(2009ZX10004-306)
- 作品数：6 被引量：31H指数：4
- 相关作者：车小燕王压娣晋晶温坤林裕龙更多>>
- 相关机构：南方医科大学广州市疾病预防控制中心中山大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项广州市医药卫生科技项目广州市科技局资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 捕获ELISA法测定抗EV71-IgM抗体用于EV71感染早期诊断被引量：15
- 2012年
- 目的探讨捕获ELISA法测定抗肠道病毒71型(EV71)IgM抗体在EV71感染所致手足口病(HFMD)早期诊断中的价值。方法以实时荧光RT-PCR检测89例临床初诊为HFMD患儿的粪便、疱疹液、咽拭子或肛拭子的肠道病毒RNA。用40例排除HFMD的5岁以下儿童血清为抗EV71-IgM抗体阴性对照,以捕获ELISA法检测患儿不同发病期血清中抗EV71-IgM抗体。结果经实时荧光RT-PCR检测,89例HFMD患儿粪便、疱疹液、咽拭子或肛拭子中EV71感染28例,柯萨奇病毒A16(CA16)感染43例,非EV71和CA16的肠道病毒感染14例,非肠道病毒感染4例。EV71感染者发病1～3 d、4～6 d及>6 d的血清抗EV71-IgM抗体阳性率分别为81.3%、100%和100%;CA16感染者分别为10.0%、26.4%和65.7%;非EV71和CA16的肠道病毒感染者及非肠道病毒感染者在发病1～3 d和4～6 d无1例阳性;阴性对照组无1例阳性。抗EV71-IgM抗体在EV71感染的早期(急性期)的诊断敏感性和特异性分别为81.3%和92.9%。结论 EV71感染者与CA16感染者血清抗EV71-IgM抗体在发病4 d后存在较明显的交叉反应。抗EV71-IgM抗体可用作EV71感染早期诊断的血清学标志物。
- 林裕龙温坤王压娣晋晶车小燕
- 关键词：手足口病肠道病毒
- 肠道病毒71型VP1～VP4基因克隆及其表达产物的免疫原性被引量：4
- 2011年
- 目的克隆并表达肠道病毒71型VP1~VP4蛋白基因,初步鉴定其免疫原性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1~VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物用8 mol/L尿素洗涤及Ni柱亲和层析纯化后,用肠道病毒71型免疫兔血清和柯萨奇病毒A16型免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA鉴定。结果构建的重组质粒pQE30a/VP1~VP4经IPTG诱导,重组蛋白VP1~VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1~VP4可以被免疫兔血清特异识别。结论肠道病毒71型VP1~VP4蛋白表达载体在大肠杆菌M15中高效表达。纯化产物具有较强的免疫原性,为今后EV71亚单位疫苗的研究和检测试剂盒提供了参考。
- 宋远斌余楠何思杰陈欣欣王斌车小燕曾其毅
- 关键词：肠道病毒71型基因克隆原核表达免疫原性
- 一步法实时RT-PCR快速检测手足口病肠道病毒被引量：4
- 2010年
- 目的探讨实时荧光RT-PCR在手足口病(HFMD)肠道病毒快速检测中的应用价值。方法以实时荧光RT-PCR检测64例临床初诊为HFMD患儿标本中总肠道病毒(EV)、柯萨奇病毒A组16型(CA16)和肠道病毒71型(EV71),用RD细胞、Vero细胞和Hep-2细胞进行病毒分离培养,以免疫荧光法鉴别分离培养的EV71。结果64例标本中,EV(+)/EV71(+)为23.4%(15/64)、EV(+)/CA16(+)为48.4%(31/64)、EV(+)/EV71(-)/CA16(-)为10.9%(7/64)、EV(-)/EV71(-)/CA16(-)为17.2%(11/64)。实时荧光RT-PCR检测为EV71且病毒分离培养出现细胞病变效应的培养细胞经抗EV71单克隆抗体免疫荧光检测均为阳性,未发生细胞病变效应或非EV71的培养细胞均为阴性。结论实时荧光RT-PCR检测HFMD病原具有特异和快速等优点,与病毒分离培养具有较高的一致性,可用于手足口病的早期诊断和鉴别诊断。
- 林裕龙温坤潘玉先王压娣晋晶车小燕
- 关键词：手足口病实时荧光RT-PCR肠道病毒免疫荧光检测
- 柯萨奇病毒A16型VP1-VP4基因克隆及其表达产物的抗原相关性分析被引量：4
- 2012年
- 目的克隆并表达柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白基因,初步分析其抗原相关性。方法抽提病毒RNA,经RT-PCR方法分别扩增出VP1-VP4蛋白基因片段,经克隆后,在QIA表达系统中表达,表达产物经8 mol/L尿素洗涤及镍柱亲和层析纯化后,用柯萨奇病毒A16型病毒免疫兔血清及肠道病毒71型病毒免疫兔血清对重组蛋白进行Western blotting及ELISA分析其抗原相关性及交叉反应性。结果成功构建的重组质粒pQE30a/VP1-VP4并经IPTG诱导,重组蛋白VP1-VP4高效表达并纯化成功,经Western blotting及ELISA证实重组蛋白VP1-VP4可以被CVA16免疫兔血清特异识别,部分与肠道病毒71型免疫血清存在交叉反应。结论在大肠杆菌M15中高效表达出柯萨奇病毒A16型VP1-VP4蛋白,经纯化产物具有较强的抗原反应性。
- 宋远斌何思杰余楠陈欣欣王斌车小燕曾其毅
- 关键词：柯萨奇病毒A16型VP1蛋白VP2蛋白VP3蛋白抗原反应性
- 简并PCR在肠道病毒血清型鉴定中的应用
- 2011年
- 目的探讨共有序列简并杂合寡核苷酸引物PCR(CODEHOP-PCR)在肠道病毒血清型鉴定中的临床应用价值。方法以CODEHOP-PCR检测经实时荧光RT-PCR鉴定为EV71和CA16手足口病患者的临床样本和病毒分离培养细胞上清的肠道病毒VP1基因片段,经琼脂糖凝胶电泳并回收、测序,与Genbank提供的序列比较,确定肠道病毒的血清型。结果 CODEHOP-PCR后的序列分析表明,所有的EV71毒株和CA16毒株与近几年国内报道的部分毒株同源性在96%以上,其血清分型结果验证了实时荧光RT-PCR分型结果的准确性。结论 CODEHOP-PCR合并测序用于肠道病毒血清型的准确鉴定,与传统的病毒分离及血清中和试验相比,具有更快速、准确的优点。
- 林裕龙温坤王压娣晋晶车小燕
- 关键词：肠道病毒血清型手足口病
- 广州市2010年1、2、3型登革病毒E基因进化分析被引量：5
- 2012年
- 目的测定广州市2010年1、2、3型登革病毒的E基因序列，探讨其来源及基因型。方法收集广州市2010年85例登革热患者急性期血清，用C6／36细胞培养分离登革病毒，RT—PCR法扩增全长E基因，测定序列并绘制系统发育树，结合流行病学资料进行信息学分析。结果85份血清标本中分离到1型和3型登革病毒株各6株，2型登革病毒2株，测序获得E基因序列。进化分析发现，1型和3型登革病毒分别来自不同的亚型，即亚洲型和南太平洋型，印度次大陆型和东南亚／南太平洋型；2型登革病毒来自马来西亚／印度次大陆型。结论推测广州市2010年2型登革病毒为输入性。1型和3型登革病毒中各有4株为输入性，余各2株广州本地病例毒株尚须从蚊媒介来进一步证实其来源。
- 白志军和鹏狄飚鲁恩洁罗雷杨智聪王鸣王玉林
- 关键词：登革热病毒病毒包膜蛋白质类基因型
