“十一五”国家科技攻关计划(06G076)
- 作品数：3 被引量：19H指数：3
- 相关作者：粟永萍王军平郝磊邹仲敏邓均更多>>
- 相关机构：第三军医大学第三军医大学新桥医院更多>>
- 发文基金：“十一五”国家科技攻关计划国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- hPDGF-A/hBD_2双基因共表达腺病毒载体的构建及表达被引量：7
- 2007年
- 目的制备人血小板源性生长因子-A(human platelet-derived growth factor A,hPDGF-A)和人β防御素2(human beta defensins,hBD2)双基因共表达腺病毒载体并观察其在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)中的表达。方法将hPDGF-A和hBD2通过内部核糖体插入位点(internal ribosome entry site,IRES)连接后,以同源重组的形式插入腺病毒表达载体,由人胚肾293细胞包装,获得有感染能力的重组腺病毒颗粒。重组病毒感染BMSCs后,用RT-PCR检测重组腺病毒的表达。结果①成功构建穿梭质粒pAdTrack-hPDGF-A-IRES2-hBD2。②成功构建重组腺病毒质粒pAdeasy-hPDGF-A-IRES2-hBD2。③293细胞包装获得有感染能力的重组腺病毒。④转染的BMSCs高表达hPDGF-A和hBD。结论构建了hPDGF-A/hBD双基因共表达腺病毒载体,证实其转染BMSC后的表达。
- 郝磊邹仲敏王军平董世武邓均闫国和王连友宁宇刘登群罗成基粟永萍
- 关键词：腺病毒血小板源性生长因子防御素
- 重组融合蛋白rTMP-GH对体外培养巨核细胞增殖的影响被引量：7
- 2008年
- 目的探讨TPO模拟肽(thrombopoietin mimetic peptide,TMP)与人生长激素(growth hormone,GH)的重组融合蛋白rTMP-GH对体外培养巨核系细胞增殖的影响,以及对血小板生成有显著调控作用的球蛋白转录调节因子(globin transcription factor-1,GATA-1)表达的调控作用。方法体外培养Dami细胞,100ng/ml的重组融合蛋白rTMP-GH作用7d后,观察巨核细胞集落形成能力,分析rTMP-GH对Dami细胞增殖的影响。同时,采用Western blot和RT-PCR方法分别检测Dami细胞中GATA-1的蛋白水平和mRNA表达变化,探讨rTMP-GH对巨核细胞生成血小板的调节作用。结果rTMP-GH处理后Dami细胞的集落形成能力显著增强,转录因子GATA-1的mRNA和蛋白表达水平显著上调,其调节作用明显强于空白对照组和GH组。结论rTMP-GH能够刺激巨核细胞增殖分化和上调GATA-1的表达,具有促进血小板生成的作用。
- 许杨王军平赵景宏粟永萍陈芳申明强陈默王崧开丽
- 关键词：增殖GATA-1
- hPDGF-A／hBD2双基因转染对大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性的影响被引量：5
- 2008年
- 目的探讨hPDGF-A/hBD2腺病毒双基因转染大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后,对BMSCs本身生物学特性的影响。方法体外分离培养大鼠BMSCs,应用GFP标记的腺病毒表达载体系统Adv-hPDGF-A-IRES-hBD2,以脂质体法转染293细胞,再以病毒上清液感染BMSCs,对转染目的基因后的BMSCs进行形态学观察,绘制生长曲线,测定其细胞周期以及向成脂、成骨、成肌诱导分化和鉴定。结果hPDGF-A/hBD2双基因成功转入BMSCs后,未发现其对细胞活性有明显作用,基因修饰后的BMSCs仍具有成体干细胞所具备的增殖能力,以及向成脂、成骨、成肌等方向分化的潜能。结论BMSCs是重组腺病毒转染的良好靶细胞,hPDGF-A/hBD2基因修饰的BMSCs仍可作为满意的细胞治疗的种子细胞。
- 冯一梅徐辉邹仲敏郝磊王涛邓均董世武粟永萍程天民
- 关键词：骨髓间充质干细胞基因转染细胞生物学特性
