深圳市卫生局科技项目(200630)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：王大平彭亮权熊建义陆伟黄俊锋更多>>
- 相关机构：深圳市第二人民医院广州医学院更多>>
- 发文基金：深圳市卫生局科技项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 体外构建腺病毒介导骨形态发生蛋白2基因转染骨髓间充质干细胞复合纳米羟基磷灰石的植骨材料被引量：2
- 2010年
- 背景:随着组织工程和基因工程技术迅速发展,基因增强的组织工程骨为临床治疗骨缺损带来美好的前景。目的:观察经腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2表达载体(Ad-BMP-2)转染后的兔骨髓间充质干细胞在纳米羟基磷灰石植骨材料上的黏附、增殖及骨形态发生蛋白2的表达情况。方法:用Ad-BMP-2转染兔骨髓间充质干细胞,免疫组化、蛋白印迹法检测转染后细胞内骨形态发生蛋白2的表达情况。将转染48h的细胞均匀接种到纳米羟基磷灰石植骨材料上,扫描电镜观察细胞黏附状况,并采用MTT比色法测定骨髓间充质干细胞的增殖情况;消化收集黏附植骨材料上第3,5,7天的细胞,蛋白印迹检测黏附材料上细胞骨形态发生蛋白2的表达。结果与结论:转染后,骨髓间充质干细胞内骨形态发生蛋白2有高表达;扫描电镜见转染细胞在纳米羟基磷灰石材料孔隙周围及孔隙内黏附生长良好并大量增殖,MTT分析结果显示,纳米羟基磷灰石对骨髓间充质干细胞的体外增殖无抑制作用,复合后骨形态发生蛋白2有较高表达。结果表明经Ad-BMP-2转染后的骨髓间充质干细胞与纳米羟基磷灰石植骨材料生物相容性好,细胞在材料上能稳定长效地分泌骨形态发生蛋白2。
- 黄俊锋王大平何春耒杨欣建刘黎军陈宏贤彭亮权
- 关键词：骨形态蛋白骨髓间充质干细胞组织工程骨
- 骨形态发生蛋白-2基因转染兔骨髓基质干细胞及复合纳米羟基磷灰石体外构建组织工程骨的研究被引量：2
- 2010年
- 目的探讨腺病毒介导的人骨形态发生蛋白-2表达载体（Ad—BMP-2）转染兔骨髓基质干细胞（rBMSCs）后复合到纳米羟基磷灰石（Nano-HA）体外构建仿生人工骨的可行性。方法采用GatewayTM技术构建腺病毒载体，溶胶-絮凝法制备Nano-HA，用Ad—BMP-2转染体外培养的rBMSCs，免疫组化、RT—PCR和蛋白印迹方法检测转染后细胞的BMP-2表达。将转染48h的细胞均匀接种到Nano—HA支架上，第3、5天取细胞载体复合物扫描电镜观察细胞贴附、生长状况，消化收集贴附支架的细胞，蛋白印迹检测贴附支架细胞BMP-2的表达。结果转染后BMP-2基因在mRNA水平和蛋白水平均有高表达；扫描电镜见转染细胞在支架材料分布均匀，黏附良好，转染后及复合后Western Blot检测BMP-2表达较高。结论利用转基因技术，用含目的基因的腺病毒载体转染靶细胞复合到Nano—HA，细胞载体复合物稳定长效地分泌生长因子，体外成功地构建了仿生人工骨。
- 何春耒王大平朱伟民熊建义刘黎军陆伟徐小平胡波刘建全彭亮权
- 关键词：骨髓细胞腺病毒载体
- 重组人骨形态发生蛋白2腺病毒载体的构建与鉴定被引量：5
- 2009年
- 背景:目前报道的重组腺病毒构建方法较复杂,构建周期长,导致重组腺病毒构建的成功率较低。GatewayTM技术是基于λ噬菌体的位点特异性高效重组系统,其构建重组病毒载体具有快捷高效的特点。目的:构建含人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体,为应用骨形态发生蛋白2基因治疗的研究奠定基础。设计、时间及地点:单一样本观察,实验于2008-02/06在深圳市第二人民医院中心实验室完成。材料:pOTB7-BMP-2质粒、HEK293为ATTC产品;BLOCK-iTTM Adenovirus Expression System为Invitrogen产品;大肠杆菌DH5α为Biontex产品。方法:用聚合酶链反应方法扩增骨形态发生蛋白2目的基因,并插入载体pMD19-T Simple Vector中进行测序分析。将骨形态发生蛋白2基因亚克隆到穿梭载体pEC3.1(+)中,构建pEC3.1-BMP-2穿梭质粒,再将其中的表达盒通过重组克隆到pAd/BLOCK-iT?-DEST腺病毒载体中,线性化后转293细胞进行包装获得重组腺病毒rAd-BMP2。主要观察指标:①目的基因骨形态发生蛋白2的聚合酶链反应扩增。②重组质粒TS-BMP2的构建。③重组pEC3.1-BMP2的构建。④重组pAd-BMP2的构建。⑤重组腺病毒的制备与鉴定。结果:正确扩增长约1.2kb的骨形态发生蛋白2cDNA,并成功地构建其腺病毒载体,经线性化的pAd-BMP2DNA转染HEK293细胞,包装、扩增后得到人骨形态发生蛋白2重组腺病毒(rAd-BMP2),其滴度约为1×1010PFU/mL,该滴度可满足进一步的骨形态发生蛋白2成骨作用的研究。结论:成功地构建重组人骨形态发生蛋白2腺病毒载体。
- 彭亮权王大平周可黄俊锋任凯徐小平陆伟熊建义欧阳侃朱伟民
- 关键词：骨形态发生蛋白腺病毒转染
