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国家自然科学基金(31172266): 作品数：11 被引量：23H指数：3; 相关作者：沈兴家唐顺明王欣陈晨钱平更多>>; 相关机构：中国农业科学院蚕业研究所江苏科技大学学研究院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金江苏省研究生培养创新工程项目江苏省普通高校研究生科研创新计划项目更多>>; 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>

miR-34家族抑制肿瘤作用的研究进展被引量：5: 2016年; miR-34家族包括miR-34a、miR-34b和miR-34c,广泛分布于节肢动物、线虫纲动物以及哺乳动物中。最近研究发现,miR-34家族可通过多种途径参与肿瘤、心血管疾病和衰老相关信号转导网络的调控,与肿瘤、心血管疾病和衰老的发生、发展密切相关。本文对miR-34家族在上述领域中的功能研究进行综述。; 陈晨王欣沈兴家; 关键词：MICRORNA 肿瘤心血管疾病衰老

一种家蚕丝腺体外培养和基因瞬时表达分析的方法被引量：1: 2018年; 家蚕是鳞翅目重要的模式生物,但是目前家蚕培养细胞系少,给家蚕基础研究带来不便,也影响了家蚕作为模式生物的应用。组织体外培养在一定程度上可以代表体内环境,且操作相对简单。我们尝试并建立了一种采用TC-100培养基体外培养丝腺组织的方法,取健康家蚕5龄2 d的幼虫,用75%乙醇进行表面消毒,灭菌水冲洗,剪开腹部表皮固定,用镊子轻轻拉出丝腺组织,用75%乙醇快速漂洗、PBS缓冲液冲洗2～3次,放入含有800μL TC-100培养基的12孔细胞培养板的培养孔中,每孔4条丝腺组织,27℃培养;将0.64μg增强荧光蛋白基因表达载体pcDNA3.0[ie1-egfp-SV40]加入到25μL不完全TC-100培养基中孵育15 min后转染丝腺组织,48 h后用荧光显微镜观察,培养基清澈,丝腺组织外形完好、发出亮绿色荧光,表明egfp在丝腺中得到了表达。为进一步验证体外培养丝腺的转染效果,将家蚕miR-0031*的抑制物(inhibitor)和阴性对照(inhibitor negetive control)各10μL按照同样方法配成转染液,加入到放有丝腺组织的培养孔中,48 h收集丝腺组织,提取总RNA,荧光定量PCR检测靶基因BmFib-L的表达量,结果显示,inhibitor抑制miR-0031*的表达,促使BmFib-L的表达量上升,表明用体外培养丝腺进行转染等试验是可行的。该方法的建立为研究蚕丝蛋白基因表达调控的分子机制提供新的技术途径,也为家蚕其他组织的体外培养和研究提供借鉴。; 陈艳花沈兴家; 关键词：家蚕丝腺体外培养转染

昆虫激素体外调节家蚕滞育激素受体基因的表达被引量：2: 2013年; 为了深入研究家蚕滞育的分子机理,从家蚕基因组中扩增了1395 bp和972 bp 2个不同长度的滞育激素受体基因Bmdhr启动子片段,以pGL3.0 Basic为载体,分别构建荧光素酶报告质粒,利用家蚕细胞瞬时表达系统分析其转录活性以及昆虫保幼激素类似物(JHA)、蜕皮激素(20-OH-ecdysone)和滞育激素(DH)对其活性的影响.结果表明:1395 bp的Bmdhr启动子活性显著低于972bp的Bmdhr启动子,这说明Bmdhr启动子在-941^-1364nt区间存在负调控元件.JHA浓度为2,4,6μg/mL时,极显著地增强启动子活性;浓度为1μg/mL时活性显著减弱,而为8μg/mL时则活性极显著减弱.20-OHecdysone对Bmdhr启动子活性的影响具有剂量效应,低浓度(1,2μg/mL)时显著增强启动子活性;浓度为4μg/mL时,启动子的活性显著减弱;但当浓度继续升高时,启动子活性又极显著增强.DH对Bmdhr启动子活性的影响同样具有剂量效应,其浓度为10~40 nM时,显著增强启动子活性;而当其浓度达到60 nM时,启动子活性变化不显著.; 王力刚朱娟王猛唐顺明沈兴家; 关键词：昆虫激素家蚕启动子基因表达调控

Bmo-miR-2788对家蚕丝胶蛋白基因Ser-1的表达调控: 2019年; 通过生物信息学分析发现,家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1的3′非翻译区(3′-UTR)存在微小RNA Bmo-miR-2788的结合位点。半定量PCR结果显示,Bmo-miR-2788在家蚕5龄第4天幼虫的8个受试组织中均有表达,但在中部丝腺中表达水平最高;而BmSer-1仅在中部丝腺中被检测到。分别构建BmSer-13′-UTR和Bmo-miR-2788的表达载体pGL3.0(A3-luc-BmSer-1-3′-UTR-SV40)和pcDNA3.0(ie1-egfp-pri-Bmo-miR-2788-SV40),共转染BmN细胞,结果表明Bmo-miR-2788上调BmSer-1表达(P<0.01);当将上述载体与合成的Bmo-miR-2788抑制剂共转染BmN细胞时,BmSer-1表达显著下调(P<0.05)。为验证Bmo-miR-2788在蚕体内对BmSer-1表达的调控作用,将Bmo-miR-2788表达质粒与其阴性对照(pcDNA3.0)分别注射到家蚕5龄第3天幼虫体内,qRT-PCR分析结果显示,与阴性对照相比,注射Bmo-miR-2788后36 h中部丝腺中的BmSer-1表达显著上调(P<0.01)。上述结果表明Bmo-miR-2788正向调控BmSer-1基因的表达。; Rehana Kandhro陈艳花钱平钱平沈兴家; 关键词：MIRNA 基因调控

家蚕后部丝腺miRNAs的鉴定及其对丝素等基因表达调控的研究: microRNA是一类长度约22个碱基的内源性非编码小分子RNA,可以调控基因转录后的表达,它通过序列互补配对的方式对靶标mRNA的表达进行调控,具有广泛的基因调节功能,与一系列重要的生命过程密切相关。到目前为止,已经在...; 宋菲; 关键词：家蚕丝素基因; 文献传递

microRNA的功能及家蚕microRNA的研究进展: 2015年; microRNA(miRNA)是一类长度约22个碱基的内源性非编码小分子RNA,具有广泛的调节基因表达的功能,与生命体的发生、生长、发育和分化过程密切相关。miRNA除了对靶基因mRNA的翻译抑制、降解等起到负调控作用,还有去抑制和miRNA激活作用等正调控作用,以及竞争性内源RNA(ceRNA)调控机制。在家蚕中已经鉴定了许多新的miRNA,通过深度测序技术和利用基因芯片数据等分析了蚕体各个发育时期及不同组织中miRNA的表达特征,关于家蚕miRNA的功能及靶基因研究也成为热点。本文对miRNA的形成、生物学功能、靶基因预测等进行概述,并特别介绍家蚕miRNA的研究进展。; 宋菲王欣钱平陈晨范洋洋沈兴家; 关键词：MICRORNA 生物合成生物学功能靶基因

家蚕滞育激素受体体外上调下游海藻糖酶基因的表达被引量：5: 2014年; 家蚕滞育激素(Bombyx mori diapause hormone,BmDH)与滞育激素受体(BmDH receptor,BmDHR)结合,调控其信号通路中的下游基因的表达.在二化性家蚕中,受滞育信号的影响,蛹体卵巢膜上海藻糖酶的活性增强.为了证实BmDHR对家蚕海藻糖酶基因(Bmtre)表达的调控作用,以pcDNA3.1为载体,构建了4种由ie-1启动子驱动的不同Bmdhr的表达质粒pcDNA-ie1-Bmdhr1、pcDNA-ie1-Bmdhr3、pcDNA-ie1-Bmdhr4、pcDNA-ie1-Bmdhr5和(Bmtre启动子驱动的萤火虫荧光素酶基因(luciferase,luc)报告质粒p3Z-Bmtre-luc;用脂质体(Lipofectin)包埋1种Bmdhr表达质粒或不同摩尔比的pcDNA-ie1-Bmdhr1/pcDNA-ie1-Bmdhr5以及报告质粒后,分别共转染源于卵巢的家蚕细胞BmN,在DH作用下体外检测BmDHRs对海藻糖酶基因启动子活性的影响.结果表明,4种滞育激素受体BmDHR-1、BmDHR-3、BmDHR-4和BmDHR-5分别表达时,均能上调海藻糖酶基因启动子的活性;不同摩尔比(1∶3,1∶1,3∶1)的BmDHR-1/BmDHR-5也均能上调海藻糖酶基因启动子的活性,由此证明BmDHR能上调其信号通路中下游基因Bmtre的表达.; 沈兴家王力刚韦博尤朱娟唐顺明赵巧玲; 关键词：家蚕海藻糖酶基因表达调控

Bmo-miR-2755*对丝素蛋白基因BmFib-L和BmP25表达的调控作用被引量：3: 2015年; 为了研究家蚕miRNA对丝素蛋白基因表达的调控作用,采用生物信息学方法筛选获得对家蚕丝素轻链基因（BmFib-L）和P25蛋白基因（BmP25）有潜在调控作用的Bmo-miR-2755＊。利用半定量RT-PCR技术分析Bmo-miR-2755＊及其靶基因BmFib-L、BmP25在家蚕4~5龄期幼虫后部丝腺和5龄3 d幼虫不同组织器官中的表达水平,结果显示三者在后部丝腺组织中的表达水平都较高,呈现严格的时空特异性。以pcDNA3质粒为载体,构建Bmo-miR-2755＊的重组表达载体pcDNA3[ie1-egfpprimiR-2755＊-SV40];以pGL3.0-Basic质粒为载体,分别构建BmFib-L 3＇UTR、BmP25 3＇UTR与荧光素酶报告基因luc融合的重组报告质粒pGL3.0[A3-luc-Fib-L-3＇UTR-SV40]和pGL3.0[A3-luc-P25-3＇UTR-SV40]。以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,分别将构建的Bmo-miR-2755＊重组表达载体和2个重组报告质粒共转染BmN细胞,通过检测细胞中的荧光素酶活性,明确Bmo-miR-2755＊可显著下调BmFib-L基因的表达,并能上调BmP25基因的表达,但上调作用未达显著水平。上述结果为研究家蚕miRNA的功能和阐明蚕丝蛋白基因表达调控分子机制提供了新的实验数据。; 范洋洋陈晨王欣宋菲唐顺明易咏竹沈兴家; 关键词：家蚕

Bmo-miR-2771对家蚕丝胶蛋白基因BmSer-1表达的调控作用被引量：1: 2016年; 微小RNA(miRNA)可通过抑制mRNA转录或使RNA降解的方式在转录后水平调节靶基因的表达。研究与家蚕丝胶蛋白基因1(BmS er-1)转录后表达有关的miRNA(Bmo-miR)及其作用方式,以丰富丝胶蛋白基因表达的精细调控信息。首先从miRBase 21数据库中获得全部成熟体Bmo-miR,通过生物信息学分析筛选到一个对BmS er-1有潜在调控作用的BmomiR,命名为Bmo-miR-2771。设计茎环引物,采用半定量RT-PCR方法检测Bmo-miR-2771及其预测靶基因BmS er-1在家蚕5龄3 d幼虫头部、脂肪体、前部丝腺、中部丝腺、后部丝腺、中肠等组织器官以及血淋巴细胞中的表达水平,结果显示Bmo-miR-2771特异性地在中部丝腺中表达,并且靶基因BmS er-1在中部丝腺的相对表达量也明显高于其他组织。将构建的表达BmomiR-2771的重组质粒pcD NA3.0(ie1-egfp-pri-miR-2771-SV40)和表达BmS er-1 3'-UTR的重组质粒pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTRSV40)共转染家蚕卵巢培养细胞BmN,并以共转染pcD NA3.0(ie1-egfp-SV40)和pG L3(A3-luc-Ser-1 3'UTR-SV40)的BmN细胞为阳性对照,以海肾荧光素酶表达载体pRL-CMV为内参,检测荧光素酶活性,结果显示实验组的荧光素酶活性相对于阳性对照组显著降低(P<0.05),从细胞水平证实了Bmo-miR-2771对BmS er-1基因表达具有负调控作用。; 钱平蒋涛王欣宋菲陈晨范洋洋唐顺明沈兴家; 关键词：家蚕微小RNA 转录后调控半定量RT-PCR

家蚕Bmo-miR-2739对丝素重链基因Fib-H表达的调控作用被引量：7: 2014年; MicroRNAs(miRNAs)是一类内源性的非编码小RNAs,可通过序列互补配对的方式对靶基因mRNA的转录进行调控。丝素重链(Fib-H)是家蚕丝蛋白的重要组成成分,研究miRNAs对Fib-H基因mRNA的调控作用,有助于理解丝腺高效合成蚕丝蛋白的分子机制。用靶基因预测软件RNA22和RNAhybrid对Fib-H基因的3'-UTR及已知的家蚕miRNA进行分析,发现Fib-H基因的3'-UTR有一个Bmo-miR-2739的潜在靶位点。进一步将人工合成的Bmo-miR-2739模拟物和带有Fib-H基因3'-UTR的荧光素酶报告基因载体共转染BmN细胞,48 h后检测到荧光素酶表达上调约13%。初步推测Bmo-miR-2739对Fib-H具有正调控作用。; 宋菲王欣钱平唐顺明赵巧玲郭锡杰沈兴家; 关键词：家蚕 MICRORNA 转录调控

国家自然科学基金(31172266)

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