国家自然科学基金(31000046)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
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- 多黏菌素B刺激下伤寒沙门菌mig-14基因的表达特性被引量：2
- 2017年
- 目的:研究多黏菌素B(polymyxin,PB)刺激下,伤寒沙门菌mig-14基因的表达是否受调节因子Fis、OmpR、IHF、HilD激活。方法:用自杀质粒法分别制备hilD及IHF的α亚基编码基因(himA)和β亚基编码基因(himD)的缺陷株;然后通过实时定量PCR和lacZ融合实验比较PB刺激下mig-14在伤寒沙门菌各缺陷株(himA、himD、hilD、fis、ompR)与野生株中的转录水平差异,筛选出作用于mig-14的调控因子。结果:成功制备伤寒沙门菌himA、himD及hilD缺陷株;在多黏菌素B刺激下,实时定量PCR结果显示fis、ompR、himA、himD及hilD缺陷株中mig-14 mRNA水平明显低于野生株;lac Z融合实验中,fis、ompR、himA、himD及hilD缺陷株Miller Units值明显低于野生株。结论:在多黏菌素B刺激下,调节因子Fis、OmpR、IHF、HilD可激活伤寒沙门菌mig-14表达。
- 陈龙杨璐璐李敏殷灵莉徐顺高黄新祥生秀梅
- 关键词：伤寒沙门菌多黏菌素B基因调控
- BTG2基因重组慢病毒载体的构建及其在肺癌A549细胞中的表达与功能被引量：1
- 2016年
- 目的构建重组慢病毒载体pCDH-BTG2,并检测其转染肺癌A549细胞后的表达与功能。方法通过PCR技术以含B细胞转位基因(BTG2)的cDNA克隆质粒(HsCD00330081)为模板获得BTG2基因片段,将此片段克隆至慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro,形成pCDH-BTG2,转染PC3细胞检测BTG2的表达;将重组慢病毒载体质粒pCDH-BTG2包装成重组慢病毒颗粒,感染肺癌A549细胞后,通过蛋白免疫印迹法检测BTG2的表达,细胞计数法检测BTG2对A549细胞生长的影响。结果 pCDH-BTG2重组质粒构建成功,转染PC3细胞后可检测BTG2蛋白的表达,pCDH-BTG2包装成慢病毒感染A549细胞后,显著抑制A549细胞的生长。结论成功构建了重组慢病毒载体pCDH-BTG2,并发现BTG2抑制A549细胞的生长,为研究BTG2的功能奠定了基础,同时为肺癌的药物研究提供了靶点。
- 生秀梅王正新
- 关键词：慢病毒属基因基因表达肺肿瘤
- 胶质瘤致病相关蛋白1对肺癌A549细胞生长及分化的影响被引量：4
- 2019年
- 目的:观察胶质瘤致病相关蛋白1(GLIPR1)对肺癌A549细胞生长及分化的影响,以期为肺癌药物的研制提供线索。方法:构建重组慢病毒Lenti-GLIPR1和包含GLIPR1胞外可溶性区段(GLIPR1-S)基因片段的LentiGLIPR1-S,感染A549细胞后,通过Western blot法检测GLIPR1或GLIPR1-S蛋白的表达,细胞计数法检测细胞生长,免疫细胞化学法观察细胞分化。结果:A549细胞经慢病毒Lenti-GLIPR1和Lenti-GLIPR1-S感染后,均可表达相应蛋白,细胞生长受抑,细胞形态发生改变,向肺上皮细胞分化。结论:感染GLIPR1和GLIPR1-S均可促进A549细胞向肺上皮细胞分化,抑制A549细胞的生长。
- 生秀梅黄新祥王正新
- 关键词：A549细胞细胞分化
- 伤寒沙门菌外膜孔道蛋白ompC、ompF缺陷株的制备及其耐药性被引量：3
- 2015年
- 目的:制备伤寒沙门菌omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,研究外膜孔道蛋白Omp C、Omp F在伤寒沙门菌耐药中的作用。方法:经自杀质粒介导的同源重组方法制备omp C缺陷株及omp C-omp F双缺陷株,比较伤寒沙门菌omp C缺陷株、omp F缺陷株及omp C-omp F双缺陷株与野生株在多黏菌素B、卡那霉素以及氨苄青霉素处理下的生存能力。结果:成功制备伤寒沙门菌omp C单缺陷以及omp C-omp F双缺陷株。各菌株在普通培养条件下生长情况无差异;多黏菌素B及氨青苄霉素处理条件下omp C缺陷株、omp C-omp F双缺陷株生存能力明显强于野生株,而omp F缺陷株生存能力则低于野生株;卡那霉素处理条件下,各缺陷株生存能力均明显低于野生株。结论:外膜孔道蛋白Omp C、Omp F参与伤寒沙门菌耐药,但对不同药物的耐药机制不尽相同,具体机制有待进一步研究。
- 汪伟伟夏歆王静瑜张桂红陈龙黄新祥生秀梅
- 关键词：伤寒沙门菌OMPCOMPF抗生素耐药性
- 伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY的克隆表达与多克隆抗体的制备
- 2013年
- 目的:克隆表达伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY并制备多克隆抗体。方法:通过PCR技术从伤寒沙门菌基因组DNA中获得伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY,再将此基因片段克隆到表达载体pET22b(+)上,并转入大肠埃希菌JM109进行表达;Ni柱纯化后的OsmY蛋白作为抗原免疫家兔,并获得多克隆抗体。结果:成功制备伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY的蛋白表达菌株,并获得了纯化的OsmY蛋白,成功制备兔抗OsmY的多克隆抗体。结论:成功克隆表达了伤寒沙门菌高渗诱导基因osmY,并获得了多克隆抗体,有助于今后研究OsmY在伤寒沙门菌高渗应激中的作用。
- 翁晓琴张红詹莉芳张晓磊生秀梅徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌多克隆抗体
- 伤寒沙门菌virK和mig-14基因在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的差异
- 2012年
- 目的:比较伤寒沙门菌virK和mig-14基因在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的差异,探讨两者在拮抗多黏菌素B杀伤作用中的关系。方法:用自杀质粒介导的同源重组方法制备伤寒沙门菌virK缺陷变异株和virK/mig-14双缺陷变异株,在弱酸性环境下对缺陷菌株做多黏菌素B杀伤试验,比较mig-14缺陷株、virK缺陷株和virK/mig-14双缺陷株对多黏菌素B的耐受情况。结果:成功制备伤寒沙门菌virK缺陷变异株和virK/mig-14双缺陷变异株,在弱酸性环境下mig-14缺陷株、virK缺陷株和virK/mig-14双缺陷株对多黏菌素B的耐受情况基本一致。结论:virK在伤寒沙门菌GIFU10007中也发挥对多黏菌素B的拮抗作用,与mig-14对多黏菌素B的拮抗作用有相似效果。
- 夏秋风生秀梅徐顺高黄新祥
- 关键词：伤寒沙门菌多黏菌素B
- pGL3-4×PRE-E4-luc报告基因质粒的构建及在p44信号通路中的应用鉴定
- 2016年
- p53基因是一种重要的抑癌基因,其产物能够与靶DNA特异性结合并激活转录参与诱导细胞凋亡,调控细胞周期,控制细胞的增殖与分化.p44蛋白主要定位于前列腺癌细胞的细胞质,促进癌细胞的增殖.通过shRNA沉默p44的表达后,LNCaP细胞的生长受抑制,p53靶基因TIGAR和GLIPR1的表达增加.为探寻p53是否介导p44对TIGAR和GLIPR1的作用,本研究构建了pGL3-4×PRE-E4-luc报告基因质粒,并将其分别转染经NT-shRNA慢病毒和p44-shRNA慢病毒感染的LNCaP细胞,比较两者荧光素酶活性.结果显示,重组质粒pGL3-4×PRE-E4-luc构建成功,为进一步研究p53在肿瘤发生发展过程中的作用通路提供了新的手段.但LNCaP细胞中p44并非通过p53作用于TIGAR和GLIPR1基因,具体机制仍有待进一步研究.
- 生秀梅WANG Zhengxin
- 关键词：P53报告质粒
