目的研究疫苗中硫柳汞含量对劳里测定(Lowry Assay,Lowry)法测定蛋白质含量结果的影响,为准确测定新型甲型H1N1流行性感冒(甲流)疫苗蛋白质含量提供依据。方法配制终浓度分别为30μg/ml(微克/毫升)与60μg/ml的甲流病毒抗原、人血清白蛋白及重组乙型肝炎病毒表面抗原溶液(均含有终浓度分别为10、20、40、60、80、100μg/ml的硫柳汞),于不同时间点使用Lowry法(《中国药典》2010年版三部)测定各溶液的蛋白质含量,将结果进行比较。结果以Lowry法测定蛋白质含量,30μg蛋白/ml组回收率在125.85%～284.14%,硫柳汞含量与回收率呈正相关,相关系数(Coefficient of Correlation,r)为0.992～0.997;去除硫柳汞影响后,回收率99.25%～104.92%。60μg蛋白/ml组回收率112.12%～191.60%,硫柳汞含量与回收率呈正相关,r值为0.993～0.997;去除硫柳汞影响后,回收率97.35%～103.79%。结论硫柳汞可使Lowry法测定的蛋白质含量结果偏高,且硫柳汞含量与蛋白质含量偏高程度呈高度正相关,通过定量测定去除其影响后,可以准确测出甲流疫苗中的蛋白质含量,为甲流疫苗质量评价提供依据。
目的比较甲型乙型肝炎联合疫苗(Hepatitis A and B Combined Vaccine,HepAB)与重组乙型肝炎(乙肝)疫苗(酿酒酵母)(Hepatitis B Vaccine Made by Recombinant Deoxyribonucleic Acid Techniques in SaccharomycesCerevisiae Yeast,HepB-SCY)、甲型肝炎(甲肝)灭活疫苗(Hepatitis A Virus Inactivated Vaccine,HepA-Ⅰ)诱导小鼠细胞免疫和体液免疫应答的特点。方法 4组无特定病原体的BALB/c小鼠(H-2d,6～8周龄,16～18克,雌性),分别皮下接种HepAB[含甲肝抗原150单位(Unit,U)、乙肝抗原3微克(μg)]、HepB-SCY(含乙肝抗原3μg)、HepA-Ⅰ(含甲肝抗原150U)及铝佐剂对照,于免疫后14d分离脾单个核细胞(Mononuclear Cell,MNC),应用酶联免疫斑点试验(Enzyme-linked Immunospot Assay,ELISPOT)测定MNC体外刺激后所产生的细胞因子干扰素(Interferon,IFN)-γ、白细胞介素(Interleukin,IL)-2斑点形成细胞数(Spots-forming Cell,SFC);同时应用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测免疫后脾MNC培养上清中诱导分泌抗原特异性IFN-γ细胞因子的含量;分别于免疫后14d、28d检测小鼠血清抗甲肝病毒抗体(Antibody to Hepatitis AVirus,Anti-HAV)IgG和抗乙肝病毒表面抗原抗体(Antibody to Hepatitis B Virus Surface Antigen,Anti-HBs)水平。结果应用ELISPOT法检测,HepAB免疫小鼠后诱导乙肝抗原特异性IL-2分泌水平(50%)高于HepB-SCY(20%),HepAB组诱导甲肝抗原特异性IFN-γ阳转率(70%)高于HepA-Ⅰ组(30%),且HepAB诱导乙肝抗原特异性IFN-γ分泌水平(80%)均显著高于HepB-SCY组(30%)(P=0.03489)。应用ELISA法检测HepAB免疫后脾MNC培养诱导分泌甲肝抗原特异性IFN-γ阳转率(80%),也显著高于HepA-Ⅰ组(20%)(P=0.01151)。HepAB组于免疫14d、28d诱导的Anti-HBs抗体滴度分别为93.6毫国际单位/毫升(mIU/ml)和476.8 mIU/ml,均高于HepB-SCY组的26.5 mIU/ml和237.8 mIU/ml。结论两种细胞免疫评价方法结果均表明,HepAB诱导抗原特异性细胞免疫应答反应优于HepB-SCY、HepA-Ⅰ;HepAB�
