中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(SKLVBP201303)
- 作品数：4 被引量：10H指数：2
- 相关作者：高立高玉龙祁小乐陈玉明王笑梅更多>>
- 相关机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家现代农业产业技术体系建设项目中央级公益性科研院所基本科研业务费专项教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
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- 鸡法氏囊B淋巴细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定
- 2014年
- 为了研究传染性法氏囊病病毒(IBDV)与宿主B淋巴细胞作用机制,构建鸡法氏囊B淋巴细胞酵母表达文库,试验从3周龄SPF鸡中摘取法氏囊,分离制备B淋巴细胞,从中提取细胞总RNA,使用SMART和LD-PCR技术合成双链cDNA,并进一步与线性化载体pGADT7-Rec共同转化Y187酵母感受态细胞,通过同源重组构建酵母表达文库。结果表明:所构建cDNA文库的效价为9.5×107cfu/mL,重组率为100%,可以用于酵母双杂交试验。
- 陈玉明高玉龙张礼洲王念高立任宪刚姜莉莉高宏雷秦立廷王永强祁小乐王笑梅
- 关键词：法氏囊B淋巴细胞酵母双杂交CDNA文库
- 不同毒力传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定被引量：5
- 2014年
- 传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)毒株Gx(超强毒株)、F9(中等毒力毒株)、Gt(弱毒株)遗传背景高度相似,但生物学性状差异显著。为研究不同毒力毒株与宿主细胞相互作用的分子细节,本研究将IBDV Gx、F9、Gt毒株的衣壳蛋白VP2基因克隆入pGBKT7载体,分别构建了诱饵载体pGBGxVP2、pGBF9VP2和pGBGtVP2。经Matchmaker Gold Yeast Two-hybrid System验证,结果显示所构建的3个诱饵载体均无自激活作用,对酵母细胞无毒性作用。本研究为利用酵母双杂交系统深入研究IBDV与宿主相互作用奠定了基础。
- 陈玉明张礼洲任宪刚高立秦立廷高玉龙王永强高宏雷王笑梅祁小乐
- 关键词：传染性法氏囊病病毒衣壳蛋白酵母双杂交诱饵载体自激活作用
- 传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体的构建及互作宿主细胞蛋白的筛选
- 2015年
- VP4蛋白(viral protein 4)是传染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)编码的一种重要非结构蛋白,具有蛋白水解酶活性,剪切多聚蛋白pVP2-VP4-VP3释放出pVP2、VP4、VP3,对病毒蛋白成熟具有重要的作用。为了研究VP4蛋白与宿主细胞的相互作用,本研究将IBDVVP4基因克隆入pGBKT7,构建诱饵载体pGBGtVP4,自激活试验证明其无自激活活性,对酵母细胞没有毒性。运用酵母双杂交技术,从鸡胚成纤维细胞(CEF)文库中筛选VP4的互作蛋白,经初筛、测序和回转验证,获得22个候选互作宿主细胞蛋白,为深入研究IBDV VP4与宿主互作的效应和机制奠定了基础。
- 王念陈玉明张礼洲高立卢珍高玉龙王永强高宏雷刘长军崔红玉王笑梅祁小乐
- 关键词：传染性法氏囊病病毒VP4酵母双杂交诱饵载体
- 鸡胚成纤维细胞cDNA酵母表达文库的构建与鉴定被引量：7
- 2013年
- 试验提取CEF细胞总RNA,运用SMART和LD-PCR技术合成cDNA,通过同源重组克隆入真核表达质粒pGADT7,转化酵母菌Y187,构建cDNA表达文库。文库滴度高达6.94×107cfu/mL,重组率达100%。随机挑选10个克隆进行测序,全部为原鸡序列。本研究为进一步研究重要禽源病毒与宿主细胞的相互作用奠定了基础。
- 祁小乐陈玉明张礼洲任宪刚高立高宏雷秦立廷王永强高玉龙王笑梅
- 关键词：CEFCDNA文库酵母双杂交
