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国家自然科学基金(30771066)
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相关作者:
温传俊
黄银华
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张丽
吴寅子
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相关领域:
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2011
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人NRAGE基因启动子转录活性的初步研究
2011年
利用生物信息学软件搜寻NRAGE启动子区域的转录因子结合位点,并根据这些位点利用PCR技术克隆NRAGE启动子不同区域的缺失突变体,分别插入Luciferase报告载体pGL3-Basic载体中,构成8种缺失突变体的报告基因表达载体.通过双荧光素酶体系检测在HEK-293细胞中NRAGE启动子不同区域的转录活性,从而确定起主要作用的启动子区域.结果发现NRAGE基因转录起始位点上游-300 bp到-100 bp的区域起到主要的转录调控作用.
吴寅子
张丽
温传俊
关键词:
缺失突变
转录活性
NRAGE基因甲基化调控其在乳腺癌细胞中的表达
2011年
目的:探讨人NRAGE(Neurotrophin receptor-interacting MAGE homologue)基因启动子区CpG岛甲基化状态及其在乳腺癌细胞中的表达调控.方法:用Real-time PCR检测NRAGE在乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中的表达;软件分析NRAGE启动子区是否存在CpG岛;脱甲基化药物5-Aza-CdR处理MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞,半定量RT-PCR法及Western blot法检测用药前后细胞中NRAGE的mRNA及蛋白表达的变化;MSP法检测MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞中NRAGE基因的甲基化状态.结果:NRAGE启动子区存在CpG岛;MDA-MB-231细胞中NRAGE启动子区CpG岛高甲基化,mRNA本底表达水平较低,脱甲基化药物5-Aza-CdR处理后mRNA及蛋白表达水平明显上升;MCF-7细胞中NRAGE启动子区CpG岛未发生甲基化,mRNA本底表达水平比MDA-MB-231细胞高,5-Aza-CdR处理后mRNA及蛋白表达无明显变化.结论:NRAGE基因甲基化可以对其在乳腺癌细胞中的表达进行调控.
黄银华
黄修沦
温传俊
关键词:
DNA甲基化
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