国家自然科学基金(30771045)
- 作品数：8 被引量：16H指数：3
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- 不同基质材料修饰的Sylgard184与C2C12细胞的相容性被引量：3
- 2009年
- 目的筛选能提高硅酮橡胶弹性体（Sylgard184）与C2C12相容性的理想基质材料。方法Sylgard184双组分以10∶1的比例均匀混合,倒入6孔板的其中4孔,室温下静置固化,其余2孔做为空白对照培养组（A组）;固化后的Sylgard184表面依次经过以下处理：I型胶原包被（B组）、层黏连蛋白包被（C组）、多聚赖氨酸包被（D组）;未经包被（E组）,每组共6个样本。在不同基质材料修饰的Sylgard184表面培养C2C12细胞,利用倒置显微镜观察5组C2C12细胞的增殖、分化状态,流式细胞术（FCM）检测增殖培养48h后C2C12细胞的分裂增殖情况,RT-PCR检测增殖和分化培养48h后C2C12细胞内MyoD、myogenin mRNA的表达。结果Sylgard184材料存在细胞毒性,E组接种的C2C12细胞在24h内全部漂浮死亡;D组的大多数细胞出现死亡,仅少数贴壁存活;而B、C两组材料包被后明显减少Sylagard184的毒性,增强其表面与C2C12细胞的相容性,且C组细胞处于合成期的百分比以及增殖期的MyoD和分化期Myogenin基因mRNA的表达水平均显著高于A、B两组（P〈0.05）。结论经层黏连蛋白包被后的Sylgard184表面更有利于C2C12细胞的增殖及分化活性的表达。
- 王齐廖华秦建强余磊邱小忠于巧莲艾鹤英
- 关键词：细胞基质相容性C2C12细胞
- 骨骼肌成肌干细胞体外三维与平面培养的比较研究被引量：1
- 2010年
- 目的比较三维与平面培养C2C12细胞形态及功能差异。方法I型胶原和Matrigel Matrix修饰Sylgard 184铸槽和普通培养皿,分别接种C2C12细胞悬液,细胞增殖至80%融合时换含2%马血清的DMEM/F12诱导分化获取成熟的肌管;倒置显微镜观察肌管形态,RT-PCR和免疫荧光检测。结果Sylgard 184铸槽表面的C2C12细胞诱导分化5d出现多核、极性肌管,17d时肌管增粗成熟、极性平行,融合形成肌组织类似物,厚0.15mm,有自主收缩性;扫描电镜见肌管之间排列紧密、重叠,具有三维性;而平面培养肌管小而排列紊乱。RT-PCR表明三维培养的MyoD、Myogenin mRNA表达更为显著;Myogenin、Desmin、F-actin、MHC和nAChR蛋白检测显示,极性肌管内荧光蛋白的表达更密集。结论三维培养更有利于成肌细胞的体外极性分化和肌管间细胞连接的形成,分化肌管的存活时间较长,有利于成肌分化因子和收缩蛋白的表达,是骨骼肌的发生发育、应力加载和骨骼肌肌病良好的体外研究模型。
- 艾鹤英秦建强余磊廖华
- 关键词：C2C12细胞
- 失神经萎缩肌组织中卫星细胞池的耗竭与Pax7的相关性研究被引量：6
- 2009年
- 目的探讨长期失神经骨骼肌在反复增殖分化过程中,肌卫星细胞池耗竭可能的信号通路。方法选用2月龄SD雄性大鼠9只,体重180～200g。以大鼠右侧为实验侧,制备腓肠肌失神经支配模型;左侧为对照侧,分离显示坐骨神经后缝合肌肉皮肤。观察大鼠一般情况,于术后3、7、21d各取3只大鼠,切取两侧腓肠肌进行大体观察后,行Pax7和MyoD免疫荧光染色观察及mRNA表达检测。结果9只大鼠术后均存活。实验侧后肢僵直,活动受限;对照侧肢体活动自如。术后各时间点实验侧腓肠肌均出现不同程度萎缩;对照侧腓肠肌较饱满有光泽。荧光染色观察显示,随失神经时间延长,实验侧MyoD阳性细胞数逐渐增多,21d达高峰,与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验侧Pax7阳性细胞逐渐降低,3、7d与对照侧比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验侧MyoDmRNA表达逐渐升高,21d达高峰,各时间点实验侧均显著高于对照侧(P<0.05);实验侧Pax7mRNA表达逐渐降低,仅出现于3、7d,与对照侧比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论长期失神经肌萎缩引发的Pax7短暂上调提示卫星细胞池耗竭的原因之一在于细胞难以返回静止状态。
- 廖华王齐徐达传邱小忠余磊欧阳钧
- 关键词：失神经肌萎缩肌卫星细胞MYOD
- C2C12细胞诱导构建三维骨骼肌组织被引量：4
- 2010年
- 目的利用修饰并铸型后的Sylgard 184凹槽与C2C12细胞复合培养、诱导分化,获取三维极性骨骼肌组织。方法 Sylgard 184双组分以10∶1的比例均匀混合并倒板,室温下静置固化并对其表面压槽铸型,Hank液冲洗凹槽,Matrigel和胶原的混合液均匀铺被凹槽底部,置生物安全柜待细胞基质自然干燥、紫外线照射消毒1h以上时接种C2C12细胞悬液,细胞增殖约80%汇合时改用分化培养基进行分化诱导,倒置显微镜下观察肌管的分化状态,RT-PCR方法检测肌管内myogenin和desmin基因mRNAs的表达,免疫荧光检测生肌转录因子myogenin和desmin蛋白的表达,扫描电镜观察肌管形态和肌管间的连接。结果 C2C12细胞在Sylgard 184弹性体铸型压槽中培养分化7d后,倒置显微镜下可见肌管呈极性分化,且肌管之间融合紧密;21d后,扫描电镜检测可见肌管之间排列紧密且相互重叠,形成膜样结构,厚度可达0.15mm,具有三维性;RT-PCR、免疫荧光检测证实极性分化肌管内具有myogenin和desmin的阳性表达。结论修饰并铸型的Sylgard 184凹槽具有一定的方向引导效应,能促进C2C12细胞分化形成多核肌管,且肌管呈极性重叠排列,形成三维极性骨骼肌组织结构。
- 王齐廖华秦建强余磊艾鹤英汪海仪邱小忠
- 关键词：MATRIGEL肌组织反转录-聚合酶链式反应C2C12细胞
- miRNAs与骨骼肌成肌干细胞
- 2009年
- miRNA的研究起始于stRNA（small temporal RNA）,1993年Lee等在秀丽隐杆线虫（C．elegan）中通过基因筛选和定位克隆的方法发现了lin-4。在2000年,Reinhart等在人类和果蝇中发现第二个异时性开关miRNA-let-7；2001年有3个实验室发表研究数据,他们各自从线虫、果蝇和人体克隆出几百个类似C．elegan的lin-4的miRNA基因,这些非编码miRNA被统称为miRNA。国内外学者们通过分子克隆和生物信息学等方法,已在动物、植物、病毒及单细胞生物体中鉴定出大约5000余种miRNAs,并且建立了miRNA数据库（http：//microrna．sanger．ac．uk/）,为世界各国学者开展miRNA研究提供资源共享。
- 艾鹤英廖华
- 关键词：MIRNAS骨骼肌秀丽隐杆线虫RNA基因定位克隆基因筛选
- 力学刺激对体外培养成肌细胞作用机制的研究进展
- 2007年
- 在体组织通常处于复杂的生长环境，其中力学刺激的作用极大地影响着组织的形态结构和功能。力学拉伸是维持细胞生存和生长的重要细胞外刺激，它能够调节细胞的新陈代谢和基因表达过程，在成肌细胞的激活、增殖与分化中扮演重要角色㈣。为克服骨骼肌组织工程研究中成肌细胞的诱导分化、三维培养及组织构建等方面的困难。使体外构建的骨骼肌更接近于在体的肌肉组织，应力拉伸在诱导成肌细胞的激活、增殖及分化方面的作用机制日益受到相关研究者的重视，并进行了大量的研究报导，本文就该领域的研究进展予以综述。
- 王齐廖华
- 关键词：细胞作用机制成肌细胞体外培养诱导分化生长环境
- 骨骼肌组织工程支架材料的研究进展
- 2010年
- 目的综述骨骼肌组织工程支架材料的研究现状,展望骨骼肌组织工程支架材料的发展方向。方法查阅近年来关于骨骼肌组织工程支架材料的相关文献,并从骨骼肌组织工程支架材料的种类、特性、制备技术、生物相容性等方面进行回顾及综合分析。结果骨骼肌组织工程支架材料种类繁多,大致可分为无机生物材料、生物可降解合成高分子材料、天然可降解生物材料和复合材料等4种,对不同特性的支架材料,制备工艺不同,制备出的支架各有其结构和功能优势,可根据不同的研究需求进行选择。结论复合材料的应用、复合支架的制备以及根据支架材料所需特定功能对其表面进行改性,是骨骼肌组织工程支架材料应用的发展方向。
- 黄维一廖华
- 关键词：生物相容性表面改性
- 成肌细胞的临床应用进展被引量：2
- 2010年
- 成肌细胞是指胞浆中含有肌丝的肌组织前体细胞,来源于中胚层干细胞,胚胎发育过程中首先由间充质细胞分化为成肌细胞,然后分裂、融合成多核肌纤维,形成肌小管,再进一步分化为成熟的骨骼肌细胞。成肌细胞具有自我更新和促进肌纤维再生的能力。
- 刘幸卉廖华
- 关键词：成肌细胞胚胎发育过程骨骼肌细胞前体细胞自我更新肌纤维
