博士科研启动基金(4305050102B2)
- 作品数：3 被引量：20H指数：3
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- 烟草花叶病毒南瓜分离物CP基因的克隆、序列分析及其原核表达被引量：13
- 2010年
- 为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原。采用RT-PCR的方法,用TMV外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,克隆到的基因序列进行分析,并使其在大肠杆菌中表达。结果表明,从该样品中扩增到了TMV的CP基因,说明该样品受到TMV的侵染,首次发现TMV自然侵染南瓜。对CP基因序列测定及分析表明,与GenBank上其他TMV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为86.5%～99.0%,推导的氨基酸序列同源性为93.7%～99.4%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:32个TMV分离物可分为5个组,其中TMV-liaocheng与Nakron Pathom、Fujian、017等分离物属于Ⅳ组。TMV-liaocheng可能发生过重组。将TMV-liaocheng CP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS诱导表达出分子量约20kDa的融合蛋白,并用Ni2+-NTA His·Bind树脂纯化,纯化后的蛋白可直接用于制备特异性的抗血清,为准确、快速地检测TMV奠定了基础。
- 刘金亮王凤婷魏毅潘洪玉张世宏
- 关键词：南瓜烟草花叶病毒CP基因原核表达
- 侵染南瓜的西瓜花叶病毒和黄瓜花叶病毒CP基因的克隆和序列分析被引量：8
- 2010年
- 为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原,采用RT-PCR的方法,用马铃薯Y病毒属病毒3′-末端序列的简并引物和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,并对克隆到的基因序列进行分析。结果表明,该样品受西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)和CMV2种病毒的复合侵染,分别命名为WMV-liaocheng和CMV-liaocheng,与其他相应病毒分离物CP基因核苷酸序列的同源性分别为91.2%～98.0%和77.0%～97.9%,推导的氨基酸序列同源性分别为96.4%～98.5%和81.2%～99.1%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:18个WMV分离物可分为3组,其中WMV-liaocheng与HLJ、CHN及Habenaria等分离物表现出较近的亲缘关系,形成Ⅲ组;30个CMV分为2个亚组,其中CMV-liaocheng属于亚组I,CMV-liaocheng可能发生过重组。
- 刘金亮王凤婷魏毅张世宏潘洪玉
- 关键词：南瓜西瓜花叶病毒黄瓜花叶病毒复合侵染CP基因
- 侵染辣椒的黄瓜花叶病毒CP基因的序列分析、原核表达及抗血清制备被引量：3
- 2010年
- 从吉林长春感病辣椒上获得一黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)分离物(CMV-CC),根据GenBank中已登录的CMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因核苷酸序列设计简并引物,通过RT-PCR的方法克隆到了长度为657 bp的目的片段。序列分析表明,CMV-CC与CMVI组各分离物核苷酸同源性为93.2%-97.9%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:38个CMV分离物可分为3个组,CMV-CC属于CMV的IB亚组。将CMV-CC CP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达出分子量约27 kD的融合蛋白。表达的融合蛋白经树脂纯化后免疫家兔制备了抗血清。用间接ELISA测定抗血清效价为1/4 096。Western blotting分析表明制备的抗血清对CP有高度特异性,为准确、快速地检测CMV奠定了基础。
- 刘金亮王凤婷侯春喜魏毅张世宏潘洪玉
- 关键词：黄瓜花叶病毒辣椒CP基因原核表达抗血清制备
