国家自然科学基金(30400217)
- 作品数：13 被引量：60H指数：4
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- LADA患者血清胰岛素原水平及其意义
- 2008年
- 目的探讨成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）患者血清胰岛素原（PI）的分泌特征及其意义。方法36例LADA患者、37例2型糖尿病患者和43名正常对照者均行口服糖耐量试验（OGTT），检测空腹和2h血糖、胰岛素原（FPI和PPI）和C肽（FCP和PCP）水平，放射配体法测定谷氨酸脱羧酶抗体（GAD-Ab）。结果（1）LADA组FPI和PPI均低于2型糖尿病组（均P〈0．05），但均较对照组升高（P〈0．05或P〈0．01）；FPI／FCP和PPI／PCP（％）较2型糖尿病和正常对照均增高（P〈0．05或P〈0．01）；（2）LADA-1型（GAD-Ab≥0．3）的PI低于LADA-2型（0．05≤GAD-Ab〈0．3）（P〈0．05或P〈0．01），而PI／C肽均高于LADA-2型（均P〈0．05）；而LADA-2型与2型糖尿病差异无统计学意义；（3）LADA患者的GAD—Ab滴度与FPI和PPI呈显著负相关（r为-0．236和-0．268，均P〈0．05），与PPI／PCP呈显著正相关（r=0．254，P=0．030）；（4）FPI／FCP“不成比例”增高者占LADA、2型糖尿病和正常组的百分比分别为77．8％、62．2％和2．3％，PPI／PCP增高者为83．3％、51．4％和2．3％。结论LADA患者和2型糖尿病患者一样，亦存在高PI血症，且“不成比例”PI异常增多在LADA更为显著，可能与免疫因素有关。
- 杨琳周智广唐炜立颜湘黄干金萍李霞
- 关键词：隐匿性自身免疫性糖尿病胰岛素原C肽
- CTLA-4基因外显子1A/G^(49)多态性与特发性1型糖尿病的相关性研究被引量：4
- 2006年
- 【目的】探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associatedantigen4,CT-LA-4)基因外显子1A/G49多态性与中国汉族人特发性1型糖尿病(T1DM)的关系。【方法】采用多聚酶链式反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术检测179例特发性T1DM患者和290例健康对照者CTLA-4基因外显子1A/G49基因型,分析此位点多态性与特发性T1DM的相关性。【结果】特发性T1DM组等位基因G49频率明显高于正常对照组(P<0.01),基因型GG明显高于正常对照组(P=0.002),基因型AA明显低于正常对照组(P=0.004)。【结论】CTLA-4基因A/G49多态性与特发性T1DM易感性相关。
- 向斌周智广杨琳黄干林健
- 关键词：糖尿病
- 锌转运体8自身抗体对急性起病糖尿病患者分型诊断的价值被引量：2
- 2010年
- 目的 探讨锌转运体8自身抗体（ZnT8A）对急性起病糖尿病患者分型诊断的价值.方法 453例急性起病糖尿病患者根据谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）和酪氨酸磷酸酶抗体（IA2-A）阳性分为A＋组276例（任一抗体阳性）和A-组177例（抗体皆为阴性） 将555例2型糖尿病患者和405名健康者作为对照.分析ZnT8A在急性起病糖尿病患者和亚组中的分布规律、相关因素和ZnT8A阳性者的临床特征.抗体检测采用放射配体法.结果 （1）ZnT8A在急性起病糖尿病组的阳性率为24.3%,显著高于2型糖尿病组（1.8%）和健康对照组（1.0%）（均P＜0.01） 而且ZnT8A在A＋组中的检出率为29.7%,显著高于A-组患者15.8%（x2=11.318,P＜0.01）.（2）ZnT8A阳性率在＜30岁各亚组高于≥30岁亚组（0～9岁,34.9% 10～19岁,26.7% 20～29岁,26.3%比≥30岁,18.3% 均P＜0.05） 在体质指数（BMI）＜21.0 kg/m2和21.0～25.0 kg/m2亚组高于BMI＞25.0 kg/m2亚组（25.5%和25.9%比8.7%,均P＜0.05）.（3）ZnT8A水平与IA2-A滴度间呈正相关（r=0.165,P=0.01）.（4）3种抗体联合测定使自身免疫检出率从60.9%提高到67.1%.（5）与抗体阴性者相比,ZnT8A单独阳性者日胰岛素需要量较多[（35.5±9.3）U/d比（29.8±14.7）U/d,P＜0.05],而收缩压和舒张压均较低[（107±15）mm Hg比（113±16）mm Hg,（69±12）mm Hg比（73±12）mm Hg,均P＜0.05].结论 ZnT8A对急性起病糖尿病患者的免疫分型诊断有一定价值,在常见抗体（GADA和IA2-A）阴性者中可识别出一类更接近于经典1型糖尿病的临床表型.
- 杨琳罗说明黄干彭健颜湘Janet WenzlauHoward W DavidsonJohn C Hutton周智广
- 关键词：急性起病
- 成人隐匿性自身免疫糖尿病患者存在GAD65反应性T细胞免疫异常被引量：4
- 2010年
- 目的探讨成人隐匿性自身免疫糖尿病（LADA）患者细胞水平的免疫发病机制。方法湖南省1型糖尿病协作中心2005年1至6月就诊的LADA患者17例，2004年3月至2006年1月就诊的2型糖尿病（T2DM）患者28例，健康者（对照）16名；放射配体法检测胰岛自身抗体；连续密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞；酶联免疫斑点法检测谷氨酸脱羧酶（GAD65）反应性、Th1、Th2细胞，两者比值示为Th1／Th2平衡。结果LADA组较T2DM、对照组具有更多Th1细胞，LADA、T2DM及对照组的Th1细胞数分别为4．0、2．0及1．0个，差异有统计学意义（P〈0．01）；3组的Th2细胞分别为2．0、3．3及1．0个（P〉0．05）；3组的Th1／Th2比值分别为3．0、0．4及0．3，差异有统计学意义（P〈0．05）；T2DM组的Th1细胞及Th1／Th2比值均与对照组差异无统计学意义，3组对植物血凝素非特异性刺激的Th1、Th2细胞数差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论LADA患者体内存在高频率的Th1细胞以及Th1／Th2平衡向Th1偏移是其细胞水平的免疫发病机制。
- 张翼周智广杨琳林健李霞何伟民
- 关键词：细胞T淋巴细胞酶联免疫斑点试验
- IL-2和IL-7对优化检测1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶65特异性T细胞反应的比较被引量：1
- 2017年
- 目的:探讨何种细胞因子(IL-2或IL-7)及其最佳浓度能够最有效地改善酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunospot,ELISPOT)检测1型糖尿病患者谷氨酸脱羧酶65(glutamic acid decarboxylase 65,GAD65)特异性T细胞反应的效率。方法:选取20例1型糖尿病患者(A组)及年龄和性别均匹配的16例正常对照者(B组);Ficoll法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs),以人GAD65、内对照、巴斯德五合一疫苗为抗原,加入不同浓度的IL-2[0 U/m L(1组)、0.5 U/m L(2组)、2.5 U/m L(3组)和12.5 U/m L(4组)],ELISPOT检测上述各浓度组分泌干扰素-γ(interferon-gamma,IFN-γ)的CD4+T细胞,比较各浓度组的GAD65孔(信号)、内对照孔(背景)的斑点数、斑点净值以及刺激指数(即信噪比,stimulating index,SI);另选取21例1型糖尿病患者(C组)及12例正常对照者(D组),检测针对GAD65抗原的特异性T细胞反应,比较联合IL-2(2.5 U/m L,上述实验已证明其为最优浓度,5组)与联合IL-7(0.5 ng/m L,6组)所产的斑点数和SI。结果:1)A组在加入IL-2刺激后,各浓度组中GAD65反应性T细胞数均较A1组增高,而各浓度下的内对照孔的斑点数亦呈比例升高。各浓度组斑点净值比较显示:A4组与A3组差异无统计学意义(P>0.05),而SI的比较则提示A3组最高;且仅A3组的SI(2.8)高于B3组(1.5),差异有统计学意义(P<0.05)。2)C6组及D6组的GAD65孔斑点数均分别略高于C5组及D5组,且C6组及D6组的斑点数增幅也分别高于C5组及D5组,但差异均无统计学意义(P>0.05)。C5组的斑点净值(5.5)和SI(2.8)均显著高于C6组的斑点净值(4.3)和SI(1.8),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:2.5 U/m L为ELISPOT检测1型糖尿病患者GAD65特异性T细胞反应的IL-2最佳浓度;IL-2较IL-7更有利于改善ELISPOT检测的SI。
- 袁娇崔秋燕唐维超晨周智广杨琳
- 关键词：1型糖尿病酶联免疫斑点法
- 吡格列酮对炎性因子所致胰岛细胞凋亡的保护作用被引量：6
- 2006年
- 目的:探讨Ppar-γ激动剂吡格列酮(PGZ)对炎性因子所诱导的胰岛细胞凋亡的保护作用,初步研究其作用机制。方法:Western-blotting检测NIT-1细胞的Ppar-γ受体蛋白表达;联合IL-1β及IFN-γ作用于体外培养的胰岛细胞株NIT-1,建立胰岛细胞炎症模型,观察(IL-1β+IFN-)γ与PGZ预孵育NIT-1细胞的凋亡;MTT法、流式细胞术检测细胞生长抑制率及凋亡率,比色法检测凋亡细胞caspase-3比活性。结果:NIT-1细胞表达Ppar-γ蛋白;(IL-1β+IFN-)γ组作用24 h对NIT-1细胞生长抑制率、凋亡率c、aspase-3比活性分别为49.8%、28.0%、3.5,对照组3项指标分别为0%、4.3%、1,两组比较均有十分显著差异(P<0.01);PGZ组3项指标分别为2.7%、7.1%、1.3,与对照组比较,均无明显差异(P>0.05);(PGZ+IL-1β+IFN-)γ组的3项指标分别为18.6%、14.8%、1.5,与(IL-1β+IFN-)γ组比较均有差异(P<0.05),与对照组比较分别为P>0.05,P<0.05,P<0.05。结论:NIT-1细胞表达Ppar-γ受体蛋白;联合IL-1β及IFN-γ明显诱导NIT-1细胞凋亡,PGZ显著抑制IL-1β及IFN-γ诱导的NIT-1细胞凋亡,其机制与降低caspase-3活性有关。
- 张翼周智广李霞向斌杨凌张松
- 关键词：吡格列酮胰岛细胞细胞因子凋亡
- 羧基肽酶-H抗体与LADA患者胰岛β细胞功能关系的横断面研究被引量：2
- 2006年
- 目的:探讨羧基肽酶-H自身抗体(CPH-Ab)与成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)患者胰岛β细胞功能的关系,以进一步明确其对LADA的诊断价值。方法:选择临床初诊2型糖尿病(T2DM)患者545例,采用放射配体法检测血清CPH-Ab和谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)滴度,以筛出的CPH-Ab阳性患者为病例组,以GAD-Ab阳性患者和抗体阴性的T2DM患者为对照组,比较3组研究对象的胰岛β细胞功能(以空腹和餐后2hC肽值表示),分析CPH-Ab与成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)患者胰岛β细胞功能的关系。结果:CPH-Ab阳性患者的空腹C肽介于GAD-Ab阳性与两种抗体(GAD-Ab和CPH-Ab)均阴性的T2DM患者之间(P<0.05),以病程分层后三者的C肽值仍具有统计学意义(均P<0.05),而以BMI分层无明显差异(均P>0.05)。经以年龄、起病年龄、病程、性别等为协变量校正后,3组间的空腹C肽和餐后2hC肽值仍存在显著性差异(均P<0.001),其中CPH-Ab+组仅空腹C肽低于Ab-T2DM组(P<0.05),而GAD-Ab+组空腹和餐后2hC肽均低于Ab-T2DM组(P<0.05和P<0.01)。胰岛素缺乏患者在CPH-Ab+组、GAD-Ab+组和Ab-T2DM组的比例分别为27.6%(8/29),48.1%(8/52)和13.5%(54/400),三者间差异有统计学意义(P(0.001)。多元线性逐步回归分析提示,GAD-Ab,BMI和空腹血糖对T2DM患者的空腹C肽和餐后2hC肽均有影响(均P<0.05),而CPH-Ab与二者均无统计学相关(均P>0.05)。结论:CPH抗体对LADA患者胰岛β细胞功能的影响不如GAD-Ab显著,CPH-Ab对LADA患者胰岛功能衰减的作用需前瞻性研究。
- 杨琳周智广黄干金萍亓海英
- 关键词：谷氨酸脱羧酶抗体成人隐匿性自身免疫糖尿病胰岛Β细胞功能
- 人羧基肽酶H原核表达载体的构建及其应用被引量：3
- 2007年
- 目的构建人羧基肽酶H(CPH)的原核表达系统,以获得其重组蛋白,并初步应用于人CPH自身抗体(CPH-Ab)的检测。方法采用PCR方法,从质粒pcDNAⅡ扩增出CPH基因片段,将其克隆到原核表达载体pQE30后转化宿主菌E.coliM15,IPTG诱导CPH蛋白表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化,Western-blot法检测表达蛋白的抗原性。用重组CPH蛋白作为包被抗原,初步建立检测CPH-Ab的ELISA方法。结果获得了CPH原核表达载体,CPH蛋白得到了表达。纯化的蛋白可被CPH-Ab阳性的1型糖尿病患者血清识别。与放射配体法相比较,以重组CPH蛋白作为包被抗原初步建立的ELISA方法,其灵敏性和特异性均升高,分别为93.3%和97.5%。结论重组CPH蛋白具有良好的抗原性,为糖尿病患者CPH-Ab的检测奠定了基础。
- 向斌周智广黄干杨琳张翼
- 关键词：重组蛋白质类
- ELISPOT检测羧基肽酶H阳性成人隐匿性自身免疫性糖尿病患者羧基肽酶H反应性T细胞被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨羧基肽酶H抗体(CPH-Ab)阳性的成人隐匿性自身免疫性糖尿病(LADA)患者外周血T细胞免疫的特点。方法:选取CPH-Ab+LADA患者42例,2型糖尿病组(T2DM)患者20例和健康对照22例,分离外周血单个核细胞;自制人CPH蛋白,应用酶联免疫斑点(ELISPOT)技术检测并比较各组在CPH诱导下分泌IFN-γ的Th1和分泌IL-4的Th2细胞数,计算Th1与Th2比值(Th1/Th2)。结果:与健康对照和T2DM比较,CPH-Ab+LADA患者的IFN-γ-T和IL-4-T细胞数无异常增多,Th1/Th2亦无统计学差异(P>0.05);但22例短病程(<3年)CPH-Ab+患者的CPH-IL-4-Th2细胞数较T2DM患者和正常对照均显著升高(1.8 vs.0.2和0.3,均P<0.05),但未发现任何因素与该斑点数相关。各组间的T细胞针对植物血凝素的反应均无统计学差异。结论:CPH未直接诱导LADA的细胞免疫破坏反应,CPH反应性T细胞标志的可能是一进展相对缓慢的、胰岛β细胞的自身免疫过程。
- 杨琳周智广杜弢谭少珍张翼金萍
- 关键词：成人隐匿性自身免疫性糖尿病酶联免疫斑点
- 部分特发性1型糖尿病存在谷氨酸脱羧酶_(65)反应性T细胞被引量：12
- 2007年
- 目的探讨特发性1型糖尿病(1B 型糖尿病)患者是否存在胰岛自身抗原反应性 T 细胞。方法选择经典1型糖尿病(1A 型糖尿病)患者23例,1B 型糖尿病29例,健康对照16例;放射配体法检测胰岛自身抗体;连续密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞;酶联免疫斑点法(ELISPOT)检测谷氨酸脱羧酶(GAD_(65))反应性、分泌γ干扰素(IFN-γ)的 T 细胞(IFN-γ-T 细胞)。结果 (1)IFN-γ-T 细胞数(中位数及95%CI 表示)1A 型糖尿病为:12.0个(10.3～20.9个),1B 型糖尿病:3.5个(3.0～5.7个),对照:1.0个(0.3～1.8个)。1A 型糖尿病的 IFN-γ-T 细胞数明显高于1B 型糖尿病及对照(均 P<0.01)。1B 型糖尿病较对照具有更高频率的 IFN-γ-T 细胞(P<0.05)。(2)以>95%CI(对照组)判为 IFN-γ-T 阳性,1A 型糖尿病、1B 型糖尿病及对照的阳性率分别为:78.3%(18/23)、48.3%(14/29)及0。(3)3组对植物血凝素非特异性刺激的 IFN-γ-T 细胞数差异无统计学意义(P>0.05)。结论部分1B 型糖尿病患者存在 GAD_(65)反应性 IFN-γ-T 细胞,即存在 T 细胞免疫异常,具有与1A 型糖尿病相似的病因及发病机制;诊断1B 型糖尿病前应排除 IFN-γ-T 阳性患者,GAD_(65)-IFN-γ-T 检测有望成为糖尿病分型诊断的新指标。
- 张翼周智广杨琳周海峰林健孙意黄干
- 关键词：谷氨酸脱羧酶T淋巴细胞酶联免疫斑点试验
