国家科技重大专项(2009ZX09103-699)
- 作品数：7 被引量：9H指数：2
- 相关作者：孙二琳韩瑞发范晓东杨雄牛远杰更多>>
- 相关机构：天津医科大学天津市泌尿外科研究所更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组人干扰素α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)药物敏感性分析
- 2012年
- 通过BACTEC MGITTM 960全自动分枝杆菌培养鉴定/药敏仪对重组人干扰素α-2b-卡介苗(hIFN-α-2b-BCG)菌株进行利福平等10种抗菌药物的敏感性试验,以野生BCG作对照观察药物对重组BCG菌株活性的潜在影响.结果发现:重组人干扰素α-2b-卡介苗在系统感染上对喹酮类的氧氟沙星、环丙沙星敏感,对氨基糖苷类药物的庆大霉素和卡那霉素耐药.在抗结核类药物中,除对吡嗪酰胺耐药外,对利福平等其他几种抗生素均敏感.因尿液回收率高,几乎所有的抗菌药物都对膀胱中的菌株有影响.
- 李娜牛瑞芳韩瑞发孙二琳
- 关键词：重组BCG人干扰素Α-2B
- Toll样受体在肿瘤免疫治疗中的研究进展被引量：1
- 2010年
- Toll样受体（TLRs）是近10余年发现的主要在哺乳动物细胞表面进化上高度保守的受体分子家族，通过识别病原相关分子模式（PAMPs），在先天性免疫反应中发挥着关键作用，并且还能够诱导获得性免疫的产生。在某些肿瘤中TLRs的表达发生量的变化，并且许多微生物组分和药物能够通过TLRs信号通路介导肿瘤的免疫治疗。因此，对TLRs的深入研究将为肿瘤免疫治疗提供新的途径。
- 杨雄孙二琳韩瑞发
- 关键词：肿瘤治疗方案免疫疗法
- 重组人干扰素-α-2b—BCG小鼠原位膀胱肿瘤灌注治疗模型的构建被引量：3
- 2010年
- 目的建立适合膀胱内灌注BCG的膀胱癌实验动物模型，观察重组hIFN-α-2b—BCG对其治疗效果。方法利用亚硝酸银化学损伤、MB49细胞移植改进方法，构建C57BL／6原位膀胱肿瘤小鼠模型，进行重组BCG和野生BCG灌注治疗，观察荷瘤小鼠生存率和苏木素-伊红（HE）染色后病理组织学变化，免疫组织化学检测p53。结果p53在荷瘤小鼠膀胱肿瘤表达强阳性。重组BCG和野生BCG各组灌注治疗后各重要器官组织未见肿瘤和结核结节形成。重组BCG灌注治疗组的小鼠平均膀胱重量（140．8±33．2）mg显著低于磷酸盐缓冲液（PBS）对照组的251．6±38．4，与野生型BCG治疗组的150．1±42．1、野生BCG＋IFN治疗组的144．6±39．7比较，差异无统计学意义（P〉0．05），但重组BCG治疗组的小鼠生存率高于野生型BCG治疗组。结论重组BCG小鼠原位膀胱肿瘤灌注治疗模型造模成功、肿瘤浸润迅速，恶性度高。重组hIFN-α-2b—BCG对小鼠体内膀胱肿瘤具有抑制肿瘤生长，影响肿瘤预后。
- 孙二琳韩瑞发范晓东
- 关键词：膀胱肿瘤BCGIFN-Α-2B
- 卡介苗对hPBMC的TLR4表达调节及其免疫活化作用的研究被引量：1
- 2011年
- 目的:了解卡介苗对人外周血单个核细胞(hPB-MC)TLR4的表达调节,以及BCG介导免疫细胞活化效应的新机制。方法:研究BCG对hPBMC的TLR4表达的调节,以及对表达TLR4的淋巴细胞的免疫活化效应,以(hPBMC+PBS)作为空白对照组,应用流式细胞仪对TLR4进行检测,ELISA方法测定BCG刺激组与对照组的IFN-γ和TNF-α的表达。结果:经过BCG刺激后,TLR4表达大大增加(P<0.01),且随时间增加而增强,在72 h时,BCG组的TLR4表达率为(44.73±0.0066)%,而对照组的表达率仅为(1.02±0.0024)%。BCG可以促进淋巴细胞增殖,且这种增强作用也存在一定时间依赖性,在BCG与hPBMC共同孵育24 h、48h和72 h后,BCG组IFN-γ和TNF-α的表达量显著高于对照组(PBS组),差异有统计学意义(P<0.05),且这种增强作用存在一定的时间依赖性。结论:BCG对hPBMC的TLR4表达有正调节作用,并加强表达TLR4的hPBMC的免疫活化作用。
- 孙蕊杨雄孙二琳韩瑞发
- 关键词：卡介苗外周血单个核细胞细胞因子
- 重组hIFN-α-2b-BCG的冻干制备及生物特性的研究
- 2010年
- 目的:研究重组hIFN-α-2b-BCG真空冷冻干燥的制备工艺,研究冻干后生物特性的变化。方法:采用真空冷冻干燥法制备重组BCG(rBCG),筛选最佳工艺参数。平板计数法比较冷冻干前后的活菌数,计算存活率。比较冻干前后rBCG的抗酸染色特征与形态,连续测定OD值,绘制生长曲线,酶联免疫吸附测定(ELISA)IFN-α-2b表达水平。PCR和抗性培养分析冻干后的质粒稳定性。结果:冻干后重组BCG为(6.51±0.33)×106CFU/mL,冻干前为(1.02±0.11)×107CFU/mL,存活率约65%,达到BCG生物免疫治疗所需的活菌标准。冻干前后的菌落形态、生长曲线及抗酸染色特征无明显差异。质粒插入基因稳定率91.7%,丢失率为8.3%。冻干前后分泌IFN-α-2b水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:成功制备了重组hIFN-α-2bBCG冻干制剂,活菌数达到生物免疫治疗标准,其生物学特性和质粒稳定性均可耐受冷冻、低温与真空干燥过程中的不利影响。
- 孙二琳赵杰范晓东韩瑞发
- 重组IFN-α-2b-BCG对人PBMC的TLR4表达调节及其抗肿瘤作用的研究被引量：1
- 2010年
- 目的了解重组卡介苗(BCG)和野生BCG对人外周单核细胞(hPBMC)上TLR的调节差异,揭示hIFN-α-2b对hPBMC上TLR4的表达是否具有协同增强效应,以及BCG介导免疫细胞活化效应的新机制。方法比较研究重组hIFN-α-2b-BCG和野生型BCG,及其上清和等量干扰素对TLR4表达的调节,以及表达TLR4淋巴细胞的肿瘤杀伤效应。以淋巴细胞作为空白对照,应用流式细胞仪对TLR4进行检测,MTT法检测肿瘤细胞杀伤效应。结果证实了重组BCG和野生BCG对hPBMC的TLR4的表达均有正调节及抗肿瘤效应;重组BCG对hPBMC的TLR4表达的调节优于野生BCG(P<0.05);重组BCG上清和外源性等量干扰素对TLR4表达皆有正调节作用,但差别无统计学意义;重组BCG上清与野生BCG上清相比,对hPBMC诱导TLR4表达差别显著(P<0.05);与野生BCG组相比,重组BCG组表达TLR4的hPBMC杀伤肿瘤细胞的效应显著增强(P<0.05)。结论重组BCG的脂多糖和持续分泌的hIFN-α-2b对hPBMC的TLR4表达均有正调节作用,并加强表达TLR4淋巴细胞的细胞介导的抗肿瘤效应。
- 孙二琳王玉叶韩瑞发孙岩
- 重组人干扰素α-2b-卡介苗对膀胱癌MB49细胞的体外作用被引量：3
- 2010年
- 目的探讨重组人干扰素α-2b-卡介苗（hIFN—α-2b—BCG）对膀胱肿瘤细胞的直接效应及其作用机制。方法采用体外实验，将重组hIFN-α-2b—BCG直接作用于小鼠膀胱癌MB-49细胞，荧光染色后，在光镜和电镜下观察细胞的变化。采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）和流式细胞仪（FCM），检测野生型BCG和重组hIFN—α-2b—BCG对MB49细胞的影响。结果重组hIFN-α-2b—BCG与MB49细胞共培养后，光镜下见肿瘤细胞变圆，增殖速度明显减缓，部分细胞脱壁，胞浆呈大量空泡和颗粒状。透射电子显微镜下可见肿瘤细胞表面微绒毛脱落，细胞质坏死，大量空泡，细胞表面有出泡现象。吖啶橙染色后，在荧光显微镜下可见肿瘤细胞聚集成团状的细胞球体，胞突消失，凋亡小体出现。Hoechst33258染色后，可见大量肿瘤细胞呈明亮的蓝色荧光。MTT测定结果显示，随共培养时间延长，重组hIFN—α-2b—BCG可不同程度抑制肿瘤细胞的生长，抑制率高于野生BCG。FCM检测结果显示，24h后野生型BCG诱导凋亡率为10．8％，重组hIFN—α-2b—BCG诱导凋亡率为19．7％；48h后野生型BCG诱导凋亡率为20．9％，重组hIFN—α-2b—BCG诱导凋亡率为46．6％。两者比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。重组hIFN-α-2b—BCG上调MB49细胞MHC—I表达，具有时间依赖性，且上调比例明显高于野生型BCG（P〈0．01）。结论重组hIFN—α-2b—BCG成功诱导肿瘤细胞凋亡，有更高的调节免疫原性、抗肿瘤作用和细胞毒性。
- 孙二琳范晓东韩瑞发牛远杰
- 关键词：膀胱肿瘤重组卡介苗人干扰素Α-2B
