国家自然科学基金(81271137)
- 作品数：12 被引量：73H指数：5
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- SDF-1α/CXCR4轴影响牙周膜干细胞血管内皮向分化的初步研究被引量：5
- 2013年
- 目的:探讨牙周炎时SDF-1α/CXCR4轴对PDLSCs血管内皮向分化的影响。方法:分别从正常和炎症牙周组织分离培养鉴定牙周膜干细胞(H-PDLSCs、P-PDLSCs);Real time PCR检测两种干细胞中基质细胞衍生因子-1α(stromal cell-derived factor-1α,SDF-1α)及趋化因子受体4[chemokine(c-x-c motif)receptor4,CXCR4]的表达;然后用SDF-1α分别对两种干细胞进行诱导(14 d),Real time PCR检测H-PDLSCs和P-PDLSCs中成血管相关基因CD31、VWF mRNA的表达;Matrigel基质胶管腔形成实验观察、比较H-PDLSCs和P-PDLSCs的管腔形成情况及差异。结果:P-PDLSCs较H-PDLSCs高表达CXCR4 mRNA(P<0.05),低表达SDF-1αmRNA(P<0.05);经SDF-1α诱导后,P-PDLSCs中成血管相关基因CD31、VWF mRNA的表达水平均明显高于H-PDLSCs(P<0.05);其管腔形成数量也明显高于H-PDLSCs(P<0.05)。结论:P-PDLSCs中CXCR4 mRNA高表达,对牙周炎症组织环境中的SDF-1α更加敏感,其血管内皮向分化的趋势和能力均增强。
- 褚云娟叶菁李晶王萌王新文陈芳王欣刘玲侠王勤涛
- 关键词：牙周膜干细胞基质细胞衍生因子-1Α趋化因子受体4
- 牙龈上皮屏障及其在牙周炎发生与发展中的作用被引量：3
- 2014年
- 牙周炎是人类口腔中最常见的疾病之一.研究表明,全球范围内成年人牙周炎的患病率超过50％[1].目前普遍认为,牙周炎是由龈下菌斑微生物和宿主防御相互作用导致的一种以牙槽骨破坏、牙齿脱落为主要表现的口腔炎症性疾病.牙龈上皮作为微生物攻击牙周组织的首道屏障,在牙周炎的发生、发展过程中扮演重要角色.下面将从牙龈上皮的物理屏障、化学屏障及免疫屏障作用等几个方面概述牙龈上皮的功能及其在牙周炎发生、发展中的作用.
- 王津津王新文王勤涛
- 关键词：牙龈上皮上皮屏障牙周炎菌斑微生物炎症性疾病人类口腔
- 人牙髓干细胞体外诱导分化为平滑肌细胞的研究被引量：2
- 2017年
- 目的探究人牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSC)向人平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)分化的体外诱导方法。方法体外分离SMC,获取SMC的条件培养液(conditional medium,CM)。通过比较,筛选出SMC体外诱导培养液的最佳配方和浓度。体外诱导DPSC向SMC分化,通过形态学观察以及SMC表面标记物基因和蛋白表达进行检测。结果在含有转换生长因子β-1(transforming growth factorβ-1,TGF-β1)和SMC-CM的SMC体外诱导培养液作用下14 d,DPSC分化为成熟的SMC样细胞。结论 DPSC有潜能分化为成熟的SMC样细胞,为平滑肌组织工程再生种子细胞的选择提供了一种新的、无创伤、无伦理道德问题的细胞来源。
- 王鹏程孙旭郝泽良张蒙唐路
- 关键词：牙髓干细胞平滑肌细胞
- 不同牙周治疗手段对根面结构及牙周膜细胞生长的影响被引量：34
- 2014年
- 目的:观察评价离体条件下不同处理方式对牙周病患牙根面粗糙度及牙周膜细胞(PDLCs)在其表面粘附、增殖的影响。方法:将因重度慢性牙周炎而拔除的前磨牙和磨牙57个随机分为3组(n=19),分别用Gracey刮治器单纯手工刮治、手工刮治结合激光照射、手工刮治结合龈下喷砂的方法处理根面,用扫描电镜(SEM)观察表面形态、原子力显微镜(AFM)观察表面粗糙度后,将hPDLC接种于各组牙根片表面进行培养;分别于接种后1、6、12 h用SEM观察细胞粘附情况;培养后1、3、5 d MTT法检测细胞增殖情况。结果:SEM观察显示:Gracey组表面玷污层较多,存在器械划痕,激光组居中喷砂组最少;AFM观察显示:表面粗糙度以喷砂组最低,激光组最大(P<0.05);牙周膜细胞接种于根面6 h后激光组与喷砂组细胞伸展充分,Gracey组细胞仍呈皱缩状,12 h后3组细胞均充分伸展;细胞接种于根面1、3、5 d后,各组的细胞数量均随培养时间而增加,激光组增殖最明显,喷砂组次之,Gracey组最低,各时间点各组间两两相比P<0.05。结论:与单纯Gracey刮治相比,刮治结合激光照射、喷砂处理更有利于牙周膜细胞在根面的附着和增殖。
- 王萌叶菁李晶褚云娟王欣陈芳刘玲侠王勤涛
- 关键词：牙周炎YAG激光喷砂细胞附着
- 血管内皮生长因子在牙周组织中的表达及其作用被引量：5
- 2014年
- 新生血管有转运炎症细胞至炎症病损处,为炎症组织提供氧和营养,加重炎症的作用。血管内皮生长因子(VEGF)可促进血管内皮细胞增殖,促新生血管发生。新生血管发生可使炎症细胞更容易迁移至炎症部位,为炎症的肉芽组织提供氧和营养物质,从而使炎症反应持续存在。VEGF在慢性牙周炎患者的龈沟液和血清中表达较高,VEGF在血管内皮、间质和炎症细胞中均表达,且在健康牙周以及慢性牙周炎和侵袭性牙周炎中表达升高。在创伤愈合阶段,愈合组织中的VEGF表达上升。在牙周以重建手术术区,VEGF表达增高。在慢性牙周炎的牙龈组织中,低氧诱导因子表达在成纤维样细胞和炎症浸润细胞中明显升高,在低氧诱导因子的介导下,VEGF受体表达上调。白细胞介素-1、6以及地诺前列酮可促进VEGF表达,调节骨的体内动态平衡和骨的发育,骨的形成和再生过程亦与新血管形成密切相关,VEGF亦是其主要的刺激因子。探讨VEGF在成骨及成血管中的作用,发掘其在牙周组织再生应用的可能性,可望为牙周组织再生提供更有力的支持。
- 李晶王勤涛
- 关键词：牙周病牙周组织血管发生血管内皮生长因子
- 正常和炎症来源的人牙周膜干细胞内皮向分化能力的比较被引量：5
- 2014年
- 目的:比较炎症和正常牙周膜组来源的牙周膜干细胞(iPDLSCs和PDLSCs)体外成血管的能力。方法:组织块酶消化法培养iPDLSCs和PDLSCs,并经有限稀释法纯化和干细胞表面标记物检测鉴定后,对其进行成血管诱导,并通过免疫荧光染色、实时定量PCR、Matrigel assay检测其内皮细胞相关标记物的表达水平及毛细血管网形成状况。结果:两种细胞经纯化后均阳性表达干细胞标记物CD90、CD29、CD105、CD146;iPDLSCs比PDLCSs具有更高的克隆形成能力;两种细胞经内皮向诱导培养后其内皮细胞标记物VEGF、vWF、CD31、VE-cadherin mRNA的表达水平均较诱导前明显上调(P<0.05),并且均能在体外形成管腔样结构;iPDLSCs中CD31、VE-cadherin mRNA的表达水平和管腔长度、分支节点数等均明显高于PDLSCs(P<0.05)。结论:正常和炎症来源的人牙周膜干细胞均具有成血管能力,并且炎症来源的成血管能力更高。
- 叶菁张戎褚云娟李晶王萌陈芳王欣刘玲侠王勤涛
- 关键词：牙周膜干细胞分化血管化
- 血管发生在慢性牙周炎发展中的形态学初探被引量：6
- 2014年
- 目的:探讨血管发生在牙周炎症发展中的可能作用。方法:纳入慢性牙周炎患者及牙周组织健康者各15例,分别于翻瓣术和冠延长术中切取牙龈组织,采用SP免疫组化染色观察血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、CD31及基质细胞衍生因子-1(Stromal cell derived factor-1,SDF-1)在慢性牙周炎牙龈组织中的表达情况;在×200镜下选10个视野计算阳性表达CD31的管腔数目作为血管密度(Microvessles Density,MVD);×400镜下选5个视野分别计算阳性表达SDF-1、VEGF的细胞数;组间比较用两样本均数(x珋±s)t检验。结果:慢性牙周炎组牙龈组织中SDF-1、VEGF和MVD的表达量分别为135.42±15.58、83.53±7.00和20.80±1.74,健康对照组分别为64.67±10.26、41.87±5.97和12.26±2.51(组间比较P<0.05)。结论:慢性牙周炎牙龈组织中SDF-1、VEGF和MVD的表达升高,血管发生在牙周炎的进展中可能有促进作用。
- 李晶褚云娟叶菁王萌陈芳王欣刘玲侠王新文王勤涛
- 关键词：慢性牙周炎基质细胞衍生因子-1血管内皮生长因子血管密度
- 细胞外调节蛋白激酶信号通路调控牙周膜干细胞内皮分化的机制研究被引量：1
- 2016年
- 目的 探讨细胞外调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）通路在牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSC）内皮向分化中的作用,为PDLSC分化调控提供实验基础.方法 使用血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）和碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,b-FGF）联合诱导PDLSC向内皮细胞分化（诱导组）,对诱导分化的细胞使用ERK1/2磷酸化阻断剂U0126进行处理（诱导＋U0126组）,同时用二甲基亚砜（dimethylsulfoxide,DMSO）作为对照（诱导＋DMSO组）,空白对照组为未经诱导的PDLSC;蛋白质印迹法检测诱导组0、1、3、6及12h的胞内磷酸化ERK1/2 （p-ERK1/2）表达水平;各组诱导7d后提取细胞RNA,实时荧光定量PCR法检测细胞内CD31、血管内皮钙黏素（vascular endothelial-cadherin,VE-cadherin）和VEGF mRNA的表达情况;各组诱导14d,流式细胞计数法检测CD31＋和VE-cadherin＋细胞比例,基质胶管腔形成实验检测细胞的管腔形成能力.计量资料采用均值±标准差表示,两组间比较采用独立样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析.结果 诱导1、3h后p-ERK1/2与ERK1/2比值分别升高至1.24±0.12、1.03±0.24,均显著高于诱导前（0.58±0.17）（P＜0.01）;实时荧光定量PCR结果显示,诱导＋U0126组CD31、VEGF mRNA相对表达水平分别降至0.09±0.18、0.49±0.17,均显著低于诱导组细胞（P＜0.05）;流式细胞检测结果显示,诱导＋U0126组CD31＋、VE-cadherin＋细胞比值分别降至5.22±0.85、3.56±0.87,均显著低于诱导组细胞（P＜0.05）;基质胶管腔形成实验显示诱导组的分支节点数、管腔数目、管腔长度分别升高至62.3±10.0、145.0±14.8及（32 129.7±4 413.9）像素,而诱导＋U0126组分别下降至7.0±2.7、33.5±6.4及（15 951.0±758.1）像素,均显著低于诱导组（P＜0.05）.结论 PDLSC内皮分化过程受ERK通路正向调控,阻断ERK1/2磷酸化可以抑�
- 朱宏罗兰堃王颖谈珺薛芃王勤涛
- 关键词：牙周膜干细胞细胞外信号调节MAP激酶类
- 碱性成纤维细胞生长因子和血管内皮生长因子对人牙周膜干细胞体外增殖、迁移和黏附的影响被引量：7
- 2013年
- 目的研究碱性成纤维细胞生长因子（basic fibiroblast growth factor，FGF-2）和血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）对体外培养的人牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells，PDLSC）增殖、迁移和黏附能力的影响，探讨两种生长因子促牙周再生的相关机制。方法体外培养人PDLSC，分为A组：2％胎牛血清＋α-最低必需培养基（Or_-minimum essential medium，α-MEM）（对照1组）；B组：20μg／LFGF-2＋A组；C组：10μg／LVEGF＋A组；D组：20μg／LFGF-2＋10μg/LVEGF＋A组；E组：10％胎牛血清＋α—MEM（对照2组）；F组：20μg/LFGF-2＋E组；G组：10μg/LVEGF＋E组；H组：20μg／LFGF-2＋10μg/LVEGF＋E组，按分组要求施加刺激，第1、3、5、7天用可溶性噻唑盐法观察两种生长因子在不同体积分数的胎牛血清中对PDLSC增殖能力的影响；根据增殖实验结果重新分组：对照组：10％胎牛血清＋α-MEM；FGF-2组：20μg/LFGF-2＋对照组；VEGF组：10μg／LVEGF＋对照组；FGF-2＋VEGF组：20μg/LFGF-2＋10μg／LVEGF＋对照组，流式细胞仪、细胞黏附实验、划痕损伤愈合迁移实验观察细胞周期、迁移、黏附能力的变化。结果在2％胎牛血清中，FGF-2和VEGF促增殖效果均不明显；在10％胎牛血清中，刺激第3、5、7天FGF-2组A值（分别为1．224±0．17、2．15±0．19、2．72±0．11）均显著高于对照组（分别为0．76±0．16、1．25±0．06、1．64±0．09）（P〈0．01），但第5、7天A值均显著低于FGF-2＋VEGF组（分别为2．46±0．17、3．18±0．27）（P〈0．05），第5、7天VEGF组A值（分别为1．66±0．05、2．13±0．13）显著高于对照组，但显著低于FGF-2组（P〈0．05）；流式细胞仪结果示VEGF组增殖指数[（34．3±2．0）％]显著低于FGF-2[（46．8±3．2）％]和FGF-2＋VEGF组[（45．0±4．0）％]，但显著高于对照组[（14．5±1．7）％]（P〈0．01）。细胞迁移实
- 张戎张勉李成华王鹏程陈芳王勤涛
- 关键词：血管内皮生长因子类牙周再生牙周膜干细胞
- 脂多糖诱导的内质网应激在牙周膜干细胞中的表达及其对成骨分化的影响被引量：11
- 2015年
- 目的 探讨使用脂多糖模拟炎症微环境下牙周膜干细胞（periodontal ligament stem cells,PDLSC）中内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）的表达差异及对成骨分化的影响,初步证明ERS可以调控炎症微环境下的PDLSC,使其与正常来源的PDLSC相比成骨分化能力产生差异.方法 原代和有限稀释法克隆化培养正常来源的PDLSC,使用ERS激动剂毒胡萝卜素（thapsigargin,TG）观察是否可以诱导PDLSC发生ERS;实时定量PCR检测使用炎性因子脂多糖刺激是否可以诱导PDLSC发生ERS;使用含有成骨诱导培养基的TG和ERS抑制剂4-苯基丁酸（4-phenylbutyrate,4-PBA）刺激PDLSC,实验组分为PDLSC＋ TG组、PDLSC＋脂多糖组及PDLSC＋脂多糖＋4-PBA组,对照组为单纯成骨诱导培养基诱导的PDLSC组,实时定量PCR、茜素红染色及氯化十六烷基吡啶检测其成骨分化能力的差异.结果 炎性因子体外模拟炎症环境可观察到ERS被激活,PDLSC＋TG组6h时PERK、GRP78、ATF4及CHOP mRNA表达量均显著高于PDLSC组（分别为1.49±0.24、2.77±0.60、1.75±0.16、2.16±0.32）,P＜0.05;PDLSC＋脂多糖组PERK、CHOP mRNA表达量均在6h时达峰值（分别为1.76±0.08、2.31±0.17）,且与PDLSC组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）.模拟牙周炎症微环境下的ERS状态可抑制PDLSC的成骨分化,PCR结果显示PDLSC＋ TG组RUNX2、ALP、OCN mRNA表达量为0.73±0.06、0.01 ±0.00、0.20±0.06,均显著低于PDLSC组（P＜0.05）;PDLSC＋脂多糖组RUNX2、ALP、OCN mRNA表达量分别为0.80±0.06、0.48±0.05、0.29±0.04,均显著低于PDLSC组（P＜0.05）;PDLSC＋脂多糖＋4-PBA组RUNX2、ALP、OCN mRNA表达量分别为1.10±0.09、0.74±0.05、0.67±0.13,均显著高于PDLSC＋脂多糖组（P＜0.05）.茜素红染色及氯化十六烷基吡啶定量结果和PCR结果相符.结论 体外使用脂多糖模拟炎症微环境,可具有同ERS激活剂TG相同的作用,刺激PDLSC,使其ERS被激活,进而成骨分化受到抑制;加入E
- 薛芃李蓓谈珺安莹金岩王勤涛
- 关键词：牙周膜干细胞细胞分化内质网应激
