国家教育部博士点基金(20113234110010)
- 作品数：10 被引量：35H指数：3
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- 小鼠ORMDL3表达质粒的构建
- 2015年
- 目的构建小鼠血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因的表达质粒,并在小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3细胞)中检测其过表达效果。方法根据小鼠ORMDL3蛋白的编码序列设计引物,以NIH3T3细胞cDNA为模板,PCR扩增ORMDL3的编码序列,亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)限制性内切酶KpnⅠ和HindⅢ酶切位点之间,并测序鉴定。由脂质体介导将pcDNA3.1(+)和pcDNA3.1-ORMDL3质粒分别瞬时转染NIH3T3细胞中,24h后收取细胞,抽取细胞全蛋白,Western blot检测ORMDL3蛋白的相对表达量。结果成功构建小鼠ORMDL3表达质粒pcDNA3.1-ORMDL3,该质粒瞬时转染至NIH3T3细胞内可有效增加ORMDL3蛋白表达2倍左右(P<0.05)。结论成功构建小鼠ORMDL3表达质粒,为后续小鼠动物模型研究ORMDL3基因的功能及致病机制提供依据。
- 封洁庄丽丽朱亮华邱灵芝周国平
- 关键词：哮喘
- 干扰素调节因子3与巨细胞病毒感染
- 2015年
- 固有免疫系统是人体抵抗病毒入侵的第一道防线，固有免疫系统中的多种效应细胞能快速识别病原体并产生Ⅰ型干扰素（ interferon， IFN）及细胞因子，抑制病毒复制和传播。干扰素调节因子3（interferon regulatory factor 3，IRF3）作为干扰素调节因子家族中的一员，主要负责诱导Ⅰ型IFN、干扰素刺激基因（ interferon-stimulated gene，ISG）和促炎性细胞因子的生成，在固有免疫中发挥了重要的作用。人巨细胞病毒（ human cytomegalovirus，HCMV）属于β疱疹病毒家族亚科，是有包膜的线性双链DNA（ double-stranded，dsDNA）病毒，它的基因组约有250 kb，可以编码超过200个蛋白发挥逃避免疫应答的作用［1］。成人免疫力正常者初次感染HCMV后呈潜伏感染状态并且持续终身，但当免疫力低下如艾滋病或者移植手术后，病毒会大量复制，引起HCMV原发感染。此外， HCMV感染还会导致新生儿的出生缺陷，引起听力下降、脑瘫、小头畸形和智力低下等后遗症。
- 王璐璐周国平
- 关键词：干扰素调节因子3巨细胞病毒感染促炎性细胞因子抑制病毒复制免疫力低下
- 反复喘息患儿外周血血清类黏蛋白1样蛋白3基因表达水平的意义被引量：5
- 2014年
- 目的探讨3岁以下反复喘息患儿外周血血清类黏蛋白1样蛋白3（ORMDL3）基因在不同临床表型中的表达水平及其临床意义。方法选取2010年9月至2012年9月在南京医科大学第一附属医院就诊的3岁以下反复喘息患儿25例，分为非特应性体质的喘息A组（14例）和特应性体质的喘息B组（11例）；健康对照组无任何变应性疾病病史，包括药物及食物过敏、变应性鼻炎、湿疹，共24例，采用反转录PCR法检测外周血ORMDL3基因mRNA表达水平，并分析各组病例临床特点。结果喘息A组和喘息B组ORMDL3基因表达水平高于健康对照组（t=10．29、5．73，P〈0．01），喘息B组ORMDL3基因水平高于喘息A组，差异有统计学意义（t=14．12，P〈0．01）。喘息组中发病率存在性别差异，男〉女；喘息发作存在季节差异，冬季和春季高发。结论ORMDL3基因的表达水平与〈3岁患儿的反复喘息密切相关，在特应性体质患儿更为明显，提示ORMDL3在反复喘息发病机制中起一定作用。
- 金蕊邱灵芝袁文霄庄丽丽胡毓华周国平
- 关键词：反复喘息特应性
- 哮喘易感基因ORMDL3在哮喘小鼠中的表达及地塞米松的干预作用被引量：3
- 2013年
- 目的:探讨哮喘易感基因ORMDL3在支气管哮喘发病时的表达及地塞米松的干预作用。方法:将30只健康清洁级雌性Balb/c小鼠随机分为3组:对照组、哮喘组(卵蛋白致敏)、地塞米松组(卵蛋白致敏,激发前腹腔注射地塞米松1 mg/kg进行干预),每组10只。称量和观察小鼠的体重增长趋势,对小鼠肺组织进行HE染色评价浸润情况,计数3组小鼠的外周血嗜酸性粒细胞,ELISA法检测对比3组小鼠血清白介素4(IL-4)的浓度变化,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测小鼠肺组织ORMDL3 mRNA水平表达。结果:哮喘组小鼠体重增长显著落后于其他两组(P<0.05),地塞米松干预后能缓解生长迟滞,但仍低于对照组(P<0.05)。病理组织学显示哮喘组小鼠肺组织见大量嗜酸性粒细胞浸润,黏膜下层和平滑肌增厚,管腔狭窄,地塞米松组小鼠肺组织改变较哮喘组为轻。哮喘组外周血嗜酸性粒细胞计数显著高于对照组和地塞米松组(P<0.05),地塞米松组计数高于对照组(P<0.05)。哮喘组小鼠的IL-4水平显著高于对照组(P<0.05),经地塞米松干预后IL-4水平显著降低(P<0.05),但仍高于对照组。哮喘组小鼠ORMDL3 mRNA的表达水平较对照组显著升高,地塞米松组小鼠ORMDL3 mRNA水平较哮喘组下降,但未达统计学意义(P>0.05)。结论:卵清蛋白小鼠哮喘模型中ORMDL3的mRNA表达显著增高,地塞米松可下调ORMDL3的表达,但未达到统计学意义,其中的机制有待进一步的深入研究。
- 蒋莉金蕊李悦庄丽丽王全周国平
- 关键词：哮喘地塞米松小鼠
- 急性肾损伤的诊断与治疗进展被引量：18
- 2013年
- 急性肾损伤除继发于肾脏本身的疾病外，也可继发于多器官功能障碍综合征、新生儿呼吸窘迫综合征、脓毒症、胃肠道液体丢失、心脏外科手术及使用。肾毒性的药物或食物等多种其他系统的疾病。近年来，国际上多个学科的专家，对急性肾损伤的定义、诊断分期、治疗和预后等统一认识，有了新的观点，发布了新的指南。另外，用于早期设别急性肾损伤的生物学标志有较多的报道，为了解急性肾损伤的诊疗现状，现通过改善全球肾脏病预后组织2012年3月发布的《急性肾损伤的临床实践指南》和近年有关文献，对急性肾损伤的临床实用知识，尤其是新的观念作一综述。
- 周国平
- 关键词：急性肾损伤生物学标志肾替代疗法
- 全反式维甲酸通过Sp1/Sp3位点调节HEK-293细胞中CD2AP基因的表达
- 2013年
- 目的研究全反式维甲酸(ATRA)对人胚胎肾HEK-293细胞中CD2相关蛋白(CD2AP)基因表达的影响。方法 ATRA作用HEK-293细胞后,采用RT-PCR和Western blot分别检测CD2AP mRNA及其蛋白的表达。将构建的不同Sp1/Sp3位点的定点突变、巢式缺失突变的CD2AP启动子质粒转染HEK-293细胞,检测报告质粒的荧光素酶活性。结果 ATRA明显上调HEK-293细胞中CD2AP mRNA和蛋白水平(P<0.05)。缺失突变及点突变研究显示,Sp1/Sp3-A、C位点在介导ATRA上调CD2AP过程中发挥重要作用。结论 ATRA通过Sp1/Sp3结合位点诱导HEK-293细胞中CD2AP的表达;ATRA对CD2AP基因缺陷肾病患者可能有治疗作用。
- 高珊徐华国金蕊邱灵芝朱亮华蒋莉庄丽丽周国平
- 关键词：全反式维甲酸HEK-293细胞CD2相关蛋白
- Ets-1基因真核表达载体的构建及其对人ORMDL3启动子的影响
- 2014年
- 目的探讨Ets-1基因对人血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)启动子的影响。方法 RT-PCR扩增Ets-1基因,将产物克隆至真核载体pcDNA3.1(+)内,构建含Ets-1基因的重组真核表达质粒pcDNA-Ets-1。重组质粒转染人胚肾HEK-293细胞,Western blot检测Ets-1蛋白表达;双荧光素酶报告基因检测Ets-1过表达后人ORMDL3启动子的活性。结果核酸序列分析及Western blot结果证实,构建含Ets-1基因的重组真核表达质粒pcDNA-Ets-1成功;过表达Ets-1基因能增强人ORMDL3启动子的活性。结论成功构建了含Ets-1基因的重组真核表达质粒。Ets-1基因可促进人ORMDL3启动子的转录活性。
- 邱灵芝金蕊朱亮华庄丽丽封洁周国平
- 关键词：ETS-1支气管哮喘
- 婴儿巨细胞病毒性肝炎36例临床分析被引量：7
- 2015年
- 目的观察婴儿巨细胞病毒(CMV)性肝炎的临床特点及更昔洛韦的治疗效果。方法回顾性分析36例住院CMV肝炎婴儿的临床特点,评价28例应用更昔洛韦治疗疗效及其不良反应。结果 CMV肝炎婴儿均有肝功能异常,表现为血清谷丙转氨酶(94.4%)、谷草转氨酶(91.7%)及γ-谷氨酰转肽酶(52.8%)不同程度的升高,总胆红素多为轻中度升高(30.6%)。部分患儿出现黄疸(25.0%)、肝脏肿大(25.0%)和脾脏肿大(8.3%)。易合并心肌损害(83.3%)、肺炎或支气管炎(38.9%)。更昔洛韦治疗后患儿症状缓解,肝功能指标均有不同程度的下降,不良反应轻。结论婴儿CMV肝炎大部分预后良好;更昔洛韦治疗婴儿CMV肝炎疗效肯定,安全性好。
- 封洁庄丽丽朱亮华邱灵芝周国平
- 关键词：婴儿巨细胞病毒肝炎更昔洛韦
- 丁酸钠对IRF5基因表达的影响
- 2017年
- 目的探讨不同浓度丁酸钠(NaB)对干扰素调节因子5(IRF5)基因表达的影响。方法体外培养人肺腺癌细胞A549和人胚肾细胞HEK293,分别用去离子水(对照组)和浓度为1.0、2.5和5.0mmol/L的NaB处理细胞(实验组),采用双荧光素酶报告基因技术检测IRF5基因启动子活性,采用RT-qPCR及Western blot法检测IRF5基因mRNA及蛋白表达水平。结果与对照组相比,实验组NaB可降低A549细胞及HEK293细胞中IRF5基因启动子活性、抑制A549细胞中IRF5基因mRNA及蛋白的表达(P<0.05或P<0.01)。随着NaB处理浓度的增加,IRF5基因启动子活性、mRNA及蛋白表达均呈下降趋势。结论 NaB对体外IRF5基因表达具有抑制作用。
- 王会丹束进张慧文李楠楠张道奇周国平
- 关键词：丁酸钠
- ORMDL3和Ets-1基因在反复喘息患儿外周血中的表达被引量：2
- 2014年
- 目的研究血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)和E26转录因子1(Ets-1)基因在反复喘息患儿外周血中的表达以及两者的相关性。方法采用RT-PCR法检测非过敏性正常对照婴幼儿(A组,24例)和反复喘息患儿(B组,25例)外周血中ORMDL3和Ets-1mRNA表达水平。结果B组外周血ORMDL3和Ets-1mRNA表达水平高于A组(P<0.05);ORMDL3与Ets-1基因表达水平呈正相关(r=0.7704,P<0.05)。结论 ORMDL3和Ets-1基因的表达水平与患儿的反复喘息密切相关。
- 金蕊邱灵芝袁文霄庄丽丽胡毓华周国平
- 关键词：反复喘息
