云南省重点学科资助项目(XK200906)
- 作品数：1 被引量：7H指数：1
- 相关作者：常玮丁勇刘小烛更多>>
- 相关机构：中国科学院西南林学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金云南省重点学科资助项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 甘蓝型油菜BnClo1基因克隆、表达载体的构建及原核表达被引量：7
- 2010年
- 【目的】克隆甘蓝型油菜(Brassica napus)油体钙蛋白(caleosin)基因BnClo1,并进行原核表达研究。【方法】在获得甘蓝型油菜BnClo1基因全长cDNA的基础上,根据BnClo1基因编码区设计1对特异引物,以甘蓝型油菜种子总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约750bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段克隆到原核表达载体pTYB12中,构建融合表达载体pTYB12-BnClo1,转化到Escherichia coli ER2566(DE3)中进行表达。【结果】测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长768bp,包含完整的开放阅读框738bp,编码245个氨基酸残基,caleosin分子量为28.1kD。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,以20℃、4mmol·L-1IPTG诱导该基因表达效果最好,诱导产物为一个与理论值相符的83.1kD的融合蛋白intein-caleosin。【结论】克隆了油菜BnClo1基因,并在大肠杆菌中进行了优化表达。为进一步纯化和鉴定目的蛋白,及研究其功能奠定了试验基础。
- 丁勇常玮刘小烛
- 关键词：甘蓝型油菜原核表达
