广西壮族自治区科技攻关计划(0322006-3A)
- 作品数：10 被引量：80H指数：5
- 相关作者：庞耀珊谢芝勋邓显文唐小飞刘加波更多>>
- 相关机构：广西兽医研究所更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科技攻关计划国家百千万人才工程更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 应用多重PCR检测鉴别对虾白斑综合征病毒和桃拉病毒被引量：12
- 2005年
- 研究建立了一种可同时检测对虾白斑综合征病毒 (WSSV)和桃拉病毒 (TSV)的多重聚合酶链式反应 (多重PCR)技术。根据 WSSV和 TSV基因序列 ,设计合成了 2对分别与 WSSV和 TSV某段基因序列互补的引物 ,用这 2对引物对同一样品中的 WSSV DNA和 TSV RNA模板进行多重 PCR扩增 ,结果均同时得到了 2条特异的与实验设计相符的 30 6 bp(WSSV)和 2 31bp(TSV)多重 PCR扩增带 ,而对其他对虾病病原的 PCR扩增结果均为阴性 ;敏感性测定结果表明 ,该多重 PCR技术能检出 10 pg的 WSSV DNA和 1pg的 TSV
- 谢芝勋庞耀珊何竞铭邓显文唐小飞刘加波谢志勤廖敏文雪
- 关键词：WSSV对虾白斑综合征病毒虾病多重PCR检测
- 对虾WSSV和IHHNV多重PCR检测试剂盒的研究与应用被引量：7
- 2007年
- 在对虾白斑综合征病毒（WSSV）和传染性皮下和造血器官坏死病毒（IHHNV）二温式PCR检测技术前期研究的基础上，将这2种病原的特异性引物与PCR基础反应液一起组装成快速检测试剂盒。通过对试剂盒敏感性、稳定性和保存期等技术指标的测定以及对临床样品的检测试验，该试剂盒对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板均能特异性地扩增出2条与实验设计相符的593bp（WSSV）和356bp（IHHNV）的DNA片段，而对其它对虾病原的扩增结果均为阴性；该试剂盒最低能检测到102pg的WSSV DNA和10pg的IHHNV DNA。对WSSV和IHHNV DNA的检出量分别为102～103pg和10—102pg。
- 庞耀珊谢芝勋谢志勤唐小飞邓显文刘加波
- 关键词：对虾试剂盒
- WSSV和IHHNV二重实时荧光PCR检测方法的建立被引量：16
- 2009年
- 根据基因库中对虾白斑综合症病毒W SSV(AF369029)和传染性皮下及造血器官坏死病毒IHHNV(AF218226)基因序列,设计了W SSV和IHHNV的两对特异性引物和两条用不同荧光基团标记的TaqM an探针。对反应条件和试剂浓度进行优化,建立了能够同时检测W SSV和IHHNV的二重实时荧光PCR方法。该方法特异性好,对W SSV和IHHNV的检测敏感性分别达到2和20个模板拷贝数;此外抗干扰能力强,对W SSV和IHHNV不同模板浓度进行组合,仍可有效地同时检测这二个病毒。对保存的30份经常规PCR检测仅为W SSV或IHHNV阳性的样品进行二重实时荧光PCR检测,结果都为阳性,其中1份为W SSV和IHHNV混合感染。本研究建立的二重实时荧光PCR方法用于W SSV和IHHNV的检测具有特异、敏感、快速、定量等优点。
- 谢芝勋谢丽基庞耀珊卢兆发谢志勤孙建华邓显文刘加波唐小飞
- 关键词：白斑综合征病毒
- 对虾IHHNV荧光定量PCR检测方法的建立被引量：4
- 2008年
- 根据GenBank中对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)保守基因序列(AF218226),设计合成了1对引物和1条TaqMan探针,建立了检测IHHNV的荧光定量PCR技术。将建立的荧光定量PCR检测方法与常规PCR对比。结果显示,所建立的荧光定量PCR方法灵敏度可达2个拷贝,比常规PCR灵敏度高1000倍。对保存的15份经常规PCR检测为IHHNV阳性的DNA样品进行荧光定量PCR检测,结果都为阳性,检测的病毒含量为2.15×107～4.21×104拷贝/μL。用该方法对不同浓度的样品进行了重复检测,表明该方法具有良好的重复性,可满足IHHNV的临床诊断需要。
- 谢丽基谢芝勋庞耀珊卢兆发谢志勤刘加波邓显文唐小飞
- 关键词：对虾PCR
- 二温式PCR检测对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒的研究被引量：5
- 2007年
- 根据对虾传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因序列,设计了1对可以扩增356 bp IHH-NV某段基因序列的特异性引物,优化建立了能快速检测IHHNV的二温式PCR。特异性试验和敏感性试验结果表明,该技术只对IHHNV DNA模板进行扩增,得到356 bp的DNA扩增片段,而对SPF南美白对虾组织DNA和其它对虾病原DNA/RNA的扩增结果为阴性;该技术最低能检测到10 pg的IHHNV感染对虾组织样品总DNA。应用该技术对400份对虾临床样品进行检测,结果有96份样品呈现阳性,表明该病在我国南方的养殖对虾中广泛存在,二温式PCR技术可以直接用于该病的临床快速检测和流行病学调查。
- 庞耀珊谢芝勋邓显文唐小飞刘加波
- 关键词：聚合酶链式反应对虾
- 二温式多重PCR检测鉴别对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)的研究与应用被引量：19
- 2005年
- 建立了一种同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)的二温式多重PCR技术。根据基因库中WSSV(AF369029)和IHHNV(NC002190)基因序列,设计了两对分别与WSSV和IHHNV某段保守基因序列互补的引物,用这两对引物对同一样品中的WSSV和IHHNV DNA模板进行多重PCR扩增,结果均同时得到了两条大小与实验设计相符的593 bp(WSSV)和356 bp(IHHNV)特异性多重PCR扩增条带,而对其他对虾疾病病原的PCR扩增结果均为阴性;敏感性测定结果表明,该多重PCR技术最低能检测到WSSV和IHHNV DNA各100 pg。用该多重PCR对400份临床病料进行检测,结果230份检出WSSV,阳性率57.5%;96份检出IHHNV,阳性率24%;56份同时检出WSSV和IHHNV,阳性率14%。18份为阴性,阴性率为4.5%。结果提示了WSSV和IHHNV广泛存在于中国南方的养殖对虾中,作者建立的二温式多重PCR可以用于这两种病毒的临床快速检测和鉴别诊断。
- 谢芝勋庞耀珊刘加波邓显文唐小飞
- 关键词：对虾
- 二温式多重PCR检测对虾白斑综合征病毒和桃拉病毒的研究被引量：4
- 2005年
- 对虾白斑综合征(WSS)和桃拉病(TS)是两种严重危害当前对虾养殖业的对虾病毒性疾病.目前对虾病毒病的诊断手段主要包括病理学和生物学方法、免疫学方法、分子杂交方法及PCR方法等[1-4].其中PCR方法是这些方法中特异性最强、敏感最高的病原检测手段,在国外已被广泛应用于对虾病毒病的检测和诊断.多重PCR是一种特殊PCR形式,其最突出特点,即一次PCR反应,就可同时检测、鉴别出多种病原体,在临床混合感染的鉴别诊断上具有其独特优势和很高的实用价值[5,6].
- 谢芝勋庞耀珊邓显文唐小飞刘加波
- 关键词：对虾
- 多重RT-PCR同时检测鉴别三种对虾病毒的研究与应用被引量：20
- 2005年
- 根据基因库中对虾桃拉综合征病毒(TSV)、白斑综合征病毒(WSSV)、传染性皮下和造血器官坏死病毒(I-HHNV)的基因序列,分别设计了三对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时检测鉴别TSV、WSSV和IHHNV的多重RT-PCR。该技术对同一样品中的TSV RNA、WSSV DNA和IHHNV DNA模板进行扩增,结果均同时得到3条大小与实验设计相符的231bp(TSV)、593bp(WSSV)和356bp(IHHNV)的特异性多重RT-PCR扩增带,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性。敏感性试验结果表明,该技术最低能检测到10pg TSV RNA、100pg WSSV DNA和100pg IHHNV DNA。临床检测试验结果表明,该技术对TSV、WSSV和I-HHNV的检出率明显高于传统的临床症状观察和组织病理学检查,提示该技术适用于这三种病毒的临床快速检测和鉴别诊断。
- 谢芝勋庞耀珊邓显文唐小飞刘加波
- 关键词：对虾桃拉综合征病毒白斑综合征病毒
- 二温式多重RT-PCR同时检测鉴别对虾TSV、WSSV和IHHNV的研究与应用
- 本文研究建立了一种同时检测对虾桃拉病毒(TSV)、白斑综合征病毒(WSSV)及传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)的二温式多重RT—PCR技术。根据基因库中TSV、WSSV和IHHNV的基因序列,分别设计了三对特异...
- 谢芝勋庞耀珊邓显文唐小飞刘加波
- 关键词：对虾桃拉病毒白斑综合征病毒
- 文献传递
- 二温式多重RT-PCR快速检测对虾TSV和IHHNV的研究被引量：2
- 2005年
- 分别针对桃拉综合征病毒(TSV)基因、传染性皮下和造血器官坏死病毒(IHHNV)基因,设计了2对特异性引物,通过对多重RT-PCR扩增条件的优化,建立了快速检测TSV和IHHNV的二温式多重RT-PCR技术。特异性和敏感性试验结果表明,该技术只对TSV RNA和IHHNV DNA进行扩增,分别得到1条231bp的TSV特异性cDNA扩增片段和1条356bp的IHHNV特异性DNA扩增片段,对其它对虾病原核酸的扩增结果为阴性,该技术最低能同时检测到10pg的TSV RNA和IHHNV DNA,具有高度的特异性和敏感性。临床应用试验证明,该技术可以用于对虾养殖业中TSV和IHHNV的快速检测和鉴别诊断。
- 庞耀珊谢芝勋唐小飞邓显文刘加波
- 关键词：对虾桃拉综合征病毒
