国家自然科学基金(30570771)
- 作品数：7 被引量：31H指数：3
- 相关作者：赵春华闫曦韩钦杨华高志强更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- MR1 siRNA抑制人肝癌细胞BEL-7402的增殖被引量：5
- 2009年
- 目的研究MR1基因对肝癌细胞增殖的影响及机制。方法化学合成MR1 siRNA,用脂质体lipofectamine2000转染肝癌细胞系BEL-7402细胞,RT-PCR检测MR1 siRNA基因沉默效果。用SRB法、集落形成法和生长曲线法检测MR1 siRNA对BEL-7402细胞增殖的影响。流式细胞术检测BEL-7402细胞周期,用细胞同步化的方法,即与G2期阻滞药物噻氨酯哒唑(nocodazole)联合应用,以间接反映MR1 siRNA对肿瘤细胞周期的影响。Western blot法检测Cyclin D1蛋白。结果(1)300 nmol/LMR1 siRNA处理BEL-7402细胞24 h后,MR1基因的mRNA水平明显降低。(2)经siRNA处理后,BEL-7402细胞存活细胞数明显下降,细胞生长速度明显减慢,集落形成率显著下降,Cyclin D1表达水平明显降低。(3)MR1 siRNA与nocodazole联合处理BEL-7402细胞后,G2期细胞比例显著减少,而G1期细胞明显增多。结论MR1基因与人肝癌BEL-7402细胞增殖相关,抑制MR1表达,能够引起细胞的增殖抑制,其作用机制与诱导细胞的G1期阻滞有关。
- 王金华边春景赵春华
- 关键词：SIRNA细胞周期BEL-7402细胞
- 低氧对间充质干细胞的影响被引量：13
- 2007年
- 氧对于几乎所有的生命都是必需的,它维持能量代谢及细胞的功能,但机体多种细胞是处于生理或病理性低氧状态中,而体外细胞实验一般是在20%氧浓度下进行,并不符合生理状态。直到最近,关于低氧对于间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)的影响有了一系列的研究。体外实验表明,适度低氧下MSC的生长和存活能力更好,氧浓度可以影响MSC向成骨、成软骨、成脂的分化倾向,低氧能提高特异性受体和配体相结合所介导的迁移。低氧可影响胚胎干细胞、造血干细胞、神经干细胞的生理学特性也是一证据。干细胞对缺氧反应的分子机制主要涉及低氧诱导因子-1(hypoxic inducible factor-1,HIF-1)信号通路。本文综述了低氧对MSC的存活、增殖、分化和迁移的影响,以及涉及HIF-1等的分子机制。
- 何觅春李静赵春华
- 关键词：低氧间充质干细胞细胞增殖细胞分化细胞迁移
- 肿瘤坏死因子α对骨髓瘤患者骨髓间充质干细胞TAZ表达和成骨潜能的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨肿瘤坏死因子α（TNF-α）、具有PDZ结合域的转录共刺激因子TAZ和骨髓瘤骨病的关系。方法分离培养多发性骨髓瘤（MM）患者和正常人的骨髓间充质干细胞（MSCs），鉴定其生物学特性；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测MM患者和正常人骨髓血清中TNF-α的浓度。MM患者骨髓CD138^＋细胞与正常人MSCs行Transwell成骨共培养后，采用实时定量PCR检测MSCs成骨指标和TAZ mRNA表达量，von Kossa染色法鉴定钙质沉积度。采用实时定量PCR和Western blot检测MSCs中TAZ mRNA和蛋白质的表达量。结果MM患者的MSCs成骨潜能和TAZ表达量较正常人降低。MM患者骨髓血清中的TNF-α浓度为（355.4±49.1）pg／ml，正常人为（92.3±17.2）pg／ml。CD138^＋骨髓瘤细胞可以抑制正常人MSCs向成骨细胞分化，TNF-α单克隆抗体可以部分逆转此抑制效应。随着培养体系中TNF-α（0、0.1、1、10ng／mL）浓度梯度增加，MSCs中TAZ表达量逐渐降低。结论MM患者的骨髓MSCs成骨潜能较正常人明显降低。骨髓瘤细胞可能是通过TNF-α抑制TAZ的表达，抑制MSCs的成骨作用。
- 李炳宗史明霞李静马杰陈磊陈斌赵春华
- 关键词：多发性骨髓瘤成骨TAZ
- 人脂肪源性间充质干细胞向内耳毛细胞定向诱导分化的实验研究被引量：9
- 2009年
- 目的验证在体外将人脂肪源性问充质干细胞（human adipose—derived mesenchymal stem cells，hAD-MSC）定向分化为内耳毛细胞的可行性。方法用特定的培养体系配合多种细胞因子定向诱导hAD—MSC向神经干／祖细胞样细胞分化，而后进一步将诱导后细胞与发育期鸡胚听泡细胞在体外进行共培养，以促使其向内耳毛细胞分化，通过免疫组化等方法对分化不同阶段的细胞特异性指标进行鉴定。结果hAD—MSC诱导后呈现神经干／祖细胞样的形态并表达其特异性标志，与发育期鸡胚听泡细胞共培养后表达内耳毛细胞特异性标志。结论hAD—MSC在体外可定向诱导分化为具有内耳毛细胞特异性标志的毛细胞样细胞。
- 袁先道闫曦杨华高志强李康华韩钦卢姗陈晓巍姜鸿赵春华
- 关键词：间质干细胞内耳毛细胞
- 人脂肪来源间充质干细胞植入受损耳蜗后定向归巢并分化为毛细胞样细胞被引量：1
- 2010年
- 目的:通过将人脂肪来源间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hAD-MSCs)移植到受损小鼠,探讨hAD-MSCs替代缺失/受损毛细胞的可行性。方法:将hAD-MSCs经尾静脉移植入药物致聋后的小鼠体内,用免疫染色及RT-PCR等方法检测移植后hAD-MSCs在耳蜗内的归巢和分化。结果:移植的hAD-MSCs能够定向归巢到受损耳蜗内,并至少存活2周,未观察到对移植细胞的免疫排斥反应。有少量细胞定位于耳蜗感觉上皮并表达毛细胞特异性抗体myosin 7a。结论:hAD-MSCs移植入药物性致聋小鼠后,能够定向归巢到耳蜗内,并分化为内耳毛细胞样细胞,是一种针对内耳损伤及退变性疾病治疗的潜在细胞来源。
- 袁先道闫曦杨华高志强李康华韩钦卢姗陈晓巍亓放姜鸿赵春华
- 关键词：耳蜗间充质干细胞耳聋异种移植
- Sca1^+间充质干细胞支持造血干细胞向树突细胞分化被引量：1
- 2009年
- 目的研究Sca1+间充质干细胞对HSC向树突细胞(DC)分化的支持作用,并对获得的DC进行形态、表面标志以及功能的鉴定。方法取健康Balb/c小鼠骨髓,通过MACS系统分离、纯化CD117+造血干细胞;以小鼠Sca1+间充质干细胞做饲养层,诱导CD117+造血干细胞定向分化为树突细胞,显微镜观测形态、流式细胞仪检测表面标志,并通过激光共聚焦显微镜和动物实验检测诱生细胞的功能。结果培养第10天诱生的DC细胞表面树突较短小,呈毛刺状,高表达CD11b,低表达Ia,对外源颗粒具有吞噬功能,在动物器官移植实验中具有免疫抑制功能。结论Sca1+间充质干细胞对CD117+HSC向DC分化具有支持作用。
- 陈媛刘星霞赵春华
- 关键词：造血干细胞树突细胞定向分化
- 成骨诱导或干扰素γ预处理对胎儿骨髓源Flk-1^+间充质干细胞免疫活性的调节被引量：1
- 2008年
- 背景:骨髓间充质干细胞在修复异基因组织最终分化为特定细胞后,理论上会因MHC及共刺激分子上调而引起组织排斥,但实际上并没有发生排斥反应。推测骨髓间充质干细胞在异基因组织分化诱导及炎性因子微环境作用下,有可能分化成一种仍具有免疫调节活性的终末细胞,不被机体的免疫识别系统清除掉。目的:在体外运用成骨诱导及干扰素γ预处理来模拟体内组织分化及炎性因子微环境,观察在此作用下胎儿骨髓源Flk-1+间充质干细胞是否能够保持其在自然条件下所呈现的免疫学活性。设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-09/2008-05在北京协和医学院基础学院完成。材料:2例骨髓样品取自流产胎儿,由北京回龙冠妇产医院提供。外周血样品取自15~35岁健康志愿者,由北京三○七医院提供。地塞米松等诱导因子和干扰素γ为美国Sigma公司产品。方法:Ficoll法分离胎儿骨髓单个核细胞,取白环层以上细胞,以1×106/cm2密度接种,贴壁法纯化,采用阴性分选法去除CD45+、GlyA+和CD34+细胞,分离扩增得到Flk-1+骨髓间充质干细胞。以淋巴细胞分离液梯度离心分离外周血单个核细胞,用于混合淋巴细胞培养实验及有丝分裂原刺激的淋巴细胞增殖实验。主要观察指标:流式细胞仪鉴定细胞表型,用成骨、成脂、成软骨和成内皮诱导液检测其分化潜能,成骨诱导或干扰素γ预处理后细胞表面抗原表达、对淋巴细胞增殖及活化抗原CD69、CD25表达的影响,对白细胞介素10和转化生长因子β分泌水平的影响。结果:光镜下骨髓来源的间充质干细胞为成纤维细胞样贴壁生长,均高表达Flk-1,同时高表达黏附分子CD29、CD44、CD105,造血细胞标志CD34、CD45呈阴性;可向成骨、成脂肪、成软骨和成内皮方向分化;低表达MHC-Ⅰ类分子,不表达MHC-Ⅱ类分子,成骨诱导能上调MHC-Ⅰ表达,干扰素γ预处理可上调MH
- 张斌刘瑞朱希山豆晓伟刘星霞陈媛赵春华
- 关键词：成骨干扰素Γ免疫调节活性
