重庆市卫生局医学科研项目(2010-2-130)
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 相关作者：吴传新刘杞杨超孙航郭晖更多>>
- 相关机构：重庆医科大学附属第二医院重庆医科大学更多>>
- 发文基金：重庆市卫生局医学科研项目重庆市自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 晚期糖基化终末产物受体及其配体的肿瘤生物学效应被引量：4
- 2012年
- 晚期糖基化终末产物受体（RAGE）作为信号传导受体介导晚期糖基化终末产物（AGE）、高迁移率族蛋白B1（HMGBl）、钙粒蛋白（S100）、B粉样肽（A）等配体在细胞表面结合，激活细胞内多种信号传导机制，参与了糖尿病慢性并发症、炎症反应、神经再生、Alzheimer病、透析相关性淀粉样变（DRA）、
- 冯华国鲁灵吴传新
- ALR基因RNA干扰慢病毒表达载体的构建及其在肝癌细胞中对ALR表达的抑制
- 2014年
- 目的:构建肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration,ALR)基因RNA干扰(RNA interference,RNAi)慢病毒载体,并检测其对人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因表达的干扰效率。方法:针对ALR基因RNAi的有效靶序列,合成靶序列的OligoDNA,退火形成双链DNA,与经HpaⅠ和XhoⅠ双酶切线性化的GV118慢病毒载体连接产生LV-ALR-shRNA重组慢病毒载体,经转化感受态细胞后筛选出阳性克隆,并进行测序鉴定。用293T细胞包装产生慢病毒,逐孔稀释法测定病毒滴度。再将包装浓缩后的慢病毒转染人肝癌细胞株HepG2和QGY,应用Real-time PCR和Western blot方法检测HepG2和QGY细胞中ALR基因mRNA和蛋白的表达情况。结果:酶切鉴定证实成功构建了针对人ALR基因的RNAi慢病毒载体,包装并浓缩慢病毒,病毒滴度为8E+8TU/ml。将病毒感染人肝癌细胞株HepG2和QGY后,2种细胞的干扰组ALR的mRNA表达水平较阴性对照组及空白对照组均明显下降(HepG2细胞,P干扰组vs.阴性病毒对照组=0.004,P干扰组vs.空白对照组=0.001;QGY细胞,P干扰组vs.阴性病毒对照组=0.005,P干扰组vs.空白对照组=0.001),同样,干扰组ALR在蛋白水平的表达也明显减降低。结论:成功构建ALR基因RNAi慢病毒载体,该载体能有效干扰人肝癌细胞株HepG2和QGY中ALR基因的表达。
- 郭虹利刘杞郭晖杨超孙航吴传新
- 关键词：RNA干扰慢病毒载体
