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猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶缺失株的构建被引量：4: 2009年; 【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS2)为一种重要的人兽共患病病原,次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)为SS2新近鉴定的一个蛋白,本文旨在体外构建基因缺失株明确IMPDH与SS2致病力的相关性。【方法】选用自杀性质粒,通过体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,电转化进入SS2,经同源重组,获得impdh基因缺失株。通过接种不同敏感动物,明确缺失株致病力的变化。【结果】经过PCR鉴定,impdh基因被氯霉素(cat)选择标记基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,IMPDH单抗没有检测到相应的IMPDH蛋白。SS2-H(△IMPDH)对6种糖的发酵能力降低、生长速度减慢、产酸减少一个pH滴度和对本动物和试验动物的致病力减低。SS2-H(△IMPDH))对于Balb/c小鼠LD50是8.3×108CFU,而SS2-H的LD50是3.36×108CFU;对新西兰家兔只引发体温升高(高于正常体温至少1℃),不致死;对于断奶仔猪,只表现临床症状,但不引起死亡。【结论】本研究成功获得IMPDH缺失株,即SS2-H(△IMPDH),并且明确IMPDH的缺失导致了SS2对仔猪、家兔和Balb/c小鼠的致病力降低。; 张雪寒何孔旺周俊明俞正玉倪艳秀陆承平; 关键词：猪链球菌2型 IMPDH 致病力

猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶缺失株的构建: 为探讨猪链球菌2型(Streptococcus suis type2,SS)次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)的生物学特性及其致病的相关性,选用自杀性质粒,通过同源重组成功构建具有氯霉素基因缺失株IMPDHm。PCR鉴定...; 张雪寒何孔旺刘亚彬周俊明俞正玉倪艳秀吕立新陆承平; 关键词：猪链球菌2型 IMPDH; 文献传递

猪链球菌2型IMPDH基因功能结构域的研究: 2009年; 在猪链球菌毒力相关基因orf2和mrp之间发现一个新的开放阅读框,经酶活性染色试验证实该阅读框编码的蛋白具有次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)活性,该阅读框共计957 bp,编码319个氨基酸。经Interpro和PHD软件分析,推测该蛋白的功能结构域存在于9~798 bp基因片段所编码的多肽中,特对这790个碱基依次缺失,以找寻酶的催化部位和底物结合部位。4个缺失基因和全长基因经过基因克隆,表达出5种相应的蛋白。免疫印迹证实这5种蛋白可被猪链球菌2型(SS2)的抗血清识别,且其中的4种蛋白含有IMPDH单抗(1A8)识别表位;通过活性染色,初步确定了SS2中IMDPH的催化部位和底物结合部位。; 刘亚彬何孔旺何孔旺倪艳秀周俊明张雪寒; 关键词：猪链球菌2型结构域活性染色

猪链球菌2型次黄嘌呤核苷酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其识别表位分析被引量：2: 2008年; 用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2和2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPDH的单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。4株腹水型单克隆抗体间接ELISA效价分别为100×211、100×211、100×210和100×28。经Western-blot分析表明,4株单抗与硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白均具有特异性反应,并且通过4种IMPDH全基因分片段缺失表达的融合蛋白,分析了4株单抗所识别抗原决定簇的差异性,发现1A8、1F2、2D2识别表位的编码基因集中在IMPDH基因片段的627bp^790bp之间,2D12识别表位的编码基因则集中在IMPDH基因片段的411bp^790bp之间。猪链球菌2型中IMPDH单克隆抗体的获得及相应表位分析为研究IMPDH蛋白的生物学活性及免疫学活性奠定了基础。; 周俊明何孔旺张雪寒倪艳秀陆承平; 关键词：猪链球菌2型 IMPDH 单克隆抗体表位

次黄嘌呤核苷酸脱氢酶(IMPDH)基因在猪链球菌不同血清型中的分布: 2008年; 参照GenBank上已发表的次黄嘌呤核甘酸脱氢酶（IMPDH）基因序列，设计引物，对34个猪链球菌不同血清型（缺12型）国际标准株进行了IMPDH基因的PCR检测及序列分析。结果表明：除17型、24型、32型、33型和34型外，其他29个血清型都为阳性，其核苷酸序列的同源性为88．3％～100．0％，所推导的蛋白质序列的同源性为94．7％～100．0％。为进一步研究IMPDH的生物学特性和功能奠定了基础。; 倪艳秀周俊明张雪寒温立斌吕立新郭容利俞正玉茅爱华何孔旺陆承平; 关键词：猪链球菌

猪链球菌2型IMPDH单克隆抗体的制备及其识别表位分析: 用纯化的硫氧还蛋白-IMPDH融合蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,对杂交瘤细胞及时筛选,阳性孔经4次有限稀释法克隆,成功获得1A8、1F2、2D2、2D12共4株能稳定传代并分泌抗IMPD...; 周俊明何孔旺张雪寒倪艳秀陆承平; 关键词：猪链球菌2型 IMPDH 单克隆抗体表位; 文献传递

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江苏省自然科学基金(BK2007124)