国家自然科学基金(30871090)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 人IL-3基因原核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 目的:构建人IL-3基因原核表达载体pET32a-IL-3,并在大肠杆菌中诱导表达。方法:通过佛波酯(TPA)和植物球血凝素(PHA)刺激人T淋巴细胞系Jurkat细胞,增加IL-3mRNA表达水平,提取mRNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)获得cDNA,以Jurkat细胞cDNA为模板,通过PCR方法扩增得到人IL-3基因,将其克隆入原核表达载体pET32a(+)中,将重组质粒转化入大肠杆菌宿主菌株BL21中,以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,并通过改变IPTG浓度,诱导时间,诱导温度等条件最终实现蛋白的可溶性表达。表达产物用SDS-PAGE检测表达情况。结果:酶切鉴定和测序结果证明成功构建了原核表达载体pET32a-IL-3。SDS-PAGE检测结果证明实现了人IL-3基因在大肠杆菌中的可溶性表达。结论:成功构建了人IL-3基因的原核表达载体并在大肠杆菌中获得了良好的表达。
- 严学倩尹郸丹付伟韩骅梁英民
- 关键词：白细胞介素3造血干细胞原核表达
- 供者外周血干细胞动员采集198例临床分析被引量：1
- 2011年
- 目的研究外周血造血干细胞移植（PBSCT）供者外周血干细胞动员采集的方法及其效果。方法198名健康供者每天皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）（5—10）ug／kg进行外周血干细胞动员，第5天开始采集。采用血细胞分析仪行单个核细胞（MNC）计数，流式细胞术（FCM）行CD34＋细胞计数。分析供者性别、身高、年龄、采集当天外周血白细胞（WBC）计数对动员采集效果的影响。结果所有供者均成功动员采集，采集当天的MNC计数平均为（4．19±1．96）×10^8／kg，CD34＋细胞计数平均为（2．98±1．40）×10^6／kg；MNC和CD34＋细胞计数与供者性别、身高、年龄无关；采集当天外周血WBC计数与MNC、CD五细胞计数呈正相关（r=0．9201，P=0．0035；r=0．8420，P=0．0149）；采集当天外周血WBC计数≥20．0×10^9／L的供者比〈20．0×10^9／L的供者采集效果更显著（F=4．688，P=0．0013；F=4．622，P=0．0006）。结论rhG-CSF动员的健康供者采集当天外周血WBC计数是一项预测CD34＋胞采集数量的简单、可行的指标。
- 黄斯勇刘利郝淼旺何华谷真陈任安秦炜炜伍艳兰李国辉尹郸丹梁英民
- 关键词：造血干细胞移植造血干细胞动员
- 人Delta-like4^(ext)-26-217蛋白原核表达载体的构建及表达
- 2011年
- 构建人Delta-like4ext-26-217原核表达载体并表达。采用PCR方法扩增hD ll4ext-26-217多核苷酸序列,克隆入pMD18T载体。测序正确后,将其亚克隆入pET32 a(+)原核表达载体,获得pET32 a(+)-hD ll4ext-26-217载体。以该载体转化E.coli菌株BL21,IPTG诱导其表达。采用SDS-PAGE、W estern B lot方法鉴定目的蛋白的表达。结果表明,采用SDS-PAGE,W estern B lot等方法均可检测到目的蛋白TRX/hD ll4ext-26-217,分子量约42.2 KD。主要以包涵体形式大量存在。以上结果为Detla-like4功能的进一步研究奠定了基础。
- 黄斯勇伍艳兰刘利李国辉尹郸丹何飞张萍韩骅梁英民
- 关键词：NOTCH信号途径原核表达血管发生
