上海农业遗传育种重点实验室
- 作品数：62 被引量：126H指数：6
- 相关机构：上海市农业科学院上海海洋大学四川农业大学更多>>
- 发文基金：上海市科技兴农推广项目国家科技重大专项上海市农科院青年科技发展基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 猪精液5mL大管冷冻方法的初步研究被引量：6
- 2009年
- 以5 mL大管解冻后的精子活力、质膜完整率、顶体完整率以及人工授精结果为判定指标,筛选冷冻液Ⅰ和冷冻液Ⅱ中N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-Acetyl-D-Glucosamine,N-AcGA)、甘油和卵黄的适宜浓度,寻找适宜的平衡时间和冷冻高度。结果显示:(1)在冷冻液Ⅰ中添加0.1%的N-AcGA,解冻后精子的活力和顶体完整率最高,分别为50.00%和56.60%;(2)冷冻液Ⅱ中以4%的甘油浓度最好,解冻后精子的活力、弯尾率和顶体完整率可分别达52.50%、52.08%和77.67%;(3)冷冻液中的卵黄终浓度以10%效果最佳;(4)在4℃中平衡2 h,冻后顶体完整率比对照组(0 h)有显著提高(P<0.05);(5)在冷冻高度方面,距液氮面1 cm处冷冻对精子活力和顶体完整性都有明显的保护作用;(6)在人工授精方面,5 mL大管冷冻精液平均获得了超过80%的受胎率。
- 殷方芝戴建军吴华莉吴彩凤张廷宇张德福
- 关键词：精液冷冻人工授精
- ORF3蛋白促进猪流行性腹泻病毒在Vero细胞上的增殖被引量：6
- 2018年
- 【背景】猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)感染猪而引起的一种急性肠道传染病,常导致病猪水样腹泻、呕吐、脱水。自2010年起,其大规模的暴发给养猪业造成巨大的经济损失。由于对PEDV免疫机理及侵入机制知之甚少,至今仍缺乏有效的PED防治措施。【目的】研究orf3对PEDV体外增殖的影响。【方法】利用基于RNA同源重组的PEDV反向遗传学操作技术拯救一系列携带不同orf3基因及orf3基因缺失的重组PEDV;将获得的重组PEDV以MOI 0.1感染Vero细胞,分别于感染的第8、16、24、32、40、48 h测定其TCID_(50)并绘制病毒生长曲线;分别在感染25 h和36 h利用全自动细胞计数分析仪对6孔板内的细胞进行计数,并于感染后的第12、24、36、48 h用CCK-8试剂盒对其细胞活力进行测定。【结果】RT-PCR结果及细胞病变观察证明成功拯救到了携带不同orf3基因或orf3基因缺失的重组PEDV;进一步的免疫组化分析结果证实PEDV的ORF3蛋白可以在Vero细胞中合成。SPSS软件分析表明携带orf3基因的重组PEDV的滴度(TCID_(50))显著高于缺失orf3基因的重组PEDV的滴度;带有orf3基因的重组PEDV感染Vero细胞25 h和36 h时的活细胞数显著高于缺失orf3基因的重组病毒感染相同时间时的活细胞数;而且重组PEDV感染Vero细胞24 h后,带有orf3基因的重组PEDV的细胞活性显著高于缺失orf3基因的重组病毒。【结论】ORF3蛋白对于PEDV在Vero细胞中的增殖具有促进作用,该作用是通过延缓或减少感染细胞的死亡实现的。本研究为揭示PEDV orf3基因的功能和PEDV复制机制的研究提供理论基础。
- 胡晓霞于瑞嵩司伏生司伏生董世娟陈冰清李震
- 关键词：ORF3猪流行性腹泻病毒体外增殖
- 纳米化红景天多糖对猪精液冷冻效果的影响
- 在冷冻稀释液基础上分别添加体积分数为1％、5％、10％、15％、20％的纳米化红景天多糖(Nonomaterials Rhodiola Sachalin ensis Polysaccaride,NRSP)溶液,以添加6m...
- 韩晓张德福戴建军张树山张廷宇吴彩凤顾晓龙李翔徐利李芳芳
- 蛋白质组学技术研究家畜精子蛋白和精浆蛋白进展
- 蛋白质组学手段与基因组学、生物信息学等学科的交叉,呈现出系统生物学(System Biology)研究模式,已成为生命科学领域中进行深入机理性探索研究的主要手段之一。本文就蛋白质组学技术在家畜精子蛋白和精浆蛋白研究进展作...
- 张树山张德福戴建军吴彩凤张廷宇
- 关键词：蛋白质组学精子蛋白精浆蛋白
- 文献传递
- 五种糖类对犬精液冷冻保存效果的研究被引量：4
- 2020年
- 选取8只身体健康、性欲旺盛的比格公犬,采集其精液,对鲜精进行质量检测,主要包括颜色、射精量、精子活率、活力和pH。选取精子活率达到70%以上犬精液用于后续精液冷冻试验。分别将含有葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖和海藻糖的精液稀释液与精液按照1∶2的比例进行稀释。经冷冻解冻后,进行活率、活力、质膜完整性和顶体完整性的精子质量检测。通过对新鲜精液进行品质检测,结果显示5只合格用犬的平均射精量为2.85 mL,密度为2.01×10~8个/mL,pH为6.56。含有果糖的冷冻稀释液中精子活率和活力最高,分别达59.90%和54.00%;其次是添加葡萄糖和乳糖的稀释液中活率较高,分别为59.21%和56.73%,且两组稀释液中精子解冻后活力均为52.00%。进一步评估精子解冻后质膜完整率,结果显示葡萄糖和果糖组显著高于其他组,分别达48.73%和49.52%;而蔗糖添加组精子质膜完整率最低,为42.21%。稀释液中添加果糖的精子解冻后顶体完整率显著高于其他组,而添加蔗糖组顶体完整率最低。在比格犬的精液冷冻保存中,添加果糖的冷冻稀释液能显著提高精子的活率和活力,从而达到提高冻精质量的效果。
- 孙玲伟戴建军吴彩凤张树山张德福
- 关键词：冷冻冷冻保护剂糖类
- 3种冷冻方法对猪MⅡ期卵母细胞冻后微丝分布和脂肪颗粒变化的影响
- 引言/目的 猪卵母细胞的冷冻保存是一个世界性的难题,迄今为止,仍没有猪卵母细胞经超低温冷冻获得存活后代.猪卵母细胞已经证实对低温极其敏感,且已经证实,当卵母细胞处于15℃或以下一小段时间,其基本丧失存活能力.普遍认为猪卵...
- 吴彩凤戴建军张德福张树山
- 应用生物技术保存地方猪种种质资源研究被引量：5
- 2008年
- 我国地方猪种资源十分丰富,拥有许多突出特性的品种,受到国内外养猪业者的重视。由于种种原因,有些猪种濒临绝种。生物技术的发展给地方猪种种质资源长期保存带来了希望。结合课题组近年来来的相关工作,概述了我国地方猪种资源概况及保种的迫切性,冷冻保种研究现状及地方猪种种质资源长期保存的主要技术,包括猪种配子和胚胎冷冻技术、基因组DNA库、猪体细胞克隆技术及其在长期保存种的作用。
- 张德福戴建军吴彩凤杨山亭王磊殷方芝
- 关键词：地方猪种
- 与猪流行性腹泻病毒M蛋白互作的宿主蛋白的鉴定被引量：3
- 2019年
- 【背景】猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)膜蛋白(M)在病毒粒子的组装、膜融合和病毒复制等方面具有重要的作用,但M蛋白与宿主细胞的互作机制尚不清楚。【目的】利用免疫沉淀技术和液质联用技术筛选细胞内与PEDVM蛋白相互作用的蛋白,为揭示M蛋白在病毒增殖过程中发挥的功能提供研究基础。【方法】将MOI=0.1的PEDV DR13疫苗株接种于长成单层的Vero细胞,感染36 h后,收集细胞并进行裂解。利用抗M的单克隆抗体沉淀与M相互作用蛋白复合物,通过液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)进行鉴定并利用细胞功能富集分析(Gene ontology,GO)对感染组鉴定到的细胞蛋白进行分析,确定两个细胞内源性蛋白为候选蛋白,进行免疫共沉淀(Co-IP)验证和共定位分析。【结果】基于鉴定蛋白的肽段数的方法分析显示,感染组与对照组相比,鉴定了218个与M蛋白相互作用的细胞内源性蛋白,分别与蛋白质合成、代谢、细胞信号通路转导等密切相关,选择细胞分裂周期蛋白42 (Cell division cycle 42,CDC42)、真核翻译起始因子3亚基L蛋白(eIF3L)为候选蛋白进行Co-IP(Co-immunoprecipitation)验证和共定位分析,结果证实CDC42、eIF3L蛋白分别与M蛋白在细胞内存在相互作用。【结论】鉴定出PEDV M蛋白能够与宿主细胞CDC42和eIF3L蛋白相互作用,并鉴定出其他可能与M蛋白发生相互作用的宿主蛋白60个,为开展PEDV与宿主细胞蛋白相互作用研究提供了重要理论依据。
- 王瑞阳于瑞嵩陈冰清陈冰清谢春芳司伏生谢春芳李震
- 关键词：免疫共沉淀猪流行性腹泻病毒CDC42膜蛋白
- 纳米化红景天多糖对猪精液冷冻效果的影响被引量：7
- 2013年
- 在冷冻稀释液中分别添加分数为1%、5%、10%、15%、20%的纳米化红景天多糖(Nonomaterials rhodiola sachalin ensis polysaccaride,NRSP)溶液,以添加6mg/L红景天多糖(Rhodiola sachalin ensis polysaccaride,RSP)为对照组,不添加RSP为空白组,检测其对猪冷冻精子活力、顶体完整率、质膜完整率等生理结构指标,以及精子抗氧化能力的影响。结果表明,添加体积分数为15%NRSP组的精子活力(0.69)、顶体完整率(51.42%)、质膜完整率(25.95%)均高于其他组,并显著高于空白组(P<0.05)。此外添加15%NRSP组的解冻后直线运动精子百分比(46.33%)要显著高于其他各组(P<0.05);添加6mg/L RSP组丙二醛(MDA)浓度最低(10.83±0.39)μmol/L,并且显著低于空白组(31.85±1.36)μmol/L,(P<0.05),但与15%的NRSP组(11.60±0.42)μmol/L无显著差异(P>0.05)。添加20%的RNSP组超氧化物歧化酶(SOD)活力最高(343.05±19.64)μ/mgprot,显著高于其他添加组(P<0.05)。精子活力、顶体完整率、质膜完整率之间存在显著的正相关关系(P<0.05),而精子活力和顶体完整性与MDA浓度呈显著负相关(P<0.05),与SOD活力呈显著正相关(P<0.05),质膜完整率与两者含量相关性不显著(P>0.05)。
- 韩晓戴建军张树山张廷宇吴彩凤顾晓龙李翔徐利李芳芳张德福
- 关键词：红景天多糖纳米化猪精液冷冻保存
- B细胞表位作图研究进展被引量：4
- 2017年
- 抗原-抗体的特异性结合是由抗体表面的抗原决定簇与抗原表面的表位基序间的特异性互补识别决定的。B细胞表位作图既包括B细胞抗原表位基序的鉴定(即确定抗原分子上被B细胞表面受体或抗体特异性识别并结合的氨基酸基序),也包括绘制抗原蛋白的全部或接近全部的B细胞表位基序在其一级或高级结构上的分布图谱的过程。B细胞表位作图是研发表位疫苗、治疗性表位抗体药物和建立疾病免疫诊断方法的重要前提。目前,已经建立了多种B细胞表位鉴定或绘制抗原蛋白B细胞表位图谱的实验方法。基于抗原-单抗复合物晶体结构的X-射线晶体学分析的B细胞表位作图和基于抗原蛋白或抗原片段的突变体库筛选技术的B细胞表位作图可以在氨基酸水平,甚至原子水平上揭示抗原分子上与单抗特异性结合的关键基序;其它B细胞表位作图方法(如基于ELISA的肽库筛选技术)常常只能获得包含B细胞表位的抗原性肽段,因而,很少用于最小表位基序的鉴定;而改良的生物合成肽法多用于B细胞表位的最小基序鉴定和精细作图。鉴于每种B细胞作图方法都存在各自的优势与不足,B细胞表位作图往往需要多种作图方法的有机结合。本文对目前常用的B细胞表位作图的实验方法及其在动物疫病防控中的应用进行综述,以期为研究者设计最佳的表位作图方案提供参考。
- 朱睿朱睿李震于瑞嵩董世娟
- 关键词：B细胞表位
