蚌埠医学院药学院安徽省生化药物工程技术研究中心
- 作品数：33 被引量：91H指数：5
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- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876对类风湿性关节炎滑膜细胞增殖及转移的抑制作用被引量：2
- 2019年
- 目的 探讨葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876对类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、迁移及侵袭能力的抑制作用。方法 不同浓度的BAY-876(0,0.5,1,2,4,8 μmol/L)处理RA-FLS细胞24,48,72 h,CCK-8法检测BAY-876对细胞的增殖抑制作用。ATP试剂盒检测不同浓度BAY-876(0,2,4,8 μmol/L)处理RA-FLS细胞24 h后,细胞内ATP水平的变化;Transwell法和细胞划痕实验检测不同浓度BAY-876(0,2,4,8 μmol/L)刺激下RA-FLS细胞的迁移与侵袭能力的改变;Western blot法检测细胞中MMP-2、MMP-9及AKT蛋白的表达。结果 CCK-8法实验结果表明,与对照组相比,不同浓度(0.5,1,2,4,8 μmol/L)的BAY-876作用24 h后的细胞存活率依次为(90.9 ± 2.9)%、(85.6 ± 5.4)%、(82.7 ± 7.6)%、(72.4 ± 1.9)%、(45.0 ± 0.7)%。且随着药物浓度的增加和处理时间延长,细胞存活率下降( P <0.05)。ATP水平检测结果表明,2,4,8 μmol/L BAY-876可明显降低RA-FLS细胞内的ATP水平( P <0.01)。Transwell法检测不同浓度(2,4,8 μmol/L)BAY-876处理细胞后,穿过小室膜的细胞数明显少于对照组;迁移试验表明,2,4,8 μmol/L BAY-876药物组的迁移抑制率分别为(16.2 ± 3.9)%、(60.1 ± 3.0)%和(68.2 ± 2.3)%,侵袭抑制率分别为(62.6 ± 3.3)%、(85.3 ± 3.7)%和(91.8 ± 3.2)%,与对照组比较差异均具有统计学意义( P <0.01)。Western blot结果显示,BAY-876可下调MMP-2、MMP-9和AKT的表达。结论 葡萄糖转运蛋白1抑制剂BAY-876可以显著地抑制对体外培养RA FLS细胞的增殖、迁移及侵袭能力,下调基质金属蛋白酶的表达,可以作为潜在的治疗风湿性关节炎的药物。
- 甄亚男甄诚葛贤明郭滨魏芳韦颖梅刘浩
- 关键词：类风湿性关节炎葡萄糖转运蛋白1增殖
- 氮气排水顶空气相色谱法检测医用输液中三种卤甲烷
- 2019年
- 目的对医用输液中可能存在的卤甲烷进行检测和定量分析。方法采用氮气排水顶空气相色谱法,选择安捷伦HP-5石英毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25μm)和电子捕获检测器检测;检测器温度250℃;汽化室温度180℃;柱温:起始温度30℃,保持3 min,以3℃/min升至60℃,保持1 min;载气(N 2)流速1 ml/min。考察方法的线性、精密度和加样回收率。结果受检的市售4个厂家医用输液中均检出卤甲烷,检出率100%。三种卤烷浓度在0.2-5.0μg/L内与色谱峰面积呈良好线性关系(R 2>0.99),精密度的平均RSD值为1.5%,加标回收率在90.5%-99.5%之间。结论本研究所建立的氮气排水气相色谱法用于医用输液中卤甲烷的检测方法简便、可靠。
- 张璐方芳陈阳王清清
- 关键词：顶空气相色谱法
- EGFR酪氨酸激酶抑制剂HS-10296诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞发生自噬和凋亡被引量：13
- 2020年
- 目的探讨表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKT)HS-10296对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用及潜在分子机制。方法HS-10296处理MDA-MB-231细胞24、48、72 h。CCK-8法检测MDA-MB-231细胞存活率;集落克隆法检测HS-10296对细胞的增殖抑制作用;JC-1与流式细胞术检测细胞凋亡情况;电镜观察细胞超微结构;自噬抑制剂氯喹预处理后分为不含药物的对照组、单用氯喹组、单用HS-10296(4、6μmol/L)组和两者联合组,CCK-8法检测MDA-MB-231细胞对HS-10296的敏感性变化;Western blot分析HS-10296对MDA-MB-231细胞凋亡和自噬相关蛋白以及EGFR信号通路的影响。结果CCK-8和集落克隆结果显示,HS-10296对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制作用(P<0.01),24、48、72 h的IC50值分别为8.393、2.777、2.016μmol/L。JC-1与流式细胞术显示HS-10296可诱导细胞发生凋亡,8μmol/L HS-10296处理后,细胞凋亡率为(21.63±2.97)%。电镜观察到经HS-10296处理后,细胞内出现自噬囊泡,使用氯喹预处理细胞后,观察到抑制自噬可增强HS-10296诱导的细胞死亡。Western blot显示经HS-10296处理后凋亡相关蛋白Caspase-3出现活化形式,并对其底物PARP进行剪切。自噬相关蛋白轻链3B表达高于对照组(P<0.01),同时,HS-10296可抑制细胞内EGFR及AKT蛋白的磷酸化。结论HS-10296可通过抑制EGFR/PI3K/AKT信号通路,抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞发生自噬和凋亡。
- 葛贤明周巧张语涵周文静伍宇甄诚张梦晓范方田陈刚胜赵军军刘浩
- 关键词：三阴乳腺癌自噬凋亡
- 甘珀酸增强RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用被引量：2
- 2022年
- 目的探讨铁死亡诱导剂RSL3对耐顺铂睾丸癌细胞(I-10/DDP)增殖、侵袭和迁移能力的影响以及甘珀酸对RSL3抗耐药睾丸癌活性的作用。方法MTT法检测不同浓度RSL3(0、1、2、4、8、16、32μmol/L)及合用甘珀酸(100μmol/L)作用后I-10/DDP细胞的存活率、铁死亡抑制剂Fer-1(2μmol/L)的作用下RSL3(4μmol/L)及甘珀酸(100μmol/L)合用RSL3(4μmol/L)处理后I-10/DDP细胞的存活率。后续实验分为Control组、甘珀酸(100μmol/L)组、RSL3(2μmol/L)组、甘珀酸(100μmol/L)合用RSL3(2μmol/L)组,采用集落克隆实验检测细胞增殖能力、划痕实验和Transwell实验检测细胞侵袭与迁移能力。Westernblot检测GPX4水平、C11 BODIPY 581/591荧光探针检测lipid活性氧(ROS)水平、FerroOrange荧光探针检测Fe^(2+)水平。结果RSL3呈浓度依赖性降低I-10/DDP细胞存活率,且在RSL3浓度2、4、8μmol/L时,合用甘珀酸后细胞存活率显著降低(P<0.05);与Control组相比,RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数减少、划痕愈合率减小(P=0.012)、侵袭和迁移细胞数减少(P<0.001);与单用RSL3相比,甘珀酸合用RSL3处理后I-10/DDP细胞的集落形成数显著减少、划痕愈合率显著减小(P=0.005)、侵袭和迁移细胞数显著减少(P=0.001,P=0.002)。Fer-1降低单用RSL3、甘珀酸合用RSL3对I-10/DDP细胞增殖的抑制率(P<0.01);与Control组相比,RSL3作用后细胞内GPX4水平降低(P=0.001)、lipid ROS水平(P=0.001)和Fe^(2+)水平升高;且与单用RSL3相比,甘珀酸合用RSL3处理后细胞内GPX4水平明显降低(P=0.01)、lipid ROS水平(P=0.001)和Fe^(2+)水平明显升高。结论RSL3可诱导耐顺铂睾丸癌细胞发生铁死亡,并能抑制细胞增殖、侵袭和迁移能力;甘珀酸通过促进RSL3诱导的铁死亡从而增强RSL3的抑制作用。
- 杜家如李彬朱晨露韩家乐童旭辉
- 关键词：睾丸癌甘珀酸增殖迁移
- 下调miR-205-5p增强3-溴丙酮酸对人鼻咽癌CNE2Z细胞的凋亡诱导作用被引量：5
- 2019年
- 目的探讨下调miR-205-5p对3-溴丙酮酸诱导的鼻咽癌CNE2Z细胞凋亡的影响。方法以鼻咽癌CNE2Z细胞株为研究对象,实验分为4组,分别为对照组、转染组(转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor)、3-溴丙酮酸组(80μmol/L 3-溴丙酮酸)、合用组(转染miR-205-5p-mimic或miR-205-5p-inhibitor后合用3-溴丙酮酸)。MTT法检测3-溴丙酮酸和miR-205-5p对CNE2Z细胞增殖的影响;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞早期凋亡情况;DAPI荧光染色法检测细胞核形态变化以及细胞晚期凋亡情况;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率的变化;Western blot检测Bcl-2、Bax、Mcl-1、Bak蛋白的表达。结果3-溴丙酮酸对CNE2Z细胞的增殖有明显的抑制作用,并且随着药物浓度和作用时间的增加细胞增殖抑制作用越明显;80μmol/L 3-溴丙酮酸处理CNE2Z细胞24、48、72 h的抑制率分别为(45.7±1.21)%、(64.4±2.02)%、(78.3±1.55)%;转染miR-205-5p-mimic后,80μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h的抑制率分别为(27.7±1.04)%、(34.8±2.10)%、(44.3±1.57)%;转染miR-205-5p-inhibitor后,80μmol/L 3-溴丙酮酸作用24、48、72 h的抑制率分别为(80.5±0.94)%、(87.9±0.50)%、(93.8±1.16)%。线粒体膜电位检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组红绿荧光的相对比例明显降低;DAPI荧光检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的细胞核碎裂及核固缩明显增加;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的凋亡率明显高于单独处理组的凋亡率(P<0.01);Western blot检测结果显示,转染miR-205-5p-inhibitor后3-溴丙酮酸组的Bcl-2、Mcl-1蛋白的表达水平明显降低,Bax、Bak蛋白的表达水平明显增高。结论3-溴丙酮酸能诱导CNE2Z细胞凋亡,转染miR-205-5p-inhibitor能增强3-溴丙酮酸诱导的细胞凋亡,其机制可能与下调Mcl-1和Bcl-2表达,上调Bak和Bax蛋白的表达有关。
- 时宗芬张配鲁星月朱晨露陈长江赵素容刘浩
- 关键词：鼻咽癌细胞凋亡
- 冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响被引量：2
- 2020年
- 目的:探讨冬凌草甲素对耐顺铂鼻咽癌细胞株HNE1/DDP凋亡的影响。方法:MTT实验检测冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞增殖能力的影响;集落克隆实验检测细胞集落形成能力;DAPI荧光染色法检测HNE1/DDP细胞核形态的变化;PI单染流式细胞术分析细胞的凋亡情况;检测试剂盒测定细胞内ROS的水平;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白表达水平。结果:MTT实验结果表明,冬凌草甲素20μmol/L^50μmol/L可显著减弱HNE1/DDP细胞活力,抑制细胞增殖;相比于模型对照组,3μmol/L^5μmol/L的冬凌草甲素对HNE1/DDP细胞的集落形成能力有明显的抑制作用(P <0. 05或P <0. 01);且随着冬凌草甲素给药浓度的增加,细胞核发生明显皱缩,核碎裂增加;细胞内ROS水平明显增加;抑凋亡蛋白Mcl-1、Bcl-2表达明显下调,促凋亡蛋白Bax、Bak表达明显上调(P <0. 05或P <0. 01)。结论:冬凌草甲素能显著抑制耐顺铂鼻咽癌HNE1/DDP细胞的增殖,并诱导其发生凋亡,其作用可能是通过诱导细胞内ROS的产生,对Mcl-1、Bcl-2、Bax、Bak等凋亡相关蛋白进行调控实现的。
- 鲁星月时宗芬陈长江朱晨露张配刘浩赵素容
- 关键词：冬凌草甲素鼻咽癌
- 雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移的抑制作用
- 2023年
- 目的探究雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移能力的抑制作用。方法MTT法检测RSL3(TypeII)及合用雷帕霉素(RAPA)作用后I-10细胞的存活率。将RSL3(0~16μmol/L)分别以及联合16μmol/L雷帕霉素作用于睾丸癌细胞I-10,采用MTT法检测I-10细胞增殖抑制情况,利用集落克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用划痕实验和Transwell小室检测I-10细胞的迁移与侵袭能力,采用流式细胞术检测I-10细胞的脂质活性氧水平,采用GSH和MDA检测试剂盒检测细胞中GSH和MDA含量,利用Westernblot检测细胞GPX4蛋白表达。结果随着RSL3浓度的提高,其对I-10细胞的毒性作用逐渐增强。在合用雷帕霉素后,对细胞的毒性进步一增强。与对照组相比,单用RSL3组I-10细胞集落形成数减少(P<0.05)、划痕愈合率降低(P<0.01)、侵袭和迁移细胞数减少(P<0.05)、脂质活性氧水平升高(P<0.0001)、GSH含量降低(P<0.01)、MDA含量升高(P<0.05)、GPX4蛋白表达水平降低(P<0.01);与单用RSL3组相比,雷帕霉素联用RSL3组集落形成数、侵袭和迁移细胞数进一步减少(P<0.05),划痕愈合率、GSH含量、GPX4蛋白表达水平进一步降低(P<0.01,P<0.05),脂质活性氧水平、MDA含量进一步升高(P<0.05,P<0.01)。结论雷帕霉素增强RSL3对睾丸癌细胞I-10的增殖、侵袭与迁移的抑制作用,其机制与其能够增强RSL3诱导的铁死亡有关。
- 李彬汪越侯凤伟杜家如童旭辉
- 关键词：睾丸癌雷帕霉素增殖迁移
- 不同品种石榴汁中没食子酸含量测定及其抗氧化能力比较
- 2023年
- 研究以红玛瑙、白玉籽2个石榴品种为材料,采用高效液相色谱法(HPLC)和福林酚法分别测定了石榴汁中没食子酸和总多酚的含量,并采用ABTS快速法和FRAP法综合评价了2种石榴汁的抗氧化能力,以期更加深入地了解石榴的营养价值和应用潜力,同时为筛选优质石榴品种提供参考。结果表明:在试验条件下,没食子酸在3.125~50μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,红玛瑙和白玉籽石榴汁中没食子酸的含量分别为7.49和24.56μg/mL;总多酚含量在0~1000μg/mL的浓度范围内呈良好的线性关系,红玛瑙和白玉籽石榴汁中总多酚的含量分别为287.6和737.6μg/mL;当总多酚含量为0~200μg/mL时,2种石榴汁的总抗氧化能力均随着总多酚浓度的增加而增强;白玉籽石榴汁中没食子酸和总多酚的含量均高于红玛瑙石榴汁,故其总抗氧化能力也强于红玛瑙石榴汁。
- 唐大为罗凯文张梦晓刘浩
- 关键词：石榴没食子酸高效液相色谱法总多酚抗氧化活性
- 阿美替尼对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响被引量：8
- 2021年
- 目的:肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其病死率排在众多恶性肿瘤之首。非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)患者的病死率较高,总体5年存活率<15%。当NSCLC发生局部侵袭时,患者5年生存率仅为20%,而当发生远处转移时5年生存率更是低至4%。阿美替尼(almonertinib)是我国自主研发并拥有自主知识产权的创新药,其作为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂主要用于EGFR T790M突变的局部晚期或转移性NSCLC患者。本研究旨在探讨阿美替尼对NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:体外培养NSCLC H1975、PC-9细胞,采用CCK-8法、细胞凋亡实验、Transwell实验检测阿美替尼对H1975、PC-9细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响;蛋白质印迹法检测侵袭迁移相关蛋白质的表达。结果:CCK-8实验结果显示阿美替尼呈时间和剂量依赖性抑制H1975、PC-9细胞增殖,PC-9细胞24、48 h的IC_(50)值分别为5.422、1.302μmol/L,H1975细胞24、48 h的IC_(50)值分别为4.803、2.094μmol/L。细胞凋亡实验结果显示1、2、4、8μmol/L阿美替尼分别处理PC-9和H1975细胞24 h时,细胞凋亡率分别为(8.82±3.22)%、(9.53±4.24)%、(13.62±3.69)%、(42.10±1.76)%和(9.81±0.90)%、(10.51±1.49)%、(15.34±3.50)%、(28.97±2.57)%。Transwell实验结果显示阿美替尼抑制H1975、PC-9细胞侵袭和迁移。蛋白质印迹法结果显示:与对照组相比,1、2、4μmol/L阿美替尼处理组PC-9和H1975细胞中MMP-9,MMP-2和Vimentin蛋白表达水平均明显降低,E-cadherin蛋白表达水平明显升高(均P<0.05)。裸鼠实验结果发现:与对照组和阳性对照奥希替尼(AZD9291)组相比,阿美替尼治疗组肿瘤生长被显著抑制,裸鼠体重减轻,肿瘤体积显著减小,肿瘤质量也明显减轻(均P<0.05)。结论:阿美替尼能够在体内外抑制H1975、PC-9细胞的增殖、侵袭、迁移,并促进H1975、PC-9细胞凋亡。其抑制侵袭的作用机
- 张语涵张耀帅牛雯雯葛贤明李娴范方田李姗姗刘浩
- 关键词：非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂增殖上皮间质转化
- 姜黄素通过Keap1-Nrf2通路抑制甲状腺乳头状癌B-CPAP细胞的增殖、迁移及侵袭
- 2023年
- 目的研究姜黄素对B-CPAP人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响作用及其机制。方法姜黄素(0、5、10、15、20μmol/L)作用B-CPAP细胞,MTT法、Transwell法检测细胞存活率、迁移及侵袭;DCFH-DA试剂盒流式细胞仪检测细胞ROS水平;Western blot法验证Nrf2、Keap1蛋白变化情况,qRT-PCR法检测Nrf2、Keap1基因mRNA。结果与0μmol/L组细胞比较,随着姜黄素作用的时间(24、48、72 h)增加,B-CPAP细胞存活率显著下降,随着姜黄素浓度的增加细胞存活率、迁移、侵袭能力显著下降(P<0.05或P<0.01);姜黄素剂量依赖性触发B-CPAP细胞ROS产生、并且可被N-乙酰半胱氨酸(NAC)有效逆转;20μmol/L姜黄素组细胞Nrf2蛋白及m RNA水平显著降低、Keap1蛋白及mRNA水平表达显著升高(P<0.05或P<0.01),对细胞核、胞浆Nrf2蛋白水平的Western blot检测分析发现20μmol/L姜黄素显著降低细胞核内Nrf2蛋白水平(P<0.05)、而胞浆内Nrf2蛋白表达量未见显著差异(P>0.05)。结论姜黄素可能通过调节Keap1-Nrf2通路抑制B-CPAP甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。
- 任丽邹明远朱行春徐文隽刘刚孙俊杰范方田张从利
- 关键词：姜黄素甲状腺乳头状癌
