东南大学医学院遗传学研究中心
- 作品数：46 被引量：281H指数：10
- 相关作者：张悦赵秀丽单军何小兵王善治更多>>
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- 发文基金：国家自然科学基金江苏省卫生厅科研基金教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
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- 口腔鳞癌细胞系HLAI类分子异常表达及其机制探讨被引量：2
- 2003年
- 为探讨两个口腔鳞癌细胞系 (KB和Tca81 1 3)中HLAI类抗原的表达水平及其异常的分子机制。利用流式细胞术、Westernblot检测细胞系中HLAI类抗原在蛋白水平的表达 ;RT PCR检测细胞系在转录水平的表达。结果两个口腔鳞癌细胞系中HLAI类抗原蛋白水平的表达下调 ;RT PCR结果显示Tca81 1 3细胞系中A、B、C、LMP2、LMP7、LMP1 0基因的mRNA表达下调 ;在KB细胞系中除了A、B、C、LMP7、LMP1 0基因的mRNA表达下调 ,LMP2、PA2 8α基因的mRNA表达显著减少或缺失 ;而TAP1、TAP2、Tapasin基因在mRNA水平的表达无改变。IFN γ诱导后纠正了多个基因在mRNA水平的异常表达。两个口腔鳞癌细胞系中HLAI类抗原表达下调 。
- 唐秋莎张建琼祁兵沈传来鲁晓萱鲍海逊Soldano FerroneXinhui Wang谢维
- 关键词：鳞状细胞基因表达
- PCR-SSP结合测序分析快速筛选HLA-A*0201亚等位基因被引量：5
- 2003年
- 建立相对简单经济的检测HLA A 0 2 0 1等位基因的方法 ,以便于从特定人群中快速筛选HLA A 0 2 0 1阳性的个体 ,满足科研的需要。根据第十二届HLA国际联合会提供的标准操作规程和一对HLA A位点特异性的引物 ,从外周血中提取基因组DNA ,扩增HLA A基因 ;再设计两对HLA A2组特异性引物 ,采用套式PCR分别扩增HLA A基因的 5’端和 3’端 ,如出现特异条带 ,则将后两对引物的PCR产物进行测序分析 ,对照HLA A2组等位基因的第 2和第 3外显子序列图 ,确定是否为HLA A 0 2 0 1 1～ 0 2 0 1 6的 6个等位基因。结果 :以HLA A 0 2 0 1阳性的T2细胞株为阳性对照进行检测 ,结果完全正确 ,并设立非HLA A 0 2 0 1的A2细胞株RML (HLA A 0 2 0 4 )及Raii细胞株 (非A2组 )为对照 ,同时随机检测 30份门诊病人血样 ,其中 7份为HLA A2阳性 ,经测序 ,2例为HLA A 0 2 0 1 1 ,1例为HLA A 0 2 1 1或 0 2 35 ,1例是HLA A 0 2 0 6或0 2 2 1或 0 2 4 1或 0 2 4 4或 0 2 5 1或 0 2 5 4 ,1例是HLA A 0 2 0 5或 0 2 1 4 ,1例是HLA A 0 2 34或 0 2 35 ,1例是 0 2 5 0。本方法利用位点特异性引物进行 2～ 3次PCR扩增 ,结合PCR产物测序便可相对简便经济地检测出HLA A 0 2 0 1的全部 6个亚等位基因 ,为快速检测其他特定HLA等位基因?
- 郭薇张建琼沈传来孟凡岩谢维
- 关键词：HLA分型PCR-SSP测序
- 抗醛糖还原酶单克隆抗体的制备与特性鉴定
- 2005年
- 目的: 制备抗醛糖还原酶(AR)的单克隆抗体(mAb),并与本室制备的抗醛糖还原酶相似蛋白(ARL-1) mAb进行比较. 方法: 经RT-PCR获得AR基因, 将基因插入Pgex- 4T-1(His)6C中, 构建重组质粒Pgex- 4T-1(His)6C-AR, 以重组质粒转化E.coli Rosetta诱导表达GST-AR蛋白.以纯化的GST-AR蛋白免疫BALB/c小鼠, 采用杂交瘤技术制备mAb.应用间接ELISA和Western blot方法对mAb进行筛选和鉴定.使用Clustalx和 Antheprot软件, 比较AR与ARL-1的同源性, 表达GST-Dar[80～142氨基酸(aa)], 与ARL-1差异较大; 并分析AR的抗原性, 表达GST-Da1(1～79 aa)、GST-Da2(80～99 aa)、 GST-Da3(111～142 aa)、 GST-Da4(143～316 aa).利用AR全长及截短蛋白, 采用Western blot分析制备的抗AR mAb识别AR抗原的部位.结果: 获得3株稳定分泌抗AR mAb的杂交瘤细胞系ARB3、 AR7B3G4和ARF10.3株抗GST-AR的 mAb均为IgG1(κ型), 腹水mAb效价为1∶ 4×105, 细胞培养上清mAb效价为1∶ 1×104, 3株mAb均可与胎盘组织中的AR蛋白起反应, 而与GST-ARL-1和GST蛋白无交叉反应.它们分别为抗GST-Da1、GST-Da3和GST-Da4蛋白的mAb.结论: 成功地制备了3株特异性抗AR mAb,可分别识别AR的 1～79、111～142、143～316位氨基酸.将它们与抗ARL-1 mAb联合应用,将有助于进一步研究AR与ARL-1蛋白的功能, 并为深入探讨AR、ARL-1与相关疾病的关系及进行大规模的流行病学调查提供了有力的工具.
- 马达金俊飞孙明宽单军张建琼谢维
- 关键词：醛糖还原酶单克隆抗体
- 食管癌组织HLA-I类抗原及相关分子的表达及意义被引量：11
- 2004年
- 为探讨HLA抗原及相关分子在食管癌中的表达水平及其与病理学分型的关系 ,应用了 5种HLA抗原及相关分子单抗 ,采用免疫组织化学方法 (ABC法 )对江苏省 83例食管癌组织石蜡切片进行检测并结合肿瘤的临床病理资料综合分析 .得出结果 :HLA B/C、HLA A、β2 m、LMP2、calnexin各分子的下调率分别为 12 %、2 5 .3 %、15 .7%、19.3 %、2 0 .8% ;丢失率分别为 2 9%、3 3 .7%、49.3 %、2 4.1%、41.5 % .其中LMP2位点的表达与肿瘤分型相关 ,随着食管癌分化程度降低 ,下调率增加 .2 7例病例有淋巴结转移 ,但统计学分析各分子的表达与转移均无明显相关性 .研究表明 ,食管癌中有明显的HLA I类分子表达下调或缺失 .
- 缪凤琴张建琼单军蒋芹陈昊李淑锋张建民谢维
- 丙型肝炎病毒型特异性聚合酶链反应基因分型的临床应用被引量：4
- 2003年
- 目的 探索丙型肝炎病毒 (HCV)基因型在不同人群中的分布规律及流行优势型。方法 分别对健康体检者、住院患者和血液透析患者抗HCVIgG阳性标本 ,用自行设计的 5’非编码区 (5’ NCR) 1、2、3、1b型特异性引物进行扩增和基因分型。结果 3组人群中血液透析患者HCV感染率最高 ,抗HCVIgG和HCVRNA阳性率分别为 5 5 .37%和 38.84%。基因型以 1b亚型为主 ,1b及 1b的相关型占 91.6 7%。结论 本地区HCV流行优势型为 1b亚型。
- 李丽张建琼夏梅孟继鸿
- 关键词：丙型肝炎病毒聚合酶链反应基因分型血液透析特异性引物
- 人源性噬菌体抗体库的构建和抗CEA抗体的筛选及表达被引量：1
- 2006年
- 目的构建人源性噬菌体抗体库,筛选和表达人源性抗癌胚抗原(CEA)单克隆抗体。方法从结肠癌患者肠系膜淋巴结中的淋巴细胞克隆出免疫球蛋白Fd段和κ链基因,建成噬菌体抗体库。用人CEA对抗体库进行筛选,将得到的阳性克隆进行表达及检测。结果抗体库库容为5．2×106,Fab基因重组率为30％。ELISA及Western blot分析检测,证实表达出人源抗CEA单克隆抗体。DNA序列测定,证实所获基因为人免疫球蛋白可变区基因。结论成功构建噬菌体抗体库,从中获得人源性抗CEA的单克隆抗体。
- 范健赵刚张建琼俞扬沈宇清缪凤琴
- 关键词：噬菌体抗体库癌胚抗原人源性单克隆抗体
- 小麂Sry基因的克隆和测序被引量：14
- 2003年
- 应用人的性别决定基因SRY(Sex determiningRegionYgene,SRY)中HMG框内的一对引物,对小麂细胞株的基因组DNA进行PCR扩增,得到雄性小麂细胞的220bp扩增产物,而在雌性小麂细胞中未发现扩增产物。将雄性小麂细胞的220bp扩增产物通过T-A互补法克隆到质粒pGEM-T载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果表明小麂Sry基因保守序列与人的SRY基因保守区相同碱基的比值为152/184,达到82.6%。提示小麂Sry基因与人的SRY基因存在着较高的同源性,说明SRY基因在进化过程中高度保守。
- 鲁晓瑄张悦单祥年
- 关键词：SRY基因性别决定小麂同源性
- 通过比较基因组杂交研究肝癌中非随机染色体畸变被引量：2
- 2005年
- 目的:研究肝癌发生和发展过程中非随机染色体畸变情况。方法:采用比较基因组杂交法(comparativegenomichybridization,CGH)分析25例肝癌标本。结果:4q、8p、16q、17p、13q和6q区域的缺失以及8q、1q、6p和17q区域的扩增为肝癌的特征性变化。结论:非随机改变区域存在的相关基因与肝癌发生有关。
- 刘啸鲁晓暄单云锋洪则辉姚堃周锋单祥年
- 关键词：肝肿瘤DNA
- 抗果蝇ECP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的: 制备抗果蝇ECP蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法: 用大肠杆菌表达并纯化的GST-ECP融合蛋白, 免疫6～8 wk的雌性BALB/c小鼠, 取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 经间接ELISA筛选和克隆化培养制备杂交瘤细胞系.用间接ELISA及Western blot等方法对mAb的Ig亚类(型)、腹水效价及特异性进行鉴定.结果: 获得1株杂交瘤细胞株, 命名为8G9.Ig亚类(型)鉴定表明, 此株mAb为IgG1(κ型).腹水mAb的效价为 1∶ 1×105.Western blot分析表明, 该株mAb可与果蝇的幼虫、蛹及成虫组织中表达的ECP特异性结合, 可特异性的识别ECP抗原的231～300aa区段.结论: 获得1株能稳定分泌抗ECP mAb的细胞株, 为进一步研究ECP的功能奠定了基础.
- 刘加彬汪道涌孙明宽徐敏刘琍谢维
- 关键词：黑腹果蝇ECP单克隆抗体抗原表位
- 大肠癌中胰岛素样生长因子2基因的印迹状态和表达被引量：20
- 2003年
- 目的 研究胰岛素样生长因子 2 (insulin- like growth factor2 ,IGF2 )基因的印迹状态和表达与大肠癌的关系 ,为研究大肠癌的发生机理提供线索。方法 用逆转录 -聚合酶链反应半定量检测 IGF2的表达量 ,比较其在大肠癌及癌旁组织中有无差异 ,用限制性片段长度多态检测 IGF2的印迹状态 ,分析印迹状态、表达量与大肠癌的关系。结果 82 .4 % (2 8/ 34)大肠癌有 IGF2的表达增加 ,IGF2的表达量在肿瘤组织与癌旁组织中差异有显著性 (P<0 .0 1,t=3.0 1)。IGF2在 87.5 % (14 / 16 )大肠癌组织中发生了印迹丢失 ,但其相对应的癌旁组织也有 71.4 % (10 / 14 )存在 IGF2的印迹丢失。结论 IGF2的表达增加是大肠癌发生的相关因素 ,IGF2的印迹丢失可能是大肠癌发生的前期表现。
- 张锋锐何小兵杨玉华谢维
- 关键词：大肠癌胰岛素样生长因子2基因组印迹基因表达
