暨南大学生命科学技术学院分子免疫学与抗体工程研究中心
- 作品数：18 被引量：122H指数：8
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- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- VEGF受体结合抑制肽的重组表达与活性分析
- 2007年
- 通过阻断肿瘤血管新生的相关因子与受体的结合抑制肿瘤血管的形成，已成为近年肿瘤治疗的重要研究策略。VEGF和碱性成纤维细胞生长因子（hFGF）是促进血管内皮细胞生长最重要的因子。本研究前期工作中已通过筛选噬菌体随机肽库，获得阳性克隆之-7P419（所带肽序列为GWYYDAX，X代表一特定氨基酸），该短肽具有明显的抑制VEGF的活性。本文将7P419与硫氧还蛋白Ttx融合表达，检测该融合蛋白的抑制效果，并与人工合成肽7P419比较。
- 向军俭钟振东王宏杨红宇邓宁
- 关键词：VEGF活性分析受体结合碱性成纤维细胞生长因子血管内皮细胞生长肿瘤血管新生
- 牛奶中过敏原组分的分离纯化及主要过敏原的鉴定被引量：22
- 2008年
- 目的:分离纯化并鉴定牛奶中引起过敏反应的主要致敏原组分,并分析其与组胺释放的关系。方法:等电点沉淀、Sephadex G-50凝胶层析和DEAE-Sepharose离子交换层析等技术分离纯化牛奶过敏原组分。脱脂乳浸液免疫C57/BL6小鼠制备抗血清。Western-Blotting分析脱脂乳致敏原组分。间接ELISA检测抗血清中sIgE和sIgG;同时荧光法检测各致敏组分体外诱发免疫小鼠腹腔肥大细胞组胺释放率。结果:分离纯化出酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白等致敏组分(纯度>90%)。免疫印迹表明酪蛋白是主要致敏原组分。抗血清sIgG水平差异显著,sIgE水平没有大的变化;组胺释放率与sIgG水平是一致的,而与sIgE水平没有明显相关性。酪蛋白抗血清sIgG效价最高为1∶25 600,组胺释放率高达(73.28±9.31)%。结论:牛奶中主要过敏原组分鉴定为酪蛋白,对牛奶过敏症的体外诊断治疗以及低/无过敏原配方奶的研制有一定的意义。
- 蒋红玲向军俭王宏邓宁刘婉莹杨红宇凌钦婕
- 关键词：食品过敏原牛奶蛋白纯化组胺
- 双抗体夹心ELISA检测碱性成纤维细胞生长因子被引量：4
- 2006年
- 徐晓鹏向军俭李贵生邓宁唐勇王宏杨红宇
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体ELISA
- 抗麻痹性贝毒素GTX2,3单克隆抗体的制备及特性分析被引量：11
- 2005年
- 制备抗麻痹性贝毒GTX2,3单克隆抗体。利用醛化法将GTX2,3与载体牛血清白蛋白(BSA)偶联,制备完全抗原。免疫小鼠,取小鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合。GTX2,3与钥孔血蓝蛋白(KLH)偶联作为检测抗原,用间接ELISA法筛选阳性克隆株。将筛选的阳性细胞株制备腹水。获得三株稳定分泌抗GTX2,3单克隆抗体的杂交瘤细胞株F4、F10、G9。间接ELISA法检测F10细胞株腹水抗体效价为1.4×10-5。半抗原GTX2,3与载体蛋白偶联后,作为免疫原,可制备高滴度的抗GTX2,3抗血清和单克隆抗体。该抗体对于藻毒素具有高特异性和高亲和力,可用于污染海产品的麻痹性贝毒的检测。
- 向军俭唐琦罗辉武江天久邓宁唐勇杨红宇凌钦婕
- 关键词：麻痹性贝毒单克隆抗体
- 河虾主要过敏组分的分离、纯化、鉴定及其致敏性分析被引量：10
- 2010年
- 目的:鉴定河虾中的过敏原组分,对主要过敏原组分进行纯化并分析其致敏性强弱。方法:用磷酸盐缓冲液(PBS)制备河虾蛋白粗提液,将其与11例虾过敏症患者血清IgE进行Westernblot,鉴定各种分子量的河虾过敏原组分;河虾蛋白粗提液用硫酸铵沉淀、G-50凝胶层析和阴离子交换层析等方法纯化其主要过敏原组分,再用虾过敏患者血清IgE进行Westernblot鉴定;并将纯化的相对分子质量(Mr)为21000、36000、800003种主要过敏原组分与虾过敏症患者血清IgE做间接ELISA,以分析其致敏性强弱。结果:West-ernblot结果显示,河虾蛋白粗提液出现9个阳性条带;其中3种主要过敏原组分21000、36000、80000与患者血清的反应率为36.4%,63.6%,45.5%;将这3种Mr的蛋白组分分别做间接ELISA,结果显示21000、36000、80000过敏原组分与11例虾过敏症患者的混合血清IgE结合的吸光值都显著高于河虾蛋白粗提液。结论:河虾中至少存在9个过敏原组分;21000、36000、8000等3种蛋白组分为河虾的主要过敏原组分,其中以36000过敏原组分致敏率和致敏性最强。进一步研究将探明21000、36000、80000等3种河虾过敏原组分的共同抗原表位,以期为明确食物过敏原检测、临床诊断和虾过敏原疫苗设计提供基础。
- 黄建芳林婷婷向军俭杨红宇
- 关键词：河虾食物过敏
- 人源性抗HBsAg单链Fab基因在Pichia pastoris中的表达被引量：3
- 2006年
- 目的：研究重组Fab的结构与亲和活性的关系：方法：通过重叠PCR，将人源性抗HBsAg Fab的H和L链基因融合构建单链Fab基因，并将其转入毕赤酵母表达载体pPICZαA中。以单链Fab基因表达载体通过氯化锂转化法转化毕赤酵母GS115。将获得的重组酵母在摇瓶中培养进行重组单链Fab的可溶性表达。表达上清经硫酸铵沉淀及亲和层析纯化后，用直接ELISA检测表达产物和纯化Fab的活性：结果：SDS—PAGE和Western blot分析显示，单链Fab在毕赤酵母中获得分泌型表达。薄层扫描显示，在摇瓶中培养毕赤酵母表达的单链Fab约为5～10mg／L。经亲和层析纯化获得纯度达97．8％的重组单链Fab。经直接ELISA测定的结果显示，重组单链Fab具有较好的结合HBsAg的活性。结论：通过重叠PCR构建的融合单链Fab基因，可成功地在毕赤酵母中获得分泌型表达，表达产物具有较好的结合HBsAg的活性。
- 邓宁向军俭粟宽源王宏唐勇
- 关键词：HBSAG毕赤酵母
- 麻痹性贝类毒素GTX2,3间接与直接竞争酶免疫学检测方法的比较研究被引量：18
- 2006年
- 目的：初步比较麻痹性贝类毒素GTX2，3间接竞争酶免疫学检测方法（idc—ELISA）与直接竞争酶免疫学检测方法（de—ELISA）。方法：用高碘酸盐氧化法制备GTX2，3-HRP偶联物并用直接ELISA对其进行鉴定。分别用GTX2，3与葡萄糖氧化酶（GOX）的偶联物GTX2，3-GOX和兔抗小鼠IgG多抗做为包被抗原，用GTX2，3标准毒素作为抑制剂，做间接及直接竞争ELISA，确定并比较两种ELISA的特异性、灵敏度、检测限、工作范围。结果：成功制备出GTX2，3-HRP偶联物，间接和直接竞争ELISA灵敏度分别为10μg／ml和4μg／ml，检测限为6．25μg／ml和0．5μg／ml，工作范围为6—50μg／ml和0．5—50μg／ml。结论：两种竞争ELISA都能应用于麻痹性贝类毒素的快速检测，但dc—ELISA比idc—ELISA更加灵敏，更适合于进一步的研究。
- 罗辉武向军俭唐勇杨红宇
- 关键词：麻痹性贝类毒素ELISA
- ABC-ELISA法检测牛乳过敏小鼠模型中的特异性IgE被引量：4
- 2006年
- 目的:建立并优化一种有效检测特异性IgE的方法,以取代皮内试验快速诊断过敏症。方法:用乳清蛋白皮下注射BALB/c小鼠建立牛奶过敏模型,获得小鼠抗血清进行方法学研究。结果:乳清蛋白的最适包被量为500ng,用pH9.4的碳酸盐缓冲液作为包被液,4℃包被过夜效果最佳,选用0.2%的白明胶/1%的BSA封闭效果最好,生物素化抗鼠IgE抗体的最佳反应浓度为1∶1000。结论:建立了检测特异性IgE的生物素-亲和素系统改良的ABC-ELISA法,该法特异、灵敏、安全、简便,可用于临床诊断过敏症。
- 毛露甜向军俭张在军
- 关键词：ABC-ELISA食物过敏特异性IGE
- 自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的检测被引量：5
- 2005年
- 目的:探索自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF自身抗体的存在状况。方法:通过对封闭条件、酶标板类型及抗原用量等条件进行优化,建立了检测自身免疫性疾病患者血清中抗bFGF抗体的ELISA检测方法。采用建立的最佳检测条件对395例自身免疫性疾病患者的血清进行了bFGF自身抗体IgG和IgM的检测。结果:在系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)、慢性肾炎、皮肌炎(DM)、不明原因发热(FOU)和特发性血小板减少紫癜(IPT)等患者血清中检测到了高滴度的抗bFGF的IgG、IgM自身抗体,各组的平均值和阳性率均明显高于正常对照组(P<0.05)。结论:在自身免疫性疾病患者体内广泛存在着bFGF的自身抗体,对bFGF自身抗体的调查研究将为自身免疫性疾病的机制的探讨奠定基础。
- 向军俭漆秋兰邓宁王彤歌王宏唐勇江振友
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子自身抗体ELISA自身免疫性疾病
- 单增李斯特菌免疫磁珠的制备研究被引量：15
- 2012年
- 目的:制备可高效、特异地分离单增李斯特菌的免疫磁珠。探讨羧基修饰磁珠与多克隆抗体的不同偶联条件和免疫磁珠捕获单增李斯特菌的能力。方法:以单增李斯特菌作为抗原,免疫新西兰兔,获得兔源多克隆抗体,鉴定其与单增李斯特菌体的结合能力;选择6种不同的偶联缓冲溶液,设置了6个主要偶联时间和6组偶联温度,通过比较磁珠与抗体偶联后上清中剩余的抗体量来确定最佳偶联条件。结果:制备的多克隆抗体效价为1.3×105,该抗体与单增李斯特菌体有较好的结合,抗体与1mg羧基修饰磁珠在pH6.0的0.01mol/L一水吗啉乙磺酸缓冲溶液(MES)中,37℃偶联2h,偶联抗体的量为160μg;制得的免疫磁珠的捕获率可达77.0%。结论:获得羧基磁珠与抗体偶联的最佳条件,该免疫磁珠用于食品中单增李斯特菌的检测,与常规的平皿增菌培养显色法比较,检测时间至少缩短20h。
- 徐金亭李志清向军俭唐勇杨红宇
- 关键词：免疫磁珠单增李斯特菌偶联
