兰州大学基础医学院医学生物化学与分子生物学研究所
- 作品数：63 被引量：212H指数：8
- 相关作者：刘昕韩亚萍王春霞夏艳郭鹏更多>>
- 相关机构：上海理工大学医疗器械与食品学院甘肃医学院附属医院新疆医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学文化科学更多>>
- YKL-40转染对前列腺癌LNcap细胞增殖及侵袭活性的影响被引量：1
- 2011年
- 目的探讨外源性YKL-40基因转染对前列腺癌LNcap细胞增殖、侵袭、迁移及黏附活性的影响。方法 RT-PCR法检测前列腺癌细胞LNcap、PC-3、DU-145 YKL-40基因内源性表达情况;用pcDNA3.1-YKL-40质粒转染LNcap细胞,分别经MTT法、Boyden小室法及黏附试验检测转染前后细胞增殖、侵袭、迁移及黏附活性,并进行体外药敏试验。结果仅DU-145细胞可内源性表达YKL-40基因;pcDNA3.1-YKL-40转染的LNcap细胞在第2～5天的A490值均显著高于对照组(P<0.05),其侵袭(75.11±4.40)和迁移穿膜细胞数(133.00±5.07)及黏附率(107.57%)均显著高于对照组(P<0.05),对5-FU、顺铂和依托泊苷的IC50值分别为(31.15±0.43)、(4.15±0.13)和(55.22±0.57)μmol/L,均显著高于对照组(P<0.05)。结论 YKL-40基因能促进LNcap细胞增殖,提高细胞侵袭、迁移及黏附活性,并使其对5-FU、顺铂和依托泊苷具有一定的耐药性。
- 夏艳査成喜杨海静温玉婷杨浩陈卫
- 关键词：LNCAP细胞细胞增殖肿瘤侵润
- 单克隆抗体制备技术的最新进展及应用前景被引量：48
- 2011年
- 单克隆抗体技术是现代生命科学研究的重要工具,其在基因和蛋白质的结构与功能研究方面有着不可或缺的作用,在人类和动植物的免疫学诊断方面至今仍有着无可代替的重要作用。本文综述了单克隆抗体的制备技术,包括嵌合抗体、噬菌体展示技术、核糖体展示技术、基因工程抗体等,及其在临床医学和疾病的诊断与治疗等领域的广阔应用前景。
- 孔君刘箐韩跃武王天昌刘金芝
- 关键词：单克隆抗体
- Nested-PCR检测种传番茄细菌性溃疡病菌被引量：5
- 2011年
- 利用番茄溃疡病菌特异性引物对纯菌液、模拟带菌种子及自然感染种子提取液分别进行Direct-PCR和Nested-PCR检测。结果在纯菌液中,Direct-PCR的检测灵敏度为105cfu/mL,Nested-PCR为102cfu/mL;在模拟带菌种子提取液中,Direct-PCR的检测灵敏度为107cfu/mL,Nested-PCR为104cfu/mL;在自然感染种子提取液中,稀释104倍后Nested-PCR仍然可以检出。建立的番茄种子Nested-PCR检测技术,无需经过核酸提取步骤,可以在8 h内完成整个检测过程,方便快捷,成本低廉,可作为番茄种子带菌的常规检测方法。
- 闵现华刘箐韩跃武文朝慧王军平刘姝彤刘雅莉宋蕤施颖波
- 关键词：番茄溃疡病番茄种子NESTED-PCR
- 抗菌肽Dermaseptin S4及其突变体基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2008年
- 目的构建表达抗菌肽Dermaseptin S4(DS4)及其突变体K4-S4的工程菌,并表达目的蛋白。方法采用重叠延伸PCR法设计和扩增抗菌肽DS4及K4-S4基因,定向克隆入载体pUC-18中,经酶切、测序鉴定,重组至表达载体pGEX-4T-1中,构建抗菌肽DS4及K4-S4基因表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)plyS,经IPTG诱导表达,12%SDS-PAGE鉴定。结果构建的抗菌肽DS4及K4-S4基因工程菌所表达的目的蛋白,经SDS-PAGE鉴定可见相对分子质量34 000的特异性目的条带,37℃诱导5 h的蛋白表达量最高,且多数以包涵体形式存在。结论已成功构建抗菌肽DS4及K4-S4工程菌,并表达目的蛋白,为进一步研究其功能和应用奠定了基础。
- 张庆华韩跃武谢俊秋卢天龙任惠子冯惟萍
- 关键词：抗菌肽DERMASEPTIN突变体大肠杆菌
- 反义Ki-67和Bcl-2真核细胞双表达载体的构建及鉴定被引量：1
- 2008年
- 目的构建反义Ki-67和Bcl-2双表达载体用于肿瘤基因治疗的研究。方法从SGC-7901细胞总RNA中逆转录扩增Ki-67和Bcl-2 cDNA,T-A克隆到pMD18-T Simple载体。Ki-67经BamHⅠ和ClaⅠ双酶切,Bcl-2经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,分别反向插入pVITRO2的多克隆位点1(mcs1)和2(mcs2),构建单表达质粒pVITRO2-AsKi-67和pVITRO2-AsBcl-2,再将Bcl-2EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,反向插入pVITRO2-AsKi-67的mcs2,构建pVITRO2-AsKi-67-AsBcl-2双表达质粒。结果限制性内切酶和测序表明单表达质粒pVITRO2-AsKi-67和pVITRO2-AsBcl-2以及双表达质粒pVITRO2-AsKi-67-AsBcl-2构建成功。结论本研究成功构建了pVITRO2-AsKi-67和pVITRO2-AsBcl-2单表达质粒,及pVITRO2-AsKi-67-AsBcl-2双表达质粒。
- 卢天龙陈建国韩跃武张庆华
- 关键词：KI-67BCL-2反义RNA
- 高血糖影响海马GSK3β-β-catenin信号抑制大鼠海马颗粒下区成体神经干细胞再生
- 2017年
- 目的:探讨持续高血糖对大鼠海马颗粒下区(subgranular zone,SGZ)神经干细胞状态的影响及可能机制。方法:SD大鼠注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导1型糖尿病模型,腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(bromodeoxyuridine,Brd U)标记新生细胞。利用免疫组化法检测海马SGZ区Ki67,5-溴脱氧尿嘧啶核/双皮质素(bromodeoxyuridine/doublecortin,Brd U/DCX)标记的阳性细胞。利用免疫印迹法检测海马胰岛素受体β(insulin receptorβ,IRβ),糖元合成酶激酶3β(pho-glycogen synthase kinase-3β,GSK3β),β-链蛋白(β-Catenin)表达水平。结果:STZ注射大鼠胰岛素降低,血糖升高;糖尿病大鼠海马区Ki67阳性细胞,Brd U/DCX阳性细胞和对照组比较明显减少,海马区IRβ,pho-GSK3β,β-Catenin表达水平和对照组比较显著下降(P<0.05)。结论:STZ诱导的1型糖尿病大鼠海马SGZ区新生细胞增值能力下降,细胞分化异常,这一变化和海马区胰岛素信号下调,GSK3β活化,β-Catenin降解增加有关。
- 祁楚楚马学珠陈海超高丽萍尹洁景玉宏
- 关键词：1型糖尿病GSK3Β
- 绵羊骨髓细胞抗菌肽基因的改造及其在原核生物中的表达
- 2014年
- 目的通过对绵羊骨髓细胞抗菌肽(sheep myeloid antibacterial peptides with 29 amino acids,SMAP-29)的活性片段SMAP-29(1-18)基因的改造,使其以C-端融合蛋白的形式在大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中表达。方法根据大肠埃希菌偏爱密码子表,将SMAP-29的活性片段SMAP-29(1-18)基因序列进行改造,应用ProtParam分析SMAP-29的理化特性,Anthorprot软件预测其螺旋轮结构,设计新的基因片段,插入质粒pET-30a中,构建重组表达质粒pET-30aSMAP-29[1-18,K2,4,L13],转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物过2次Ni2+NTA His Bind resin柱进行纯化。结果 SMAP-29基因序列经改造后,稳定性、等电点及半衰期均明显提高。重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定,证明构建正确。表达的重组蛋白相对分子质量约61 257,以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的41%,纯度为81%。结论已成功对SMAP-29基因进行改造,实现了其在E.coli BL21(DE3)中的高表达,获得了纯度较高的目的蛋白,为进一步规模化生产SMAP-29奠定了理论及实践基础。
- 刘科鹏柴晓虹韩跃武姚海燕张雪燕徐攀
- 关键词：基因改造原核细胞
- FABP7基因真核表达载体的构建及其对人乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用
- 2009年
- 王毅君车团结张萍闫琨李琳王勤陈卫
- 关键词：乳腺癌细胞
- Survivin ASODN对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响被引量：1
- 2006年
- 目的:观察Survivin基因反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对胃癌细胞增殖的影响。方法:靶向Survivin ASODN经脂质体介导转染胃癌细胞系SGC-7901,倒置显微镜和电镜观察转染后细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖情况;半定量RT-PCR检测Survivin基因mRNA的表达;免疫组化检测Survivin蛋白的变化情况;FCM检测细胞周期的变化。结果:转染ASODN后,细胞出现了形态学变化;MTT实验检测发现细胞株SGC-7901增殖受到显著抑制,抑制率达(69．2±0．76)％;RT-PCR检测发现Survivin基因mRNA水平表达显著下降,免疫组化试验发现蛋白表达也出现类似的结果;流式细胞仪检测发现G1期细胞比例增高,由对照组的66％和62．5％增至90．7％。结论:Survivin ASODN可以显著抑制Survivin的表达,抑制胃癌细胞增殖。
- 殷晓春庞春艳陈卫
- 胃癌生物标志物的相关研究进展被引量：4
- 2017年
- 根据2012年国际癌症研究机构首次公布的全球癌症统计结果,胃癌是最常见的癌症,仅低于肺癌、乳腺癌、结肠直肠癌和前列腺癌。胃癌的治疗手段效果有限,虽然中晚期的胃癌通过化疗能延长部分患者的生存期,但大多数化疗疗效局限且维持时间短,2年生存率小于10%。
- 邵明洋李文慧杨静韩跃武贾茹涵
- 关键词：胃癌生物标志物预后指标
