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西北大学生命科学学院国家微检测系统工程技术研究中心: 作品数：40 被引量：140H指数：7; 相关作者：杨晓燕颜桦但宁梁长利褚巍更多>>; 相关机构：河南工业大学生物工程学院陕西师范大学化学化工学院西安医学院药学院更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划陕西省自然科学基金国家自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学理学农业科学更多>>

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戊二醛聚合猪血红蛋白免疫学特性分析被引量：1: 2011年; 目的阐明加弗氏佐剂条件下,戊二醛聚合猪血红蛋白(glutaradehyde polymerized porcine he-moglobin,pPolyHb)对不同种类动物的免疫原性,初步探讨pPolyHb与人、牛血红蛋白的抗原决定簇的异同。方法在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb多次皮下免疫小鼠、大鼠和兔子,间接ELISA法检测抗血清IgG滴度;免疫印迹法分别检测小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与猪、牛、人、小鼠、大鼠、兔子、pPolyHb和戊二醛聚合牛血红蛋白之间的交叉反应。结果在加弗氏佐剂的条件下,pPolyHb能够刺激动物产生较高滴度的IgG,不同种类的动物产生IgG滴度不同;小鼠、大鼠和兔子抗pPolyHb抗体与不同来源的血红蛋白之间的交叉反应有明显的差异。结论在有弗氏佐剂的条件下,pPolyHb有较强的免疫原性。但是,对不同种类动物免疫刺激的强弱不同;对不同种类的动物,pPolyHb刺激抗体产生的抗原决定簇可能大部分相同,但也有部分不同,由此产生的抗体也不同;pPolyHb与人和牛血红蛋白均有一些相似的抗原决定簇,但也有一些相互独立的抗原决定簇。; 朱晓丽范代娣王童文但宁; 关键词：免疫原性酶联免疫吸附免疫印迹

功能化磁性微粒的合成及表面巯基的测定被引量：9: 2006年; 目的研究以3-巯丙基三乙氧基硅烷作为Fe3O4磁性粒子表面修饰剂,合成微米级磁响应性好且巯基含量较高的功能化磁性微粒,并对磁性微粒粒径以及表面巯基含量进行表征。方法激光粒度散射仪对功能化磁性微粒进行粒径分析,傅立叶变换红外光谱(FTIR)对巯基修饰前、后磁性微粒表面的功能基团进行表征,E llman方法对功能化磁性微粒表面巯基含量进行定量测定。结果氮气保护,乙醇与水体积比1∶1作为溶剂,500μL浓氨水为催化剂,加入300μL硅烷化试剂与170 mg磁性Fe3O4粒子充分反应,合成了平均粒径约为5μm的巯基化磁性微粒,所建立E llman方法对功能化磁性微粒表面巯基含量的测定结果为357μmol/g。结论功能化磁性微粒表面巯基的修饰及定量测定,为其在生物及医学领域的应用奠定了基础。; 苏婧惠文利王兰英陈超崔亚丽; 关键词：功能化巯基

体外重组人细胞色素P450 2C9酿酒酵母表达体系的构建及其基因多态性对药物相互作用影响的初探被引量：3: 2009年; 目的体外构建重组人细胞色素P450 2C9(CYP2C9)酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)表达体系,且利用该体系研究药物对CYP2C9基因多态性酶抑制程度的差异性。方法将CYP2C9*1(野生型)和通过定点突变PCR法获得的等位基因突变克隆CYP2C9*2(R144C突变体)和CYP2C9*3(I359L突变体)电穿孔转化酿酒酵母后,差速离心法制备酿酒酵母微粒体,蛋白免疫印迹法检测3种CYP2C9微粒体蛋白的表达;HPLC法检测CYP2C9*1与特异性底物双氯芬酸的反应,记录产物峰面积值,利用Prism Demo软件计算米氏常数(Km)值;利用荧光底物BOMCC对3个等位基因进行酶活性分析,分别计算Km、最大酶促反应速度(Vmax)和内在清除率。采用荧光高通量方法测定5种药物(甲苯磺丁脲、磺胺苯比唑、酮康唑、氟西汀和泰洛平)对酶的抑制程度。结果蛋白免疫印迹结果表明,3个等位基因均表达目的蛋白。CYP2C9*1代谢双氯芬酸的Km值为5.34±0.96μmol/L;以BOMCC为底物时,CYP2C9*1和CYP2C9*2的Km值分别为16.94±4.78、34.73±5.51μmol/L,Vmax分别为0.21±0.10、0.12±0.01pmol/(min·pmolP450),内在清除率分别为0.012±0.003、0.003±0.0001μl/(min·pmolP450);CYP2C9*3无催化活性。5种药物对CYP2C9*1的抑制程度:磺胺苯比唑>酮康唑>氟西汀>甲苯磺丁脲>泰洛平;对CYP2C9*2的抑制程度:磺胺苯比唑>甲苯磺丁脲>酮康唑>氟西汀>泰洛平。结论成功构建了重组人细胞色素CYP2C9及其多态性等位基因(CYP2C9*2、CYP2C9*3)酿酒酵母表达系统;初步建立了药物对CYP2C9基因多态性酶的抑制作用体外检测体系,为指导临床联合用药奠定了基础。; 马平平王会娟朱娟莉陈超; 关键词：细胞色素P450酶系统半数抑制浓度药物相互作用

凝集素芯片技术检测糖蛋白方法的建立及初步应用被引量：11: 2009年; 建立了凝集素芯片技术检测糖蛋白的方法,对实验条件进行了优化,应用凝集素芯片初步检测分析了Chang's liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成.将凝集素ConA、GNA固定于环氧化修饰的玻片表面,用Cy3标记标准糖蛋白RNaseB,利用凝集素识别特异糖链的原理建立凝集素芯片检测糖蛋白的方法.摸索出最佳封闭剂是含1%BSA的磷酸缓冲液,最佳孵育时间及温度为3h和室温,最佳孵育缓冲液为含1%BSA和0.05%Tween-20的磷酸缓冲液,并用甘露糖抑制实验验证了凝集素芯片结合的特异性.用包含10种凝集素的芯片,成功解析了标准糖蛋白RNaseB、Fetuin的糖链构成,证实了凝集素芯片检测糖蛋白糖链的可行性.最后用凝集素芯片初步检测分析了Chang's liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白糖链构成,发现Chang's liver正常肝细胞总蛋白中的糖蛋白可能有多价Sia或GlcNAc、terminalα-1,3 mannose、GalNAc、Galβ-1,4GlcNAc这些糖链结构的存在.蛋白质糖基化是一种重要的翻译后修饰,它在微生物感染、细胞分化、肿瘤转移、细胞癌变等生命活动中起着重要作用,因此近年来蛋白质的糖基化研究受到广泛的重视,但由于缺乏一种简便、快速、高通量的检测手段,蛋白质糖基化修饰的研究发展缓慢.凝集素芯片技术的出现实现了对糖蛋白的快速、准确、高通量的检测分析.; 简强于汉杰陈超李铮; 关键词：糖蛋白糖组学肝细胞

大骨节病软骨线粒体相关差异表达基因的特征及其通路分析: 针对近年来大骨节病存在软骨细胞过度凋亡及线粒体损伤的现象，利用微阵列基因芯片技术，对比研究了大骨节病与正常对照成人软骨中线粒体相关差异基因表达及其通路，以从基因转录水平探讨大骨节病的分子发病机制，为推进大骨节病的病因发病...; 李春燕郭雄张峰王伟卓颜华李铮; 关键词：大骨节病线粒体基因转录水平信号转导通路

HCV非结构蛋白质5A基因全长和高免疫源区的表达及免疫活性检测: 2008年; 目的探讨HCV非结构蛋白质5A(NS5A)基因全长和高免疫源区的表达并比较其检测灵敏度。方法以含HCV全基因组的质粒pBRtm/HCV-3011(1型)为模板,采用PCR方法扩增出NS5A全长基因(以下用NS5AL代替)和高免疫源区基因(以下用NS5AS代替),与pET-32a载体相连接构建重组表达载体pETNS5AL和pET-NS5AS,分别转化E.coliRosetta(DE3)pLysS和BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后,蛋白质印迹法检测其表达,镍螯合(Ni2+-NTA)琼脂糖亲和层析柱纯化重组NS5AL和NS5AS蛋白,最后通过ELISA法检测重组蛋白的免疫活性并对其检测灵敏度进行比较。结果SDS-PAGE鉴定与蛋白质印迹验证结果表明,重组NS5AL和NS5AS蛋白均得到很好地表达;纯化的重组NS5AL和NS5AS蛋白浓度分别为0.146和0.426mg/ml,纯度均>96%;ELISA检测结果表明,重组NS5AL和NS5AS蛋白均具有较好的免疫活性,且重组NS5AL蛋白的检测灵敏度明显高于NS5AS。结论成功地表达出重组NS5AL和NS5AS蛋白,均具有较高的免疫活性。; 余龙林杨芳朱娟莉陈超; 关键词：肝炎病毒病毒非结构蛋白质类基因免疫活性

从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白被引量：14: 2008年; 为了从猪血中分离纯化高纯度的猪血红蛋白,建立了通过超滤、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱和Sephadex G-75凝胶排阻色谱三步法制备高纯度猪血红蛋白的方法,并通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、高效凝胶排阻色谱和反相高效液相色谱方法,对纯化后的猪血红蛋白进行了鉴定。经三步分离纯化后,猪血红蛋白的纯度大于99%,含量为1.328g/L。; 周勃边六交; 关键词：超滤阴离子交换色谱猪血红蛋白纯化

PIK3CA基因突变的MassARRAY分子量阵列分析: 2011年; 目的:利用MassARRAY分子量阵列分析系统检测胃癌组织PIK3CA基因突变。方法:从胃癌石蜡包埋组织中提取基因组,PCR反应扩增目的基因片段,MassARRAY分子量阵列分析系统检测PIK3CA基因突变;焦磷酸测序验证检测结果。结果:中国西部地区144例胃癌组织样本中PIK3CA_E542K(1624G>A)突变携带率为77.6%,PIK3CA_E545K(1633G>A)突变携带率为84%。MassARRAY分子量阵列分析系统检测结果与焦磷酸测序结果达到100%吻合。结论:建立了MassARRAY分子量阵列分析系统检测基因突变的方法,初步建立了中国西北地区汉族人群胃癌组织PIK3CA基因PIK3CA_E542K(1624G>A)和PIK3CA_E545K(1633G>A)位点突变频数。; 梁平赵锦荣惠延平孙建斌王伟汪钦包晗刘永兰金天博郭晏海张菊颜真; 关键词：胃癌基因基因分型基因突变

新疆地区VEGF +936C/T和-634G/C基因多态性与子痫前期和妊娠期糖尿病的相关性分析被引量：1: 2022年; 目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)两个单核苷酸多态性位点(+936C/T和-634G/C)与新疆地区常见的妊娠并发症(子痫前期和妊娠期糖尿病)发病风险的相关性。方法共招募2102例女性受试者,包括1551例正常妊娠孕妇(正常组)、232例子痫前期患者(子痫前期组)和319例妊娠期糖尿病患者(妊娠期糖尿病组)。用Sanger测序技术进行VEGF+936C/T和-634G/C基因分型检测。用t检验、Pearson卡方检验和无条件Logistic回归分析进行临床特征和基因分型结果的统计分析。结果在任何遗传模式下均未观察到VEGF+936C/T和-634G/C基因型频率在子痫前期组、妊娠期糖尿病组与正常组间存在差异(P>0.05)。无条件Logistic回归(调整年龄、BMI、民族、产次和月经不调等混杂因素)分析结果表明,VEGF+936C/T和-634G/C多态性不是子痫前期和妊娠期糖尿病的独立危险因素(P>0.05)。结论本研究是首个评估新疆人群VEGF基因型/单倍型与子痫前期和妊娠期糖尿病可能联系的病例-对照研究,结果显示,新疆地区VEGF+936C/T和-634G/C基因多态性与子痫前期和妊娠期糖尿病的发生均无显著相关性。; 陈红艳李刚薛淑媛纪少云肖磊颜桦; 关键词：血管内皮生长因子子痫前期妊娠期糖尿病

人细胞色素P4502D64个单核苷酸突变株活性及其与药物相互作用的体外研究: 2008年; 目的探讨单核苷酸替换对人细胞色素P450CYP2D6酶活性及其与药物相互作用的影响。方法体外构建CYP2D6野生株(WT)和G169R、P34S、E410K、V7M等4个单核苷酸突变株的表达载体并在酿酒酵母中诱导表达,裂解并提取各酶的蛋白微粒体,用蛋白质印迹法验证其表达,再分别测定各酶代谢底物丁夫洛尔和3-[2-(N,N二乙基-N-甲铵)乙基]-7-甲氧基-4-甲基香豆素(AMMC)的米氏常数(Km)和最大酶促反应速度(Vmax)。以AMMC为底物对CYP2D6WT和V7M、G169R进行高通量药物抑制实验,所选药物包括已知的2D6抑制剂(奎尼丁、舍曲林)、底物(氯丙嗪、氟西汀、阿米替林)和既非抑制剂又非底物的化合物(酮康唑、曲格列酮),求得不同药物对不同酶的半数抑制浓度(IC50)。结果蛋白质印迹法检测显示各酶均表达良好。CYP2D6WT代谢丁呋洛尔和AMMC的Km值分别为19.22、2.06μmol·L-1,Vmax值分别为154.53、21.60pmol·min-1·mg-1,Vmax/Km值分别为8.04、11.49μl·min-1·mg-1。与CYP2D6WT比较,V7M代谢2种底物的Vmax值均要高得多(P<0.05),G169R和E410K均稍低,而P34S都要低很多(P<0.05);各突变株的Km值也发生了或多或少的改变。药物对CYP2D6WT和V7M和G169R的抑制程度排序均为奎尼丁>氯丙嗪>氟西汀>阿米替林>舍曲林>酮康唑/曲格列酮;药物对V7M和G169R的IC50值与CYP2D6WT的IC50值比值,奎尼丁分别为0.88和0.80,氯丙嗪0.54和0.80,氟西汀0.65和1.02,阿米替林0.85和0.71,舍曲林0.43和0.74。结论CYP2D6部分单核苷酸突变株的酶动力学特征与野生株有明显差异,单核苷酸替换可导致酶对药物抑制的敏感性发生变化。; 江杨华杨月珍朱娟莉陈超; 关键词：细胞色素P450 CYP2D6 单核苷酸半数抑制浓度

西北大学生命科学学院国家微检测系统工程技术研究中心

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