中山大学中山医学院临床检验标准化研究中心 作品数:66 被引量:297 H指数:9 相关作者: 朱振宇 张甜 汪杨 钟慧玲 周凯 更多>> 相关机构: 郑州大学医学院 郑州大学河南省医药科学研究院 郑州大学生物医学工程研究所 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家科技重大专项 广东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
核黄素联合紫外线A照射对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果 被引量:5 2007年 目的考察核黄素联合紫外线A对血浆中伪狂犬病毒的灭活效果。方法以伪狂犬病毒为模拟病毒,以Vero细胞为培养细胞,用病毒感染细胞,制备病毒增殖液;分别采用5、10、15及20J/cm2联合核黄素处理血浆,观察处理前后血浆病毒灭活的效果,筛选灭活病毒合适的紫外线剂量;将含有伪狂犬病毒血浆的样本分为实验组:采用上述筛选的紫外线强度照射联合核黄素处理;对照组1:单独采用紫外线A照射;对照组2:单独采用核黄素处理;阴性对照组:未采用紫外线照射和核黄素处理;分别在实验前后采用96孔细胞病变法,对照细胞病变效应,根据Reed-Muench公式计算病毒滴度。结果采用不同强度的紫外线联合核黄素处理血浆,紫外线强度为15及20J/cm2的灭活血浆病毒的效果明显,处理后病毒滴度分别下降4.55和4.39logs;实验组和对照组1病毒滴度分别下降4.55和4.28logs,有统计学意义(P<0.05);对照组2病毒滴度降低1.93logs,没有病毒灭活效果。结论核黄素联合紫外线可灭活血浆中伪狂犬病毒,单独紫外线照射也具有灭活血浆伪狂犬病毒的效果;而仅单独采用核黄素处理而未联合紫外线照射,对血浆中伪狂犬病毒灭活效果不明显。 聂咏梅 张晓敏 周豪杰 付涌水 江朝富 汪传喜 陶黎阳 张甜 曹开源 田小东关键词:血浆 核黄素 紫外线A 伪狂犬病毒 VERO细胞 前列腺特异性膜抗原新型剪接变异体PSM-E对前列腺癌细胞骨转移的作用 被引量:3 2012年 目的探讨前列腺特异性膜抗原(PSMA)新型剪接变异体PSM—E对前列腺癌细胞(RM-1)骨转移的作用及其机制。方法脂质体将PSM—E、PSMA基因转染RM-1,构建细胞模型(RM-1-PSM-E、RM-1-PSMA),检测羧肽酶活性;黏附及迁移实验测定不同细胞在骨基质胶模型上的黏附及迁移能力;Westernblot检测不同细胞中粘着斑激酶(FAK)的表达及磷酸化水平。结果与转染空质粒的RM-1比较,RM-1-PSM—E、RM-1-PSMA的羧肽酶活性分别升高1.96倍和2.13倍,而黏附能力分别升高12倍和14倍,加入羧肽酶活性抑制剂后,RM-1-PSM—E、RM-1-PSMA的黏附能力分别降低2.6倍和3.5倍;与转染空质粒的RM-1比较,RM-1-PSM—E、RM-1-PSMA的迁移能力降低,且FAK的磷酸化水平分别升高1.47倍和1.66倍。结论PSM—E对前列癌细胞骨转移具有调控作用,这与PSM—E的酶活性及FAK磷酸化水平有关。 毛晓鹏 赵良运 王道虎 曹开源 丘少鹏关键词:前列腺癌 骨转移 前列腺特异性膜抗原 人Flt3配体基因的克隆及其在CHO细胞中的表达 被引量:1 2008年 目的克隆人Flt3配体(Flt3 LIg and,FL),并在CHO细胞中进行表达。方法从健康人外周血中提取总RNA,通过RT-PCR技术,扩增Flt3配体胞外区cDNA功能性片段,经DNA测序证实后,将得到的片段基因插入pcDNA3.0表达载体,构建了pcDNA3.0-FL真核表达载体;将重组质粒pcDNA3.0-FL转染CHO细胞,经G418筛选出阳性细胞克隆,扩大培养,提取细胞总蛋白,用SDS-PAGE分离并Western blotting检测到在相对分子质量约24 000处有一显色条带。结果FL胞外区cDNA被正确克隆到真核表达载体pcDNA3.0中并在CHO细胞中成功表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.0-FL并在CHO细胞中成功表达,为FL的相关研究和应用开发奠定了基础。 梁蔚阳 蒋玉辉 曹开源关键词:FLT3配体 CHO细胞 基因克隆 Endophilin B1基因及蛋白的生物信息学分析 被引量:1 2012年 目的:利用生物信息学方法分析人Endophilin B1基因以及蛋白的结构,为进一步研究其功能和参与的调控机制提供一定的理论依据。方法:通过GenBank搜索Endophilin B1基因及蛋白序列,采用生物信息学方法分析该基因在不同物种中的差异,分析该蛋白的亚细胞定位,二级结构,功能域以及抗原表位。结果:该基因编码一个长度为365个氨基酸的蛋白,具有两个BAR和SH3两个功能域。Endophilin B1蛋白理论分子量为40796.3,理论等电点为5.78。二级结构中α螺旋(H)占56.44%,β折叠(E)占5.48%,无规卷曲占38.08%。Endophilin B1蛋白含有4个可能的N连接糖基化位点,5个潜在的酪蛋白激酶II磷酸化位点,7个豆蔻酰基化位点,3个PKC磷酸化位点以及2个酪氨酸激酶磷酸化位点。并进一步利用DNAstar软件分析了了该蛋白的抗原表位。结论:利用生物信息学预测出的结构和功能信息,能为Endophin B1蛋白的相关研究提供一定的信息基础。 王铸 何霞 冯发深 关琳琳 徐霖 张定梅 汪杨 罗燕芬 曹开源关键词:B1 BAR DOMAIN DOMAIN 小鼠FasL基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达 2012年 目的构建含有小鼠Fas Ligand(FasL)基因的重组真核表达载体,并检测FasL蛋白在其稳定转染的HEK293细胞中的表达情况,为构建表达小鼠Fas L的树突状细胞(DC)模型,深入研究DC联合T细胞防治移植物抗宿主病(GVHD)的新方法奠定基础。方法从小鼠脾脏中提取RNA并逆转录为cDNA,以该cDNA为模板扩增FasL基因,插入pcDNA3.1(+)载体中构建pcDNA3.1(+)-FasL重组质粒,利用脂质体将其转染HEK293细胞,用G418筛选稳定表达细胞系,Western blot确定重组蛋白的表达。结果通过酶切及测序证实FasL序列正确插入表达载体pcDNA3.1(+),Western blot检测证实转染重组质粒的细胞能正确表达FasL蛋白,G418筛选后能够得到稳定表达FasL的抗性细胞株即FasL-HEK293。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-FasL和稳定表达FasL的HEK 293细胞成功构建,为后续FasL-DC细胞的研究打下了坚实基础。 何霞 汪杨 何善阳 王铸 冯发深 关琳琳 罗燕芬 潘金成 曹开源 徐霖关键词:FAS LIGAND 基因转染 HEK293细胞 ADA、ACE、LDH、CEA的联合检测在结核性和恶性胸腔积液中的鉴别诊断价值 被引量:17 2007年 目的测定血清和胸水中腺苷脱氨酶(ADA)、血管紧张素转化酶(ACE)、乳酸脱氢酶(LDH)与癌胚抗原(CEA)的水平,探讨其指标联合检测对结核性和恶性胸水的鉴别诊断意义。方法对临床已确诊的72例胸腔积液患者(结核性40例,恶性32例)的胸水和血清分别采用酶免疫法和化学发光法进行ADA、ACE、LDH和CEA含量测定。结果结核性胸水中ADA的含量为(60.2±20.10)U/L,ACE的含量为(35±9.6)U/L,LDH的含量为(338±41)U/L,CEA的含量为(12.8±5.82)μg/L;在恶性胸水中,ADA为(11.02±5.23)U/L,ACE为(16±11.0)U/L,LDH为(379±69.0)U/L,CEA为(39.9±19.7)μg/L。结核性胸水ADA和ACE含量较恶性胸水组明显增高(P<0.01),CEA在恶性胸水中含量较结核性胸水组明显增高(P<0.01)。胸水中ADA和ACE的检测对结性性胸膜积液诊断的敏感性分别为84.3%、87.5%,特异性分别为87.5%、80.0%;而胸水中LDH和CEA的检测对恶性胸膜积液诊断的敏感性分别为84.3%、75.0%,特异性分别为80.0%、93.0%。四项指标联合检测敏感性为78.1%,特异性为97.5%,较单一指标的特异性高。结论胸水中ADA、ACE、LDH和CEA的联合检测对结核性和恶性胸水的鉴别诊断具有一定价值,有助于临床胸水性质的诊断。 梁剑平 温冬梅 曹开源关键词:腺苷脱氨酶 血管紧张素转化酶 结核性胸水 恶性胸水 2012-2013年广州地区散发性腹泻诺如病毒流行病学调查 被引量:6 2014年 目的调查2012—2013年广州市散发性腹泻诺如病毒(NoV)流行状况和流行特点。方法收集2012—2013年广州地区门急诊散发性腹泻患者粪便标本2236份,采用荧光定量RT—PCR对采集的标本进行NoV核酸检测并初步分型,收集并分析病人的临床基本信息,分析NoV阳性检出率在不同年龄段、性别、月份季节差异,同时对NoV阳性的标本进行A组轮状病毒、B组轮状病毒、C组轮状病毒、腺病毒、札如病毒、星状病毒检测,研究其混合感染情况。结果NoV阳性检出率为10.60%(237/2236),以GⅡ型为主。NoV在18~40岁的青年人中检出率最高(16.47%),7~17岁少年最低(3.67%),男女检出率差异无统计学意义(P〉0.05)。NoV全年都可检测到,夏季为高发季节,其中7-8月份检出率最高。NoV与其他肠道病毒共感染率为14.35%(34/237),其中与A组轮状病毒共感染率最高。结论广州地区NoV夏季为高发季节。在18-40岁的青年人中检出率最高,以GⅡ型感染为主,混合感染最常见为A组轮状病毒。 汪杨 徐霖 罗燕芬 钟慧玲 张素粉 张定梅 朱勋 曾谷城 曹开源关键词:诺如病毒 RT-PCR 时间分辨荧光免疫技术检测乙肝两对半的临床应用价值 被引量:9 2009年 目的:研究时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测乙肝两对半的临床应用价值。方法:比较ELISA、TRFIA和ECLIA 3种方法对120份病例的阳性检出情况;探讨此3种方法的灵敏度、特异性、阳性预示值和阴性预示值;研究3种方法检测HBsAg的线性范围和最低检出浓度;评价TRFIA的重复性;分析3种方法的检出模式。结果:TRFIA对乙肝两对半的阳性检出与ELISA有显著差异,与ECLIA基本一致。TRFIA具有优于ELISA的灵敏度和阴性预示值,两者的特异性和阳性预示值达到或接近100%,而ECLIA的各项指标均达100%。TRFIA和ECLIA检测HBsAg具有相当的线性范围和最低检出浓度。TRFIA试剂盒具有良好的重复性和稳定性。3种方法的检出模式有9种,TRFIA和ECLIA另检出3种模式,部分标本在三者之间的检出模式有差别。结论:TRFIA是一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的定量检测方法,具有重要的临床应用价值。 陈文思 陈伟 周爱群 曹开源关键词:酶联免疫吸附试验 时间分辨荧光免疫分析法 电化学发光法 乙肝两对半 灵敏度 抗前列腺特异性膜抗原膜外区多肽单克隆抗体的研制及初步应用 被引量:1 2008年 目的建立前列腺特异性膜抗原(PSMA)膜外区多肽杂交瘤细胞株,并对其分泌的PSMA单克隆抗体进行初步鉴定,为PSMA的功能研究和人源化抗体的制备奠定基础,以求进一步用于前列腺癌的诊断和治疗。方法使用人工合成多肽免疫BABL/c小鼠,采用PEG融合技术建立杂交瘤细胞株,制备单克隆抗体。通过免疫荧光法、酶联免疫吸附法及斑点金标法确定单克隆抗体的交叉反应性、亲和力及免疫球蛋白的类型和亚类。结果获得两株可稳定分泌PSMA单克隆抗体的杂交瘤细胞,4F4为IgG1类,1F1为IgG3类。两株单抗均能识别LNCap细胞表达的PSMA蛋白,与不表达PSMA的PC-3、SP2/0等细胞无交叉反应。杂交瘤细胞株1F1培养上清效价为1∶40,腹水效价为1∶6400;而杂交瘤细胞株4F4培养上清效价为1∶80,腹水效价为1∶8000。结论成功地制备出两株抗PSMA单克隆抗体,均具有良好的特异性和亲和力,为进一步建立免疫分析方法,进行PSMA相关研究奠定了基础。 曹开源 杨羚 徐霖 袁广卿 张甜 丘少鹏 沈关心关键词:多肽 单克隆抗体 不同级别小鼠来源的骨髓细胞对制备优势DC2的影响 被引量:7 2009年 目的探索不同级别小鼠来源的骨髓细胞对体外制备优势DC2细胞的影响。方法取SPF级和健康普通级C57BL/6小鼠股、胫骨骨髓细胞及脾细胞,设细胞因子诱导的实验组、低浓度GM-CSF对照组、无外源细胞因子对照组及脾细胞组。骨髓细胞采用GM-CSF,IL-4,Flt3L和SCF的不同细胞因子浓度和组合体外培养诱导。脾细胞培养2d去除大部分淋巴细胞,第3天采用流式细胞术4色荧光标记法分析细胞表型,骨髓细胞诱导的各组同样于第3天采用流式细胞术分析细胞表型,比较不同级别小鼠骨髓细胞所诱导的DC2细胞的表型和比例。结果SPF来源的小鼠骨髓细胞诱导的各组第3d在CD11c+的DC细胞群中CD8α+DC2所占比例及不成熟DC2的比例均高于普通级小鼠,显示普通鼠来源的骨髓细胞更倾向于产生成熟的DC,不易诱导产生高比例的不成熟的DC2。对两种动物脾细胞DC2的分析结果表明,普通鼠脾脏中CD8α-MHCⅡ+的成熟DC1比例为75.58%,远远超过SPF鼠的30.60%。结论小鼠的微生物级别可影响耐受性DC的诱导效果,采用SPF级小鼠来源的骨髓细胞体外制备优势DC2细胞效果优于普通级鼠,原因可能与普通鼠接触微生物较多,免疫系统更易于产生免疫应答而非免疫耐受有关。 邓玉兰 彭延文 徐霖 阮奕满 曹开源 袁广卿 项鹏 李树浓关键词:树突状细胞 细胞因子