复旦大学上海医学院生化与分子生物学实验室
- 作品数：29 被引量：125H指数：6
- 相关作者：方宁涛谢尚喆刘水张宝春李晓聪更多>>
- 相关机构：复旦大学附属中山医院复旦大学附属中山医院肝癌研究所复旦大学高分子科学系更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划上海市科学技术委员会资助项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 聚乙二醇修饰对二聚β肽抗肿瘤转移生物活性的影响
- 2007年
- 目的:比较聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)修饰对二聚β肽(β2)抗肿瘤转移活性的影响。方法:采用纤连蛋白(fibronectin,FN)包被细胞培养板作为细胞外基质成分(extracellularmatrix,ECM),观察β2和PEG修饰物(β2-PEG)对肝癌细胞株与FN黏附能力的影响;采用Matrigel法观察β2肽和β2-PEG对肿瘤细胞侵袭重组基底膜能力的影响。结果:β2和β2-PEG对SMMC-7721和HCCLM6细胞与FN黏附均有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量与时间相关性;PEG修饰物对2种肿瘤细胞的黏附抑制作用均较未修饰的β2肽明显增强(P<0.05)。β2和β2-PEG对HCCLM6细胞迁移和侵袭均有明显的抑制作用(P<0.05),迁移抑制率分别为54.6%和56.3%,侵袭抑制率分别为36.8%和46.6%,PEG修饰前后差异无统计学意义;β2和β2-PEG对SMMC-7721细胞也有显著的抑制作用,迁移抑制率分别为43.6%和45.7%,侵袭抑制率分别为33.6%和35.9%,修饰前后差异无统计学意义。结论:β2肽和β2-PEG对肿瘤细胞与FN的黏附具有特异的抑制作用,呈剂量与时间相关性,PEG修饰后抗黏附作用增强。β2肽和β2-PEG对2种肿瘤细胞的迁移和侵袭均有明显的抑制作用,但修饰前后差异无统计学意义。
- 朱珺王松梅沈炜明刘银坤
- 关键词：细胞黏附分子肿瘤侵袭
- 聚羟基脂肪酸酯的亲水性改性及其与人脐静脉内皮细胞相容性的研究被引量：4
- 2010年
- 用丝素蛋白(SF)对微生物合成的高分子聚合物聚(3-羟基丁酸酯-co-3-羟基己酸酯)(PHBHHx)进行亲水改性,以提高材料的生物相容性.水接触角测定和表面自由能分析表明,丝素蛋白在支架表面吸附,使PHBHHx材料表面的水接触角从90°降至51°,表面自由能从37.9 mJ/m2增至57.4 mJ/m2,因而增加了材料的亲水性.进一步对亲水性改性前后PHBHHx多孔支架与人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的相容性进行了比较.MTT法细胞活力分析表明,细胞在支架上培养3,5,7天后,其在SF改性PHBHHx多孔支架上的活力显著高于在未改性的PHBHHx支架上的活力;扫描电镜观察细胞生长形貌表明,细胞在改性后多孔支架上黏附及生长5天后,形成了连续细胞单层,其生长状态优于在未改性的PHBHHx支架上的生长状态;胶原含量测定表明细胞在改性后支架上比在未改性支架上有更好的胶原分泌能力,即改性后支架更利于诱导HUVECs分泌细胞外基质(ECM)从而构建类似体内的生长环境.
- 孙敏杨华啸周平潘銮凤刘水
- 三聚β肽PEG化后抗肿瘤转移生物活性研究
- 本实验以纤连蛋白(FN)包被细胞培养板模拟细胞外基质成分，观察β3和其PEG修饰物对人肝癌细胞株SMMC-7721及人肝癌高转移细胞株HCCLM6细胞与FN粘附作用的影响;利用Transwell细胞培养小室和人工基底膜胶...
- 朱王君王松梅刘银坤
- 关键词：抗肿瘤转移生物活性纤连蛋白人肝癌细胞
- 文献传递
- 天然生物材料壳聚糖支架上人胚肺成纤维细胞的生长被引量：17
- 2004年
- 采用不同粒度的硅胶粒子作为致孔剂 ,按硅胶和壳聚糖重量比 9∶1,制备了三组不同孔径的壳聚糖多孔支架 .以无孔壳聚糖支架为参照 ,对多孔支架的有效孔径、吸水性进行了比较 .结果表明 :孔径大小由硅胶尺寸控制 ,吸水性随孔径增大而增大 .为研究支架孔径大小对其生物相容性的影响 ,在系列支架上进行了人胚肺成纤维细胞的培养 .细胞种植 1d后 ,多孔支架上的细胞粘附较多 ,而无孔支架上的细胞伸展情况较好 ;细胞培养 5d后 ,所有支架上细胞伸展情况良好 ,孔径越大的支架上细胞增殖越多 .
- 陈光周平潘銮凤梅娜吴春根陈新邵正中
- 关键词：壳聚糖人胚肺成纤维细胞组织工程支架材料生物相容性
- 联合细胞培养在组织工程血管化中的应用被引量：4
- 2007年
- 自从1987年正式提出组织工程这一概念来以来,培养具有生物学活性组织器官替代物始终是组织工程学的发展方向。目前,虽然一些工程化组织如皮肤、软骨等已被成功构建,并应用于临床,但其他工程化组织如心脏、骨骼肌、肝脏等体积大、功能复杂,移植后难以及时建立血液供应。而及时建立的血管网络对组织器官的存活与功能实现至关重要。为此,国内外一些实验室采用联合细胞培养的方法,观察不同细胞间的相互作用对血管形成的影响。结果表明,联合细胞培养在血管的形成、稳定和成熟方面起着重要作用。
- 刘水潘銮凤
- 关键词：血管化
- 人脐动脉脱细胞支架的制备及其生物相容性被引量：17
- 2007年
- 目的:制备脱细胞人脐动脉支架并检测其与内皮细胞的相容性。方法:实验于2005-11/2006-12在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。实验材料:健康新生儿的新鲜脐带(产妇知情同意并自愿捐献)。实验方法:①脱细胞脐动脉支架的制备:分离脐动脉放于离心管中,先用低渗后用等渗的十二烷基硫酸钠处理,再用核酸酶消化。脱细胞脐动脉支架作苏木精-伊红染色、Movat五色法染色及透射电镜观察。②支架与内皮细胞共培养:将脱细胞脐动脉支架切成小块,移入24孔培养板中。实验组每孔接种1.5mL的脐静脉内皮细胞悬液,对照组未种细胞,只加1.5mL的培养液,1周后进行扫描电镜观察。实验评估:①脱细胞脐动脉支架的形态。②血管内皮细胞在脱细胞脐动脉支架上黏附生长情况。结果:①脱细胞脐动脉支架的形态:光镜下对照组样品中观察到深蓝色的细胞核,实验组细胞结构被完全破坏,核破碎后被彻底清除,未见核碎片,血管壁纤维组织染成红色,呈整齐排列,组织结构未见明显的疏松;Movat五色法染色显示,脱细胞血管无红色的细胞质和黑色的细胞核,只见呈现整齐排列的波浪状黑色的弹性纤维,其间散布着蓝色的糖蛋白和网状纤维;透射电镜下观察到交错排列的胶原纤维和弹性纤维,有少量碎片存在,未见细胞样结构。②血管内皮细胞在脱细胞脐动脉支架上黏附生长情况:脐静脉内皮细胞种植于脱细胞脐动脉支架后,扫描电镜观察到可黏附生长并形成完整内膜层。结论:用十二烷基硫酸钠和核酸酶联合消化人脐动脉能够制备良好的脱细胞血管支架,并且对内皮细胞有良好的组织相容性。
- 吴春根方宁涛潘銮凤
- 关键词：血管组织工程十二烷基硫酸钠人血管内皮细胞
- 丹参多酚酸盐体外抗肿瘤作用及其机制的初步研究
- 丹参多酚酸盐是由传统中药丹参中提取精制的水溶性多酚酸盐类化合物制备而成。丹参作为中医常用药物之一，有着悠久的临床应用历史。本研究采用以丹参乙酸镁为质量控制标准、有效成分明确的丹参多酚酸盐为原料，观察其对数种肿瘤细胞株体外...
- 沈云婕朱珺王松梅潘銮凤
- 关键词：丹参多酚酸盐细胞周期多中心临床试验
- 文献传递
- 应用4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色法快速观察生物支架材料体外内皮化程度被引量：2
- 2006年
- 目的:建立一种新的形态学方法,以简便快捷地观察生物支架材料体外内皮化的程度。方法:实验于2005-07/2006-02在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。①新鲜的猪心瓣膜经过十二烷基磺酸钠和脱氧胆酸处理,获得去细胞生物支架。②采用消化法获得脐静脉内皮细胞。③将脐静脉内皮细胞(2×105/cm2)种植于支架上,静态培养10d。用0.5mg/L的4,6-联脒-2-苯基吲哚溶液对再内皮化支架进行直接的大体染色及染色后冰冻切片,同时用苏木精-伊红染色,免疫荧光染色和扫描电镜对支架的内皮化情况进行平行观察。结果:①猪心瓣膜的细胞成分完全脱去,胞外基质保存完好。②原代分离的脐静脉内皮细胞,培养5d后融合成扁平单层,梭形或多角形,具有典型的铺路石样形态;CD31免疫荧光染色细胞表面呈现黄绿色荧光。③脐静脉内皮细胞种植10d后,支架经4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色显示内皮化程度达90%以上,观察结果与电镜观察相同;冰冻切片观察显示支架表面有一融合的内皮细胞单层,与免疫荧光染色及常规苏木精-伊红染色结果相吻合。结论:4,6-联脒-2-苯基吲哚大体染色法可直接观察生物支架再内皮化程度,简便、准确直观,是体外构建组织的一种有效的形态学检测方法。
- 孙洪亮方宁涛谢尚喆高红阳潘銮凤
- 关键词：心脏瓣膜
- 内皮前体细胞与平滑肌细胞联合培养构建组织工程血管:最适比例验证被引量：1
- 2008年
- 目的：由内皮前体细胞分化的内皮细胞与成熟平滑肌细胞联合培养可以为组织工程血管的形成提供更接近天然的条件。实验拟进一步证明两种细胞联合培养可促进血管内皮细胞生长，以及两种细胞的最适比例。方法：实验于2006—01／2007-05在复旦大学上海医学院分子生物学实验室完成。①实验材料：新鲜脐带取自国际第一妇婴保健医院，产妇知情同意。②实验方法及评估：从人脐动脉中用组织块培养法分离并原代培养血管平滑肌细胞，免疫荧光方法鉴定其平滑肌肌动蛋白表达情况；采用密度梯度离心法分离脐血中的内皮前体细胞，经体外定向诱导分化和免疫荧光方法鉴定其表型；无菌条件下制作Ⅰ型胶原凝胶，在其上以3：1～4：1的比例混匀联合培养内皮前体细胞与平滑肌细胞，并观察两种细胞联合培养时的形态，分析两种细胞最合适的种植比例：免疫荧光方法观察在Ⅰ型胶原凝胶联合培养中CD31、vWF的表达以及内皮细胞的生长情况。结果：①原代培养的平滑肌细胞呈典型“波峰谷”形态，荧光染色平滑肌肌动蛋白呈阳性。②脐血来源的内皮前体细胞定向诱导分化为内皮细胞后，呈现出“铺路石”样形态，表达CD31、vWF，结合荆豆凝集素，提示具备成熟内皮细胞特性。③在Ⅰ型胶原凝胶上两种细胞增殖力均旺盛，与平滑肌细胞以3：1～4：1的比例种植在Ⅰ型胶原凝胶培养一段时间后，内皮前体细胞可从平滑肌细胞处得到支持，形成血管样网络结构。④共培养1周后，CD31与vWF阳性细胞即内皮前体细胞分化而来的内皮细胞互相连接，形成环形结构。结论：内皮前体细胞和平滑肌细胞以3：1～4：1共培养的模式可以促进微血管样结构的形成。
- 谢尚喆刘水方宁涛高红阳王松梅潘銮凤
- 关键词：内皮前体细胞平滑肌细胞血管组织工程
- 丹参多酚酸盐体外抗肿瘤作用研究被引量：15
- 2008年
- 目的:研究丹参多酚酸盐体外抗肿瘤的作用,探讨其可能机制。方法:采用MTT比色法测定注射用丹参多酚酸盐体外对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞、人肺腺癌细胞株SPC-A-1细胞、B淋巴瘤细胞株Raji细胞和急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞4种肿瘤细胞株增殖的影响;采用流式细胞仪检测细胞周期的改变及细胞凋亡情况;采用吉姆萨染色及吖啶橙荧光染色观察细胞形态变化。结果:注射用丹参多酚酸盐对SMMC-7721、SPC-A-1、Raji、HL-60细胞增殖均有显著的抑制作用,且呈时间和剂量依赖关系;可诱导SMMC-7721细胞阻滞于S期继而发生细胞凋亡;可观察到细胞逐渐凋亡形态。结论:注射用丹参多酚酸盐有较强的体外抗肿瘤作用,可能是通过作用于细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡来发挥的。
- 沈云婕王松梅朱珺潘銮凤
- 关键词：丹参丹参多酚酸盐抗肿瘤作用
