内蒙古大学生命科学学院哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室 作品数:236 被引量:634 H指数:11 相关作者: 张锁链 王利民 关泽红 杨东山 焦泽华 更多>> 相关机构: 内蒙古农业大学动物科学与医学学院 中国农业大学动物医学院 内蒙古农业大学生物工程学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 内蒙古自治区自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 医药卫生 化学工程 更多>>
转卵泡抑制素基因对绵羊肌源性细胞中肌肉抑制素基因的调控 被引量:2 2013年 【目的】构建骨骼肌特异表达目的基因卵泡抑制素(follistatin,FST)的真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red,分别转染到不同细胞系中,检测FST及下游基因在RNA和蛋白水平的表达情况,同时测定骨骼肌特异启动子SP和α-actin的启动效率,以研究FST的特异表达对肌肉发育的影响。【方法】利用脂质体分别将真核表达载体pCFCDs-red和pSPFCDs-red转染到绵羊胎儿成纤维细胞(SFFCs)、骨骼肌卫星细胞(SMSCs)和SMSCs诱导肌管中,获得转基因细胞;对获得细胞的生长状况、细胞周期、细胞形态大小以及目的基因和下游基因的表达情况,分别用流式细胞仪、实时定量PCR和western blotting等方法进行检测分析。【结果】①转基因细胞系的生长趋势与非转基因细胞相似,转基因SMSCs细胞增殖的速度高于转基因SFFCs细胞;②流式细胞仪分析表明,转基因细胞系转染后70%以上细胞均处于G0/G1期,保持旺盛的分裂能力、具有单一峰值、细胞的整倍性好、细胞电子体积显著增大;③实时定量PCR及western blotting检测结果表明,转基因细胞系中FST的RNA及蛋白水平相比非转基因细胞系均上调;④转基因SMSCs和肌管相比转基因SFFCs细胞的FST表达量高,转pSPFCDs-red转基因细胞中FST的表达水平比转pCFCDs-red细胞系高。【结论】骨骼肌特异性启动子SP及α-actin能够在SMSCs及肌管中有效启动FST目的基因的表达,且在肌管中具有较高的表达量,SP启动子的启动效率较高于α-actin。在肌源性细胞中,FST的上调可以引起MSTN蛋白水平的下调,FST对骨骼肌细胞的生长发育具有一定促进作用。 岳群华 袁建龙 郝斐 靳木子 王景园 杨文亮 刘东军 仓明关键词:FST 骨骼肌卫星细胞 肌管 马鹿X/Y精子分离及人工授精技术研究 被引量:3 2009年 对马鹿X/Y精子进行分离、冷冻保存和人工授精,探讨马鹿鲜精保存运输、精子分离以及性控冻精的受胎及后代性别控制准确率。结果表明:①马鹿鲜精中加入三联抗生素、18℃恒温保存最有利于精子活力的保持。②马鹿鲜精死精率与X/Y精子分离速度有明显相关性,死精率越低,分离速度越快。③来自同一马鹿供体的3组样品分离精子解冻后活力(0.61 vs 0.60 vs 0.65)及4h时活力(0.30vs0.30vs0.32)无显著差异(P>0.05)。④应用马鹿性控冻精对80只发情母鹿进行子宫角深部输精,有55只母鹿妊娠期满产下仔鹿,情期受胎率67.5%,均为雄性,性别控制准确率100%。结论:分离马鹿X/Y精子的冷冻保存、人工授精,在技术上已达到产业化应用水平,通过进一步改善后,可以大规模推广应用。 胡树香 王建国 刘树江 张立民 周文忠 孙伟 钱松晋 李煜 李喜和关键词:马鹿 精子分离 人工授精 性别控制 牛早期胚胎发育中差异基因的表达研究 2009年 利用mRNA差异显示技术成功筛选到牛早期胚胎差异表达的3个基因,即calm3、trm112l和clip1,并通过RT-PCR技术检测了各基因在卵母细胞、8细胞期和囊胚期的表达情况。结果显示,在卵母细胞和8细胞期胚胎,基因calm3和trm112l的表达量无显著性差异,而在囊胚期的表达量与前两个时期的表达量存在显著性差异,推测这两个基因在牛胚胎发育过程中的表达可能属于母型调控,提示该基因在卵母细胞成熟和合子基因激活中起一定作用。基因clip1在牛卵母细胞、8细胞期和囊胚期的表达量均无显著性差异,可能既存在母型调控又存在合子型调控。基因calm3、trm112l和clip1在牛早期胚胎发育过程中mRNA表达量存在时间性差异,可能与其参与不同的生理活动有关。 张鑫 陈苏仁 栗雪冰 刘东军 仓明关键词:胚胎发育 胚胎 基因 毛囊特异性表达Cre酶基因载体的构建 本文利用绵羊KAP6-1启动子构建毛囊特异性表达Cre酶的真核表达载体,为利用Cre/LoXP系统删除目的基因提供条件.研究表明:表达载体pIRES2-KAP6.1-Cre-EGFP可以在毛囊细胞中特异性表达Cre酶,进... 王靖 李洋 连梦瑶 王彦凤 王志钢 刘东军关键词:基因启动子 真核表达载体 文献传递 不同品种肉羊胚胎移植效率的研究 以无角多赛特、萨福克、德克赛尔、东福利生纯种肉用绵羊为供体,以内蒙古小尾寒羊为受体,利用辅助生殖技术对纯种群体进行扩繁,并对不同品种肉羊的超排及胚胎移植效果进行了比较.结果显示,无角多赛特和萨福克的平均超排胚胎数明显高于... 雪莲 任俊光 薛晓先 廛洪武 杨金民 旭日干关键词:肉用绵羊 胚胎移植技术 超数排卵 产羔率 腹腔镜技术 文献传递 牛和小鼠胎儿成纤维细胞混合制成的饲养层对牛胚胎干细胞的体外培养 被引量:1 2012年 【目的】建立适合的牛胚胎干细胞培养环境,保持其未分化状态,保证细胞的全能性。【方法】分别培养小鼠胎儿成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast,MEF)和牛胎儿成纤维细胞(bovine embryonic fibroblast,BEF),用丝裂霉素C处理两种成纤维细胞分别计数后按1﹕0、1﹕1、2﹕1、1﹕2和0﹕1的比例制成混合饲养层,观察牛胚胎干细胞的生长状态,并对生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞进行碱性磷酸酶,OCT4和SSEA-1免疫组化检测,OCT4、SOX2、NANOG mRNA表达RT-PCR检测、体外分化形成拟胚体等试验。【结果】①生长在混合饲养层上的牛胚胎干细胞比单独生长在小鼠或牛胎儿成纤维细胞饲养层的结构致密、与滋养层界限明显;②小鼠胎儿成纤维细胞和牛胎儿成纤维细胞在1﹕1比例混合下牛胚胎干细胞克隆结构致密、显著堆积且边缘轮廓清晰优于其它比例组合;③获得的牛胚胎干细胞AKP染色及OCT4、SSEA-1抗原表达均成阳性,分别在体外分化培养形成了拟胚体。【结论】小鼠和牛胎儿成纤维细胞在以1﹕1的比例混合下制成的饲养层可更好地支持牛胚胎干细胞的体外培养,获得的克隆形态最好。 丛姗 王瑞 温建勋 郝斐 李硕 梁浩 刘东军关键词:胚胎干细胞 成纤维细胞 血管内皮生长因子对牛早期胚胎发育的影响 被引量:1 2006年 为了探明血管内皮生长因子VEGF对牛体外受精胚胎早期发育的影响,本试验采用了成分明确的体外发育培养系统.通过在体外发育培养液中分别添加0、1、5、10 ng/mL的VEGF,对868枚胚胎的发育能力进行检测.研究结果显示:对照组与添加1 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL VEGF的各实验组卵裂率分别为61.99%、75.69%、76.81%、68.92%;8-细胞期发育率分别为51.82%、61.21%、65.41%、63.40%;囊胚期发育率分别为27.74%、24.85%、23.90%、22.88%;囊胚孵化率分别为5.11%、4.85%、5.66%、3.27%.添加1、5、10 ng/mLVEGF与对照组比较,卵裂率、8-细胞期发育率有所增加,囊胚期发育率和囊胚孵化率表现下降趋势,但实验组与对照组间上述几项发育指标差异均不显著(P>0.05). 李海军 仓明 王立民 刘东军 旭日干关键词:血管内皮生长因子 胚胎发育 同期发情及内窥镜输精技术在肉羊生产中的推广应用 被引量:1 2012年 为促进同期发情及腹腔内窥镜输精技术在肉羊产业中的推广应用,达到一年两产或两年三产的目的,进而改变肉羊产业的生产方式及经济结构,在繁殖及非繁殖季节对内蒙古地区本地杂交羊进行同期发情及腹腔内窥镜输精处理。繁殖季节与非繁殖季节的发情率均为93%以上,差异不显著(P>0.05)。部分具有小尾寒羊血统的杂交羊同期发情处理后的第6天手术检查黄体,统计排卵率2.45个,只和1.68个,只。但是腹腔内窥镜输精的受胎率显著高于人工授精的受胎率。 焦泽华 王建国 王小卫 莫德日乐吐 于险峰关键词:同期发情 推广应用 原始卵泡发育启动的影响因素 被引量:2 2007年 原始卵泡发育的启动是卵泡发育过程中的一个重要阶段。H1foo等基因可能对该过程具有调节作用。生长因子可能促进原始卵泡向初级卵泡的转化。笔者还介绍了2种用于研究原始卵泡活化的模型。 李轲涵关键词:原始卵泡 免疫外科法制备牛供体细胞核胞体及其核移植研究 2009年 本研究利用自制的兔抗牛脾细胞免疫血清裂解供体细胞膜而获得核胞体,结果表明,自制的免疫血清可以成功的裂解供体细胞膜而获得核胞体。将该法制备的核胞体应用于牛体细胞核移植的胞质内注射中,从而为核移植中供体细胞核胞体的获得提供一种新的思路。在比较不同供体细胞对重构胚发育的影响时,结果表明,颗粒细胞与耳成纤维细胞构建的重构胚卵裂率没有显著差异(62.62%versus67.89%,P>0.05),囊胚率也没有明显的差异(23.88%versus18.92%,P>0.05);在4℃低温冷藏一定时间的供体细胞与未经冷藏的供体细胞,其卵裂率和囊胚率都没有显著性差异(63.34%versus62.03%;26.67%versus24.45%,P>0.05);同样,耳成纤维细胞也得到相同的结果(70.76%versus66.67%;21.74%versus19.56%,P>0.05)。颗粒细胞构建的重构胚在注核后3~5h进行激活较1~3h有更高的卵裂率,表现出显著性差异(73.91%versus56.52%,P<0.05),囊胚率无显著性差异(23.53%,versus15.38%,P>0.05)。 杨利军 李瑶 黄翔华 李云霞 赵宇航 李煜关键词:供体细胞 体细胞核移植