浙江大学动物科学学院浙江省动物预防医学重点实验室
- 作品数：54 被引量：126H指数：6
- 相关作者：杜爱芳杨怡谢珲黄艳时玉菲更多>>
- 相关机构：西南大学动物科技学院青海大学省部共建三江源生态与高原农牧业国家重点实验室青海大学农牧学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省重大科技专项基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生环境科学与工程更多>>
- 检测猪弓形虫ROP14抗体间接ELISA方法的建立被引量：2
- 2020年
- 为丰富和完善弓形虫病的检测方法,本试验基于弓形虫棒状体蛋白14(TgROP14)建立了间接ELISA检测方法。构建原核表达载体pET30α-ROP14,转化至大肠杆菌BL21中,诱导表达并纯化获得TgROP14重组蛋白,通过SDS-PAGE和Western blot试验验证其纯度及免疫原性。利用纯化透析后复性的rTg-ROP14建立猪弓形虫病间接ELISA检测方法,并对反应中各项条件进行了优化。结果表明最佳检测条件为:抗原包被量2μg/孔,血清稀释倍数为1∶20,封闭剂为5%脱脂奶粉,血清作用时间为60 min,二抗稀释倍数为1∶1 000,二抗作用时间为60 min,TMB作用时间为20 min,临界值为0.728。该方法敏感性为1∶80,批内批间重复试验变异系数均小于10%,重复性较好;使用该方法检测猪繁殖与呼吸综合征(美洲型)阳性血清、猪O型口蹄疫阳性血清、猪A型口蹄疫阳性血清和猪瘟阳性血清均未见交叉反应,特异性较好。利用该方法对来自浙江省各个地区的436份猪血清样品进行检测,同时使用商品化的间接血凝试剂盒进行验证,符合率为72.7%(317/436)。综上所述,本试验建立的间接ELISA方法可用于临床样品的检测,为猪弓形虫病的血清流行病学调查提供了依据。
- 黄冶川阳毅敏潘灵韬庄浩瀚陈学秋杨怡杜爱芳
- 关键词：弓形虫间接ELISA
- 副溶血弧菌的Ⅲ型分泌系统被引量：8
- 2009年
- 副溶血弧菌是一种嗜盐性革兰氏阴性短杆菌,主要引起食物中毒性肠胃炎,还可引起水生动物疾病。除了耐热直接溶血毒素和耐热直接溶血相关毒素外,近年发现的副溶血弧菌两套Ⅲ型分泌系统也与该菌的致病性密切相关。Ⅲ型分泌系统1位于染色体1上,主要贡献对宿主细胞的细胞毒性,介导宿主细胞的自体吞噬作用,最后导致细胞死亡。Ⅲ型分泌系统2位于位于染色体2的毒力岛上,具有肠毒性。本文扼要介绍副溶血弧菌Ⅲ型分泌系统的组成、功能及相关转录调控机制。
- 俞盈吴蓓蓓方维焕
- 关键词：副溶血弧菌
- 弓形虫多表位PLGA纳米疫苗的研究
- 2024年
- 构建弓形虫多表位PLGA纳米疫苗并评估其可行性,预测弓形虫TgMIC3蛋白的B、T淋巴细胞优势抗原表位,联合抗原表位SAG1((238-256))、GRA7((20-28))和AS15,构建出新型多表位肽,用生物信息学工具对其理化性质、三级结构和分子对接能力等特征进行分析;原核表达并纯化多表位重组蛋白(multi-epitope protein, MEP),通过Western blot鉴定纯化效果;搭建MEP-PLGA纳米递送体系,对纳米颗粒进行表征。结果表明,多表位肽为亲水性蛋白非过敏原,具有一定抗原性,抗原表位均呈现在蛋白表面,能与MHC分子H-2-Dd稳定结合;可在BL21(DE3)大肠埃希氏菌表达系统中稳定表达,并能被特异性抗体所识别;构建的MEP-PLGA纳米递送体系包封为54.42%,纳米颗粒饱满,大小均一。成功设计并构建出弓形虫多表位PLGA纳米疫苗,为弓形虫新型纳米疫苗的研发奠定了基础。
- 张飞跃伍孟琛吴海燕马光旭吴飞杜爱芳杨怡
- 关键词：弓形虫
- 浙江及周边地区猪流行性腹泻病毒S基因分子特征分析被引量：3
- 2018年
- 对2013年4月至2017年4月间浙江省及周边24个地区共282份病料进行猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、轮状病毒A型(porcine group A rotavirus, GARV)、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCo V)和猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus, TGEV)等病原的检测,并选取其中的16份PEDV阳性样品进行S基因克隆和序列分析。结果显示:PEDV的检出率为64.89%(183/282),GARV为0.35%(1/282),PDCo V为4.25%(12/282),而未检出TGEV;PEDV在11月1日至次年4月1日间的累计检出率为74%,其余时间段的累计检出率为26%。对PEDV的S蛋白进行分子演化分析表明,PEDV可分为3个群,其中16份阳性样品均位于Ⅲ群,与疫苗毒株CV777、SM98和DR13株相比,核苷酸同源性为93.6%～95.2%,氨基酸同源性为92.4%～94.9%。16份PEDV阳性样品与中国PEDV的CV777疫苗毒株相比,形成了3个新的N-糖基化位点,破坏了1个N-糖基化位点。综上表明,当前仔猪腹泻主要病原为PEDV变异株,防控猪流行性腹泻需要注意季节的变化,也需要加快流行株疫苗的开发。
- 单颖刘子琦施杏芬李国炜陈聪罗浩刘亚杰方维焕李肖梁
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因分子特性系统发育分析抗原性分析
- 牛磺酸缓解镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1途径被引量：3
- 2018年
- 为探索牛磺酸对镉诱导的鸡胚睾丸细胞氧化损伤的缓解作用,采用18日龄鸡胚睾丸细胞培养模型,通过形态观察、细胞活力检测、生化指标检测、5-溴脱氧尿嘧啶核苷(5-bromo-2-deoxyuridine, BrdU)掺入、原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP nick end labelling, TUNEL)、蛋白质印迹法、荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)和免疫荧光染色等方法,从细胞增殖、内质网应激、线粒体凋亡、核转录因子E2相关因子2/血红素加氧酶-1(nuclear factor-erythroid 2 related factor-2/hemeoxygenase-1, Nrf2/HO-1)信号通路等方面研究其作用机制。结果显示,镉导致鸡胚精原细胞发生了氧化损伤。与对照组相比,镉处理组精原细胞出现了细胞核固缩、空泡化和染色质周缘化等变化,且镉处理后的细胞活性和精原细胞数目显著降低,过氧化氢、丙二醛和活性氧水平显著升高,超氧化物歧化酶活性显著降低,细胞增殖能力显著降低,凋亡细胞显著增多,内质网应激相关基因(GRP78和XBP-1)和凋亡相关基因(Cyt C、p53和caspase 9)mRNA表达水平显著上升,Nrf2、p-Nrf2蛋白的表达和HO-1mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。然而,牛磺酸与镉联合处理后,镉引起的氧化损伤得到明显缓解,鸡胚精原细胞数目和睾丸细胞活性回升,抗氧化水平和内质网应激得到改善,凋亡细胞显著减少,Nrf2蛋白表达和细胞增殖能力趋于正常。以上结果说明,牛磺酸一方面通过恢复氧化系统与抗氧化系统平衡,另一方面通过抑制睾丸细胞凋亡和恢复睾丸细胞增殖,缓解镉引起的生殖毒性。
- 柳梦琪张广路郭长权杨婷宇米玉玲
- 关键词：镉牛磺酸血红素加氧酶-1
- 隐孢子虫LAMP检测方法的建立及其在牦牛中的应用被引量：6
- 2018年
- 为了探索和建立隐孢子虫LAMP检测方法,以便能快速、简便检测牦牛隐孢子虫的感染情况,基于GenBank中牦牛源隐孢子虫18SrRNA基因序列,设计1组LAMP引物,优化并建立LAMP反应体系。对所建立的LAMP方法进行特异性、重复性、敏感性试验,并用该方法对牦牛的临床样本进行检测。结果显示,建立的LAMP方法特异性、重复性良好,其敏感性是套式PCR的8倍。LAMP方法与套式PCR临床检出率对比,符合率100%。表明成功建立了隐孢子虫的LAMP检测方法,该方法特异性和灵敏性良好,可以应用于牦牛粪便临床样本的检测。
- 王丹任玫吴飞常建军常建军康明康明
- 关键词：牦牛隐孢子虫环介导等温扩增RRNA基因
- 黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及间接竞争ELISA检测技术研究被引量：24
- 2015年
- 【目的】制备黄曲霉毒素B1单克隆(AFB1)抗体,建立间接竞争ELISA检测方法用于污染样品中AFB1的检测。【方法】用碳二亚胺法制备黄曲霉毒素B1的完全抗原AFB1-BSA后免疫Balb/c小鼠,经过细胞融合和克隆化筛选获得抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株。采用体内诱生腹水法制备抗体,通过间接ELISA方法分别测定抗体亚类和效价。经优化实验条件,建立稳定的间接竞争ELISA检测方法,并用于检测饲料样品中的黄曲霉毒素B1。【结果】获得4株稳定分泌抗AFB1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,选择3B9细胞株制备抗体,测定抗体亚类为Ig G1,效价为1:204 800,与黄曲霉毒素B2、G1、G2和M1的交叉反应率分别为2.2%、33.9%、1.8%和4.1%,与赭曲霉毒素A、伏马毒素和玉米赤霉烯酮几乎不存在交叉反应。以此单抗构建了AFB1间接竞争ELISA检测方法,在AFB1浓度为1.04-25.00μg/L范围内呈线性(R2=0.993 1),检测限为1.04μg/L,半数抑制率(IC50)为6.03μg/L,平均加标回收率在线性范围内可达85%-120%,变异系数均小于10%。【结论】通过饲料样品检测证实,该方法与进口ELISA试剂盒检测一致性良好,可用于实际样品中黄曲霉毒素B1的快速筛检。
- 谢珲章先王歆凡鹏程时玉菲方维焕
- 关键词：黄曲霉毒素B1单克隆抗体间接竞争ELISA
- 弓形虫蛋白激酶(TgPKA)调控虫体增殖的初步研究
- 弓形虫cAMP依赖性蛋白激酶(PKA)是一种在弓形虫无性生殖阶段表达的蛋白激酶,参与多种细胞信号转导通路,为探索其生物学功能,本研究构建弓形虫PKA基因(TgPKA)敲除转染质粒(PKA-5’UTR-3’UTR-PBLE...
- 孙洪超卓洵辉阳毅敏蓝丽华陈学秋杨怡郭筱璐杜爱芳
- 关键词：弓形虫PKA增殖
- 文献传递
- 浙江省重要蜱传病原体流行情况调查被引量：1
- 2023年
- 从浙江省杭州、宁波、温州、绍兴、湖州、嘉兴、金华、衢州、台州和丽水等10个城市共采集蜱589只,通过形态学特征和分子生物学方法鉴定其种属,利用PCR方法检测每个蜱样品中是否含有巴贝斯原虫、立克次体、无形体和埃立克体4种病原体的DNA,利用双重荧光定量PCR方法检测蜱是否携带非洲猪瘟病毒,运用最大似然估计法计算感染率并进行遗传进化分析。结果显示,本试验采集的蜱主要为血红扇头蜱和长角血蜱;5种蜱传病原体在浙江省优势蜱种中的流行率分别为巴贝斯原虫(5.09%)、立克次体(9.85%)、无形体(7.81%)、埃立克体(1.70%)和非洲猪瘟病毒(0%);在样品中检测到微小巴贝斯虫、牛巴贝斯虫、黑龙江立克次体、日本立克次体、嗜吞噬细胞无形体和查菲埃立克体,还发现几种病原体未定种。
- 王钊陈学秋杜振东吴飞阳毅敏赵明秀杜爱芳
- 关键词：立克次体无形体埃立克体
- 2005-2008年浙江省生猪主产区猪戊型肝炎血清流行病学调查被引量：6
- 2009年
- 本研究旨在建立检测猪戊型肝炎病毒(HEV)感染的间接ELISA方法,并将其用于分析浙江省生猪主产区猪群的HEV感染状况。首先人工合成并原核表达了HEV ORF2蛋白的主要抗原表位区,免疫印迹显示表达产物对HEV抗体阳性的猪血清具有良好的反应性。以此纯化蛋白为包被抗原建立了猪血清中HEV特异性抗体的ELISA检测方法,检测结果显示其与商品化HEV抗体诊断试剂盒的检测符合率达91.5%。对2005-2008年采集自浙江省不同地区46个猪场的1330份血清进行了检测,有741份血清检测为猪HEV抗体阳性,平均阳性率为55.7%。其中2005和2006年HEV抗体阳性率分别为62.7%(175/279)和61.4%(301/490),明显高于2007年的43.1%(59/137)和2008年的48.6%(206/424)。同时,66-100日龄中猪的血清HEV抗体阳性率(58.2%,110/189)显著高于30-65日龄小猪(39.7%,73/184)和101-160日龄大猪(44.1%,83/188)。从猪场水平来看,仅有3个猪场未检测到HEV抗体,场阳性率93.2%。结果表明本研究建立的ELISA方法切实可行,检测结果显示浙江省猪场中HEV感染相当普遍。
- 帅江冰张晓峰徐晶靓陈宁方维焕
- 关键词：猪戊型肝炎病毒间接ELISA血清学调查
